湖北省南漳县中小规模猪场非洲猪瘟防控联合体探索实践

非洲猪瘟(ASF)对养猪业构成了严重威胁,是全球范围内养猪业面临的主要问题。为有效防控ASF,以湖北省南漳县ASF防控联合体建设为例,探索中小规模猪场的ASF防控新模式。该模式遵循“政府引导、业主自建、行业监管、专家指导”的防控联合体建设原则,以及加强监测预警、强化防控措施、创建合作机制的防控总体规划,利用地理优势和天然屏障,规划出疫病连片防控区,由政府引导中小规模生猪养殖场户组建ASF防控联合体。由政府出资在县界高速、国道、省道等入口处,建设畜禽车辆一级洗消中心,再由联合体成员共同出资在防控区内建设二级洗消中心。防控联合体内,统一防控策略,统一原料及生猪采购,统一防控管理,统一技术指导。防控联合体建设使南漳县ASF防控水平得到了提升,取得了显著的经济和社会效益。该防控联合体模式具有较好的应用推广前景,为中小规模猪场ASF防控和拓宽ASF无疫小区建设提供了新的工作思路。

中小规模生猪养殖企业非洲猪瘟无疫小区建设的探索

非洲猪瘟无疫小区建设是我国推行的对抗非洲猪瘟疫情的重要举措。该文就中小规模猪场非洲猪瘟无疫小区的建设所面临的诸多实施、配套、制度问题进行讨论。从实际的场区规划、洗消防控和制度建设出发,分析非洲猪瘟无疫小区建设的重点要点、申请非洲猪瘟无疫小区的常见问题,总结出适合中小规模生猪养殖企业建设非洲猪瘟无疫小区过程中的举措。

通心络对IL-1β介导的小型猪冠状动脉内膜增殖及5-HT诱发的冠状动脉痉挛的抑制作用

目的在体观察通心络抑制猪冠状动脉痉挛的作用及可能机制。方法选取16头小型雄性家猪,麻醉后进行左侧开胸手术,选择心脏左前降支及回旋支近端管腔外径大小近似的两处节段进行仔细分离,在血管外膜包裹吸附白细胞介素-1β(IL-1β,2.5μg)的纸巾,构建冠状动脉痉挛模型,2周后采用冠状动脉造影观察经导管冠脉内给予5-羟色胺(5-HT,10μg/kg)诱发冠状动脉痉挛情况。将成功诱发冠状动脉痉挛的12头小型猪随机分成两组,对照组6只(12个血管段),单纯喂养专用饲料;通心络组6只(12个血管段),喂养专用饲料和通心络〔1g/(kg.d)〕,连续喂养4周后停药1周,进行第2次造影并以同样方法进行诱发痉挛实验。造影结束后处死动物,截取包裹IL-1β的血管段,进行病理学检查,并采用RT-PCR方法测定各组手术处理血管段(Ras hom ologue,Rho)激酶mRNA表达,采用Western blot方法测定其底物肌球蛋白结合亚基磷酸化(myosin-binding subunit phosphorylation,MBS-P)的表达。结果冠状动脉造影显示,12头小型猪冠状动脉局部血管发生不同程度的管腔狭窄(20%～30%),5-HT能诱发其痉挛。第2次造影显示,对照组11血管段5-HT诱发痉挛阳性,1血管段5-HT诱发痉挛阴性。通心络组2血管段5-HT诱发痉挛阳性,10血管段5-HT诱发痉挛阴性。病理学检查,两组均可见不同程度的巨噬细胞聚集现象,通心络组与对照组比较管腔狭窄程度及内膜增殖明显减轻。对照组Rho激酶mRNA的表达及肌球蛋白磷酸酶(MLCP)的MBP-S水平明显上调,通心络组Rho激酶mRNA表达〔(71.5±2.4)%〕被抑制,与对照组〔(98.2±7.7)%〕比较差异有统计学意义(P<0.05),通心络组MBS-P的灰度值(16633±1390)明显降低,与对照组(25818±4745)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通心络具有明显抑制IL-1β介导的冠状动脉内膜增殖及5-HT诱发的冠状动脉痉挛的作用;抑制IL-1β包裹血管段细胞内Rho激酶mRNA表达,减少MBS-P表达可能是其作用机制之一。

