超声造影联合血清SMURF1检测诊断甲状腺癌的临床分析

目的探讨超声造影联合血清Smad泛素调节因子1(SMURF1)检测对甲状腺癌的诊断价值。方法纳入东南大学附属中大医院溧水分院2019年2月至2020年2月收治的144例疑似甲状腺癌患者为研究对象,根据组织病理学结果,将其分为甲状腺癌组(76例)和良性组(68例)。所有患者均行超声造影检查及血清SMURF1水平测定;分析超声造影参数、血清SMURF1单独检测及二者联合检测对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组超声造影参数峰值强度(PI)、平均灌注强度(SImean)及最大灌注强度(SImax)均低于良性组,SMURF1 mRNA水平高于良性组(P<0.05)。超声造影参数SImax诊断甲状腺癌的敏感度为82.89%,特异度为72.06%,准确度为77.78%,Kappa值为0.552。血清SMURF1诊断甲状腺癌的敏感度为65.79%,特异度为94.12%,准确度为79.17%,Kappa值为0.589。SImax联合SMURF1诊断的敏感度、特异度、准确度、Kappa值分别为97.37%、85.29%、91.67%、0.832,均高于SImax、SMURF1单独诊断(P<0.05),且二者联合预测预后的AUC为0.927,明显高于二者单独诊断(Z联合vs.SImax=3.999,P<0.001;Z联合vs.SMURF1=3.270,P=0.001)。结论超声造影联合血清SMURF1检测可提高甲状腺癌的诊断效能,可在保证甲状腺癌患者诊断效率的前提下,避免临床甲状腺癌患者的过度诊断。

Smad泛素化调节因子2在转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞活化中的作用及其分子机制

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1h组、TGF-β1 2h组和TGF-β1 6h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2mRNA和蛋白的表达水平。MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Smurf2siRNA)。Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)、Smad2和Smad3mRNA和蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05)。与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2siRNA组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平均升高(P<0.05),而Smurf2siRNA组和TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平均明显下降(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2siRNA组细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而Smurf2siRNA组和TGF-β1组细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组细胞中Smad2和Smad3mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Smurf2可能通过泛素化降解Smad7和SnoN,参与调控TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥其促进TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化中Smad5及Smurf1基因表达的影响

目的研究在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化中Smad6信号干扰对Smad5、Smurf1基因表达的影响。方法培养小鼠骨髓MSCs,并分为3组:A组为对照细胞;B组细胞用携带绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体病毒转染+BMP-2骨向诱导;C组细胞用Smad6重组RNA干扰载体转染+BMP-2诱导。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率接近100%。与A组比较,BMP-2诱导24h显著提高了B组Smurf1 mRNA水平(P<0.01);而Smad6信号干扰在两个时间点则进一步提高了C组Smurf1 mRNA水平,并显著高于B组(P<0.01)。C组磷酸化的Smad5(pSmad5)和Smurf1水平在两个时间点也显著高于B组(P<0.01),而Smad5蛋白水平则未受影响。结论在BMP-2诱导的MSCs骨向分化中,Smad6 RNA干扰可促进Smad5磷酸化,并引起Smurf1基因表达代偿性增高。

Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件，筛选最佳siRNA干扰片段，进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默，为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy，AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells，RTECs），并以脂质体LipofectamineTM 2000为转染介质，将Smurf2 siRNA转染入RTECs；通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件，转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响；同时，用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时，转染效率最高，为70%～80%；Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显；与正常组相比，转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P〈0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件，其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。

Smad泛素化调节因子2对人胚胎眼巩膜成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路和I型胶原表达的影响

目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)分泌Smads蛋白、I型胶原α1(COLIA1)的影响,探讨泛素化在巩膜重塑中的作用。方法HFSFs复苏并稳定传代后,免疫组化(IHC)法检测细胞中Smurf2的表达。将HFSFs细胞分别设空白对照组、TGF-β1组(加入10 ng/mL TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 ng/mL TGF-β1+Control siRNA)及Smurf2 siRNA转染组(10ng/mL TGF-β1+Smurf2 siRNA)。Western Blot法检测COLIA1蛋白表达水平。RT-PCR法检测各组细胞中Smurf2、Smad2、Smad3和Smad7的mRNA表达水平。结果IHC结果显示,HFSFs中有Smurf2蛋白表达。TGF-β1诱导HFSFs中COLIA1蛋白显著性高表达,而当Smurf2被抑制时,COLIA1蛋白表达受抑制。与空白对照组比较,Smad7 mRNA表达水平呈上升趋势,差异有统计意义(P<0.05),但Smad7蛋白表达水平与PCR结果不完全相同;各培养组中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平,与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Smurf2表达于HFSFs细胞中,且随着Smurf2表达减少,HFSFs细胞中Smad7蛋白含量呈上升趋势,COLIA1含量呈下降趋势。提示Smurf2可能通过作用于TGF-β1/Smads信号通路参与了巩膜重塑过程。

IRF5通过MyD88/TGF-β1/Smads信号通路介导AngⅡ诱导巨噬细胞的极化和炎症反应

目的探讨转录因子干扰素调节因子5(IRF5)对RAW264.7巨噬细胞极化的调控机制。方法小鼠巨噬细胞(RAW264.7)被分为正常对照组、血管紧张素II(Ang II)处理组,IRF5 siRNA转染组,Ang II+IRF5 siRNA转染组,共4组。2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定巨噬细胞活性氧簇(ROS)的水平;免疫荧光染色方法检测细胞一氧化氮合酶(i NOS)和IRF5的表达;试剂盒检测巨噬细胞丙二醛(MDA)含量;qRT-PCR和Wetern blotting分别检测巨噬细胞iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IRF5 mRNA表达水平,以及IRF5、髓样分化因子88(MyD88)、转化生长因子(TGF-β1)、Smad家族蛋白2/3(Smad-2/3)、磷酸化Smad家族蛋白2/3(p-Smad-2/3)蛋白的表达水平;ELISA法检测巨噬细胞培养上清炎症因子水平TNF-α、白介素12(IL-12)、IL-10含量变化。结果IRF5干扰载体(IRF5 siRNA)显著抑制Ang II诱导的巨噬细胞中ROS的水平(P<0.05)和MDA含量(P<0.01);IRF5 siRNA明显抑制Ang II促进巨噬细胞M1亚型的极化,IRF5 siRNA转染后可显著抑制Ang II诱导的巨噬细胞iNOS和TNF-α的表达,与此同时,IRF5表达的减少降低了MyD88/TGF-β1/Smads信号通路的活性;此外,IRF5 siRNA显著减弱Ang II组巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-12的分泌(均P<0.01),而增加了IL-10含量(P<0.001)。结论IRF5通过TLR-MyD88/TGF-β1/Smads信号通路调控巨噬细胞极化和炎症反应的诱发。

遍在蛋白-蛋白连接酶对骨形态发生蛋白/Smad通路的调节

Smad通路是转化生长因子(TGF)-β超家族包括骨形态发生蛋白(BMP)信号转导的经典通路。Smad复合物的积聚导致其基因转录的过度活化,因此Smad的降解对Smad通路的调控至关重要。遍在蛋白-蛋白水解酶复合体通路降解Smad,对调控TGF-β信号转导发挥重要的调节作用。遍在蛋白-蛋白连接酶(Smurf)作为这一系统的核心,参与调控BMP和TGF-β两个家族的分子信号转导过程。本文就TGF-β/Smad通路、遍在蛋白酶体途径、遍在蛋白-蛋白连接酶Smurf家族及其结构、遍在蛋白-蛋白连接酶Smurf-1对Smad信号通路的调节等研究进展作一综述。