通心络抑制白细胞介素1β介导的小型猪冠状动脉早期炎症反应及内膜增殖

目的探讨通心络对白细胞介素1β介导的小型猪冠状动脉早期炎症反应及内膜增殖的抑制作用及可能机制。方法24头小型猪随机均分为假手术组、模型组和通心络组。假手术组和模型组喂养普通饲料,通心络组喂养普通饲料＋通心络[1 g/（kg.d）]。2周后麻醉行左侧开胸手术,选择左前降支及回旋支近端管腔外径近似相同的两处节段进行仔细分离,假手术组在血管外膜包裹吸附生理盐水的纸巾,模型组和通心络组包裹吸附白细胞介素1β（2.5μg）的纸巾,术后继续以上喂养方法。2周后采用冠状动脉造影观察各组管腔狭窄情况。造影结束后处死动物,截取包裹血管段,进行病理学检查,并采用逆转录聚合酶链反应,测定各组手术处理血管段单核细胞趋化蛋白1、P选择素、E选择素、细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1 mRNA的表达。结果冠状动脉造影显示,模型组冠状动脉管腔20%~30%狭窄,病理学检查可见模型组内膜增殖、炎性细胞浸润,平滑肌细胞内膜下迁移。通心络组管腔狭窄程度、内膜增殖及炎性细胞浸润现象较模型组明显减轻。逆转录聚合酶链反应示通心络组单核细胞趋化蛋白1、P选择素、E选择素、细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1 mRNA表达强度低于模型组（P〈0.05）。结论通心络对白细胞介素1β诱导的冠状动脉炎症反应及内膜增殖具有明显的抑制作用。通过抑制细胞因子和粘附因子的表达可能是其主要作用途径。

小肠黏膜下层作为肌腱组织工程支架的评价

目的评价脱细胞小肠黏膜下层(SIS)的细胞毒性、亲水性、细胞黏附性等组织工程支架性能,为其作为肌腱组织工程支架材料提供实验依据。方法制备猪小肠黏膜下层,并进行光镜和扫描电镜观察。以不同浓度(100%、50%、25%、12.5%、0)的SIS浸提液培养兔肌腱细胞,采用MTT法测定1、3、5、7、9d时肌腱细胞的增殖率以评价SIS的细胞毒性。测定SIS的吸水率以评价其亲水性,并测定SIS与兔肌腱细胞黏附率以评价其细胞黏附性。结果光镜观察显示,SIS结构疏松,无细胞碎屑残留;扫描电镜见两个表面的纤维直径不同。MTT法检测显示,各浓度SIS浸提液的细胞毒性均为0～1级。冻干SIS吸水率在6h达饱和,饱和吸水率498.2%±15.0%;兔肌腱细胞在SIS光面和糙面的黏附率分别为53.49%±5.46%和61.45%±7.84%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。肌腱细胞在SIS上生长良好,部分细胞长入SIS内。结论SIS对肌腱细胞无毒性,细胞黏附性良好,适合作为组织工程肌腱的支架材料。

响应面分析法优化制备猪血小肽发酵条件的研究

为了优化发酵法制备猪血小肽的条件,应用响应面分析法(responsesurfacemethodology,简称RSM))研究了发酵时间、发酵温度、接种量对小肽产量的影响。实验结果表明,发酵温度与时间及接种量对猪血小肽的生成有显著影响,发酵条件优化结果:接种量为4%、发酵温度为31℃、发酵时间为60h,理论值为37.97%,验证值为37.956%。

猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。

新型器官保存液低温保存猪小肠的实验研究

目的探讨Lifor器官保存液对猪小肠的低温保存效果。方法 24只白色杂种猪,随机分成Lifor液组和威斯康星大学保存液(University of Wisconsin solution,UW液)组,分别采用4℃的Lifor液和UW液灌洗并低温保存移植小肠,每组再根据供肠保存时间的不同随机分成两个亚组,分别为保存6h、9h组,每个亚组6只动物。建立猪自体节段性小肠移植模型。比较低温保存小肠结束时Lifor液组和UW液组小肠黏膜的组织病理学及三磷腺苷(ATP)含量的改变,并测定移植小肠造口输注麦芽糖后各时间点的血糖水平,观察移植后小肠吸收功能情况。结果供肠保存6h和9h后,Lifor液组与UW液组的小肠组织病理学改变基本一致,比较差异无统计学意义(均为P>0.05),保存9h的小肠黏膜形态异常,损伤较保存6h的小肠黏膜严重。供肠保存6h和9h后,Lifor液组与UW液组的小肠黏膜ATP含量比较差异无统计学意义(均为P>0.05),小肠黏膜的ATP含量随保存时间的延长逐渐降低。移植后7、14d两组小肠吸收功能差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 Lifor液低温保存小肠的效果与UW液相当,且成本低廉,具有一定的临床应用前景。