Smad泛素化调节因子与组织修复及器官纤维化的研究进展

泛素(ubiquitin)因其在整个生物界广泛存在而得名。泛素依赖性的蛋白质降解系统通过降解缺陷无用的蛋白质和失活的各种细胞器,影响着机体的染色体结构与功能、遗传信息的复制与表达、细胞信号传导与调节等常见生命现象。转化生长因子β(transforming growth factor β)及TGF-β/Smad信号传导通路在组织修复及器官纤维化过程中起重要作用。TGF-β/Smad信号传导调节机制复杂,其中探讨TGF-β/Smad信号传导通路的终止机制是近年研究热点。随着泛素-蛋白水解酶复合体可阻断TGFB/Smad信号分子作用的发现,一类特异性介导Smads泛素化降解的关键泛素酶—Smads泛素化调节因子(Smad ubiquitination regulatoryfactors,Smurfs)逐渐为学者所重视。本文对Smurfs与组织修复、纤维化过程中的生理及病理研究进展作如下综述。

Smad泛素化调节因子和Arkadia在大鼠肺纤维化中的作用研究

目的探讨Smad泛素化调节因子(Smurf)和Arkadia在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化形成中的作用及可能的分子机制。方法将24只无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型7 d组、模型14 d组、模型28 d组,每组6只。模型组大鼠气管内滴入博莱霉素(10 mg/kg)建立肺纤维化动物模型,对照组气管内滴入等体积0.9%氯化钠注射液。于造模后第7、14和28天分批处死大鼠。应用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察肺组织炎症及纤维化情况;应用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Arkadia、Smurf1、Smurf2、Smad7、Ski和转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)的表达。结果 HE染色和Masson染色显示肺纤维化模型建立成功。模型7、14、28d组大鼠肺组织COL1A1蛋白表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型7、14、28 d组大鼠肺组织Arkadia mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组,Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(均P<0.05)。模型7 d组大鼠肺组织Smad7和Ski蛋白表达水平明显高于对照组,随后Smad7和Ski蛋白表达水平随时间延长而逐渐降低,至第28天均低于对照组水平(均P <0.05),但各组间Smad7和Ski mRNA表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。模型7、14、28 d组大鼠肺组织TβRⅠmRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组[(0.340±0.056)、(0.520±0.021)、(1.014±0. 190)比(0.244±0.033);(0.453±0. 033)、(0.617±0. 060)、(0. 720±0. 038)比(0.309±0.031)],差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 Smurf2和Arkadia均参与了博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化形成;Arkadia可能通过泛素化降解蛋白途径实现对Smad7和Ski蛋白表达的下调,促进肺纤维化形成。

SMURF2/β-catenin轴促进张力条件下人牙周膜细胞成骨分化

目的:探究Smad泛素化调节因子2(SMURF2)在循环牵张力诱导人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化中的作用和机制。方法:对hPDLCs施加循环牵张力刺激后使用qRT-PCR检测SMURF2的表达和成骨相关基因的表达,使用western blotting检测SMURF2和经典WNT信号相关分子的表达,通过ALP染色检测hPDLCs的ALP活性,并结合成骨相关基因的表达评估hPDLCs的成骨分化。通过使用小干扰RNA沉默hPDLCs中的SMURF2基因探究SMURF2对牵张力诱导的hPDLCs成骨分化和经典WNT信号的影响。结果:循环牵张力刺激hPDLCs后SMURF2、ALP、OPN、OSX、COL-1和β-catenin表达升高,ALP活性也增强。沉默SMURF2基因后,hPDLCs的ALP活性减弱,ALP、OPN和OSX基因表达水平下降,β-catenin蛋白下降,但GSK-3β蛋白无变化。结论:SMURF2可能通过经典WNT信号通路促进循环牵张力诱导的hPDLCs成骨分化。

肝癌患者术后肺部感染病原菌及TGF-β1/Smads信号通路蛋白和Th17/Treg水平

目的探讨肝癌患者术后肺部感染病原菌及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路蛋白及辅助性T细胞17(Th17)调节性T细胞(Treg)水平。方法回顾性收集2021年9月-2023年9月西南医科大学附属医院收治的117例进行肝癌手术治疗的肝癌患者的临床资料,依据术后肺部感染情况将患者分为感染组(n=31)与未感染组(n=86);分析感染组患者的病原菌,通过酶联免疫吸附试验测定两组血清白细胞介素(IL)-6、IL-1β及TGF-β1水平,流式细胞仪测定外周血Th17及Treg细胞比例,免疫印迹法测定Smad2、Smad3、Smad6、Smad7、TGF-β1蛋白的表达。结果在31例肺部感染患者中,共培养分离病原菌53株,其中革兰阴性菌34株,革兰阳性菌11株,真菌8株;感染组患者血清IL-6、IL-1β、TGF-β1、TGF-β1蛋白、Smad2、Smad3、Th17细胞比例及Th17/Treg分别为(67.43±12.60)pg/ml、(42.56±8.71)μg/L、(301.29±54.13)pg/ml、13.26±2.05、35.21±4.67、42.89±7.91、(4.18±0.89)%及1.69±0.28高于未感染组(P<0.05),而Smad6、Smad7和Treg细胞比例分别为18.53±3.14、7.44±2.06和(2.47±0.35)%均低于未感染组(P<0.05)。结论肝癌患者术后肺部感染会介导炎性因子释放而激活TGF-β1/Smads信号通路,并引起Th17/Treg失衡。

补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达影响研究

目的:通过研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白的表达,揭示摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾中药作疗效的比较。用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达。结果:RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf2的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模空组Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低。用药12周后,与模空组比较,补肾高、低剂量组、盖天力组可明显上调Smurf2 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平。其中补肾高剂量组上调幅度大于补肾低剂量组。结论:①正常大鼠肾组织中Smurf2可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达的异常变化有关;③补肾中药通过调控肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。

糖尿病大鼠肾组织Smurf2表达及其与SnoN蛋白降解的关系

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)和核转录共抑制因子SnoN在糖尿病(DM)大鼠肾组织的动态表达,并初步探讨Smurf2在DM大鼠肾组织SnoN蛋白表达变化中的作用。方法:链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射复制DM大鼠模型,随机分为DM2、4、8、12、16和24周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6)。生化方法测血糖、血肌酐(Scr)及24h尿蛋白量,计算肾脏指数;HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫荧光染色检测胰腺组织胰岛素、肾组织Smurf2和SnoN的表达;Westernblotting检测肾皮质Smurf2、SnoN、转化生长因子β1(TGF-β1)和磷酸化Smad2(p-Smad2)蛋白的表达;RT-PCR检测肾皮质Smurf2和SnoN的mRNA。结果:(1)DM各组血糖、血Scr、24h尿蛋白量和肾脏指数均高于正常对照组,正常胰腺组织胰岛素表达强,DM大鼠胰岛素表达则明显减弱;(2)Smurf2和SnoN蛋白均主要表达于肾小管上皮细胞,从DM2周始各DM组Smurf2、TGF-β1和p-Smad2蛋白表达均多于正常对照组,DM4周起各DM组SnoN蛋白均少于正常对照组,DM各组SnoNmRNA与正常组相比无显著差异,Smurf2mRNA随病程进展逐渐增多;(3)Smurf2和SnoN蛋白的表达量呈显著负相关(r=-0.88,P<0.01)。结论:在糖尿病肾病发病过程中SnoN蛋白的表达减少可能与Smurf2介导其泛素化降解有关。

胆道闭锁肝纤维化研究进展

胆道闭锁(BA)是严重危及婴幼儿生命健康的消化系统疾病之一,晚期肝脏纤维化是导致患儿死亡的主要原因。在胆道闭锁发病过程中,病毒感染可诱导一系列免疫和炎症反应,导致调节性T细胞(Treg细胞)减少,CD14表达增高,多种炎症通路以及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad2/3促纤维化通路被激活。激活的通路产生大量炎性介质损伤肝细胞和胆管细胞,释放各种促炎因子、氧代谢产物和细胞因子,进一步加重肝、胆系统损伤造成肝细胞内环境失衡,失衡的内环境伴随肝实质细胞、肝巨噬细胞、肝内聚集的炎性细胞等发生适应性变性、坏死、增生,导致肝星形细胞(HSCs)激活,HSCs转化为成纤维细胞,促进肝纤维化进程。免疫、炎症损伤、促纤维化通路是导致胆道闭锁肝纤维化肝硬化的三大重要因素。