猪小肠移植的发展现状及其意义

随着医学领域的发展 ,人体器官移植在许多领域已获得成功 ,并已常规应用于临床。但由于感染、排斥反应和外科技术等原因 ,小肠移植一直没有作为标准的外科技术广泛应用于临床。本文对猪小肠移植的外科技术及其自身特点进行阐述 ,以便对今后临床小肠移植的开展提供重要依据。

小肠浆肌膜腔内自体脾组织移植动物模型的建立与意义

目的探讨增加自体脾组织移植量的方法,提高自体移植脾组织的功能。方法贵州小型香猪3头,经肌注麻醉后剖腹切除脾脏,取脾脏的1/2约150g,切成1mm×1mm×1mm小块备用。在距Treitz韧带50cm处,切取保留肠系膜血管的空肠30cm旷置,再吻合肠管恢复肠腔通道,缝闭肠系膜裂口。旷置空肠等分2段,去除肠粘膜,缝闭一端,将约50g脾组织块分别植于2段肠浆肌膜腔内,缝闭另一端口,妥善固定于肠系膜上。大网膜内移植30g脾组织作为对照观察。结果4个月饲养期间内无肠梗阻发。3段肠浆肌膜腔内脾组织再生良好,组织结构与大网膜内移植脾组织无明显差别,2段再生较差,1段形成脓肿。结论肠浆肌膜腔内移植脾组织的量较大,可作为自体脾组织的移植术式。

全脂大豆抗营养因子对两种猪种小肠形态结构的影响

试验用2×3析因试验设计,研究了含有20％热处理全脂大豆、20％生全脂大豆和不含有任何全脂大豆及其产品的等能量、等氮和等赖氨酸水平的3种饲粮对东北民猪仔猪和长白仔猪的小肠形态结构的影响。光镜和电镜下观察结果表明,饲喂生全脂大豆饲粮的长白仔猪比东北民猪仔猪小肠粘膜及绒毛结构损伤严重,表明长白仔猪比东北民猪仔猪对全脂大豆中抗营养因子的反应更加敏感。

靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。

载体介导的shRNA抑制猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖特性的研究

利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒Shimen株,收集细胞分别进行实时定量PCR和ELISA光吸收度分析。Real-time PCR分析表明,与对照细胞比较,pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3转录产生的shRNA分子均在一定程度上沉默了病毒的基因,抑制率约为63%、46%、49%。ELISA检测结果表明,转染pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3重组载体的PK-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。

弓形虫对猪小肠IEL数量与细胞因子表达的影响

目的研究弓形虫对猪小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IEL)数量、IL-10、IFN-γ和IL-12表达水平的影响。方法对疑似患弓形虫病的家猪,经临床观察、弓形虫血清学检测、病理剖检检查和病理组织学观察诊断,确诊5头弓形虫感染猪(感染组)和5头正常猪(对照组);采用HE染色检测小肠IEL数量和免疫组织化学方法检测IL-10、IFN-γ和IL-12的表达。结果弓形虫血清学检测阳性,且在病变组织观察到弓形虫速殖子或假包囊,确诊病猪所患为弓形虫病;与对照组比较,感染组猪的空肠、回肠IEL数量明显增加(P<0.01),十二指肠IL-10、十二指肠和空肠IFN-γ、十二指肠和回肠IL-12的表达降低(P<0.01),回肠IL-10和IFN-γ的表达亦降低(P<0.05)。结论弓形虫感染猪小肠IEL数量增多,Th2型细胞因子IL-10和Th1型细胞因子IFN-γ、IL-12表达均降低,推测弓形虫调控IEL及其细胞因子,引起肠道黏膜免疫抑制,弓形虫入侵后维持肠道内环境平衡,说明IEL在抗弓形虫感染中并未起到积极作用。