胰腺导管腺癌中SMURF1基因表达水平的研究

目的探讨胰腺导管腺癌中Smad特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMURF1)基因表达水平的异常情况。方法以相应癌旁正常组织为对照,应用半定量RT-PCR方法检测31例胰腺导管腺癌组织中SMURF1 mRNA表达水平;应用Western blot方法检测相应标本中SMURF1蛋白水平的异常情况。结果在31例病例中,肿瘤组织SMURF1 mRNA表达高于相应癌旁正常组织的有20例,统计分析结果肿瘤组与对照组差异显著(P<0.01);其中19例中同时存在SMURF1蛋白的高表达(P<0.01)。结论胰腺导管腺癌中SMURF1 mRNA和蛋白表达水平升高,这可能是胰腺癌发生发展的另一新的分子机制。

甘草酸二胺对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及机制

目的:探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的作用及其机制。方法:以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为模型,在不同的时间点(7d、14d、28d)观察梗阻侧肾间质纤维化指数;致纤维化的转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况;肾皮质中与肾脏纤维化相关的Smurf2、Smad7信号蛋白等的mRNA及蛋白表达。结果:(1)随着梗阻时间的延长,肾间质纤维化程度逐渐加重,Smurf2基因和蛋白质明显上调,呈时间依赖性(P<0.01);Smad7蛋白呈时间依赖性下调(P<0.01),Smad7基因在各个时间点无明显变化;TGF-β1基因在UUO后第7d达高峰,此后逐渐下降,但仍然高于假手术组(P<0.01)。(2)甘草酸能改善UUO所致的肾间质纤维化程度(P<0.01),下调肾脏组织TGF-β1基因的表达(P<0.01);减少Smurf2基因和蛋白质的表达,同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子Smad7的表达(P<0.01)。结论:甘草酸二胺能保护UUO所致的肾间质纤维化损伤。其可能的作用机制为减少Smurf2核酸和蛋白质的表达,增加抗纤维化作用的Smad7蛋白表达;减少TGF-β1表达,阻止TGF-β信号传导,从而阻断肾间质的纤维化。

骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1 mRNA和蛋白表达的实验研究

目的通过研究摘除卵巢致骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白的表达,揭示摘除卵巢致骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的纳米钙补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12w,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾方剂(补中益气汤)作疗效的比较。用RT-PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达。结果RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf1的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模型组Smurf1 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低。用药12w后,与模型组比较,补肾高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显上调Smurf1 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平。其中补肾高剂量组上调幅度大于其他各用药组。结论①正常大鼠肾组织中Smurf1可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达的变化有关;③纳米钙补肾中药通过调控肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。

骨肉瘤与骨良性病变组织中Smurf1、BMP-2的表达及相关性分析

目的:研究Smad泛素化调节因子1(Smad ubiquitin regulatory factor-1,Smurf1)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在骨的良性病变及骨肉瘤组织中的表达及相关性,以此分析Smurf1蛋白在骨肉瘤的发生、侵袭、转移中的意义。方法:共收集骨组织标本120例,其中良性病变36例,骨肉瘤84例。免疫组化法检测标本中Smurf1和BMP-2含量,相关性分析采用Spearman等级相关分析法。结果:骨肉瘤组织Smurf1蛋白阳性表达明显高于良性病变组织[(0.786±0.214)vs.(0.583±0.183)],BMP-2蛋白表达水平则相反[(103.57±13.23)vs.(152.19±19.42)],差异均有统计学意义(P<0.05)。Smurf1与BMP-2在骨肉瘤组织中的蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.598,P<0.05)。结论:Smurf1可通过抑制BMP-2的表达来促进骨肉瘤的形成和发展。

Smurf1拮抗BMP-2对C2C12细胞的诱导成骨作用

目的研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响。方法通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响。同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化。结果Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达。尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降。结论Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用。

Smurf2与肺纤维化关系研究进展

Smad泛素化调节因子2(Smurf2)是E3泛素连接酶的一种。研究发现,Smurf2与肺纤维化的发生发展有一定关系,其可选择性作用于Smad蛋白,调节肺纤维化TGF-β1信号传导,进而调控肺纤维化的发展。本文主要就Smurf2与肺纤维化TGF-β1/Smad信号通路的关系研究进展做一综述。