中小规模猪场非洲猪瘟防控技术关键点概述

非洲猪瘟疫情被我国列为一类动物疫病,对生猪生产威胁巨大。非洲猪瘟防控需从切断场外病原体传入、管控场内病原体传播以及阻断场内病原体向场外扩散三个环节入手,重点做好猪场功能分区、人员及车辆流动管理、饲料饮水管控以及猪群分类管理及病死猪无害化处理等防控关键性措施。中小规模猪场生物安全意识培育,构建系统性、全局性生物安全防治体系是取得非洲猪瘟有效防控的重要基础。

烧伤外科实验用小型猪复合麻醉效果的观察

目的探索在小型猪烧伤创面制作及皮肤移植实验中简便、安全、有效的麻醉方法.方法联合应用氯胺酮、咪达唑仑、戊巴比妥钠复合麻醉.采用氯胺酮和咪达唑仑混合肌肉注射进行诱导麻醉,进入全麻状态后,在手术操作过程中用3%的戊巴比妥钠对猪进行静脉维持麻醉,观察动物的麻醉时间、镇痛效果、呼吸频率、心率变化和术后苏醒情况.结果氯胺酮+咪达唑仑诱导麻醉(3.83±0.47)min,戊巴比妥钠维持麻醉(243.35±15.85)min.麻醉期间麻醉、镇痛效果好,动物呼吸和心率平稳.结论三种药物联合用具有麻醉效果好、操作简便、安全性高,且无需气管插管的优点,是小型猪烧伤外科实验中一种较为理想的麻醉方法.

皖南地区中小规模猪场建立非洲猪瘟防控HACCP安全体系实证研究

针对我国近年爆发的非洲猪瘟疫情防控情势,引入危害分析及关键控制点理论,结合皖南地区中小规模猪场生产防控实际,提出生产过程中消灭传染源头、阻断传播途径等关键点防控措施,旨在为增强生猪养殖产业生物安全意识和落实群防群治机制提供实证参考。

湖南怀化地区猪源大肠埃希菌耐药性及耐药基因检测

为了解湖南省怀化地区中小规模养猪场大肠埃希菌对抗菌药物的耐药现状,2019年3—7月分别从其辖区10个县(地区、区)20个中小型规模猪场采集120份粪便拭子,分离鉴定出86株大肠埃希菌。利用K-B法开展了7类10种抗菌药物的敏感性试验,利用PCR进行了4类8种耐药基因的检测。结果显示:分离菌株对红霉素、复方新诺明、青霉素和氯霉素的耐药率依次为93.02%、86.05%、74.42%和72.09%,而对丁胺卡那霉素、环丙沙星、诺氟沙星等药物耐药率较低,介于4.65%~32.56%;耐药基因检出率比较高,磺胺类Sul2、大环内酯类emF、酰胺醇类floR检出率相对较高,依次为86.05%、84.49%和82.50%,而氨基糖苷类aac(3′)-Ⅱa、aadA1,大环内酯类emB、emC和磺胺类Sul1依次为72.09%、67.44%、59.30%、52.32%和38.37%。

安徽省某规模猪场非洲猪瘟防疫实践与启示

自2018年我国发生非洲猪瘟疫情以来,生猪养殖业遭受了巨大经济损失。安徽省长丰县一家自繁自养生猪养殖场,从控制传染源、切断传播途径和保护易感动物3个方面,通过改建基础设施,控制饮水、生物媒介(蚊蝇虫鼠等)、粪污等,改进生物安全管理,加强对饲料生产与运输、场内外人员和车辆流动、出猪、消毒、病死动物无害化处理等管理,有效防控了非洲猪瘟,平均每月出栏生猪1000头。长丰县动物疫病预防控制中心结合中国动物疫病预防控制中心印发的《中小养猪场户非洲猪瘟防控技术指南》以及安徽省农业农村厅印发的《安徽省规模化猪场和种猪场非洲猪瘟生物安全防控技术规范(试行)》,对该猪场生物安全措施进行了技术集成和推广。该县2020年12月生猪存栏量较去年同期增长近3倍,取得了一定成效。该规模猪场非洲猪瘟防疫实践为安徽省乃至全国其他地区生猪养殖场户防控非洲猪瘟,恢复生猪生产提供了参考。

中小型规模化猪场在非洲猪瘟防控中的注意事项

针对中小型养殖户在实施非洲猪瘟防控过程中则存在的问题,总结了中小型规模化猪场要注意的事项,包括猪场选址和施工过程要注意,防控细节要到位,科学开展非瘟防控工作,正确选择饲养模式。