高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物

采用高速逆流色谱(HSCCC)与其它色谱联用的方法分离纯化鹿药中的化学成分,得到5个黄酮类化合物:5,7,3′,4′-四羟基-3-甲氧基-8-甲基黄酮(1)、8-甲基木犀草素(2)、3′-甲氧基木犀草素(3)、木犀草素(4)和槲皮素(5),它们均为首次自该种及该属植物中分离得到。HSCCC以V(氯仿):V(甲醇):V(水)=4:3:2混合液为溶剂,上相为固定相,下相为流动相,分离纯化得到3个分别含化合物1,4和5的主要部分,经HPLC检验纯度分别为98.3%,96.7%和95.3%;还有1个含有化合物2和3的较纯部分,通过SephadexLH-20柱色谱,以V(甲醇):V(水)=1:1混合液洗脱将二者分离。通过理化性质及紫外、红外、质谱、核磁等波谱分析确定化合物结构。

鹿药提取物清除羟基自由基的研究

采用浸提、索氏提取、大孔吸附树脂分离等技术制备鹿药提取物，包括：鹿药水提液、醇提液、醇提水溶液，醇提液浓缩后经大孔树脂柱水洗后依次用妒为30％、50％、70％、90％的乙醇洗脱分离得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4部分干物质，从Ⅲ中分离得到5个黄酮类化合物：3-甲氧基-8-甲基槲皮素（A）、8-甲基木犀草素（B）、3L甲氧基木犀草素（C）、木犀草素（D）和槲皮素（E）．采用邻二氮菲-Fe^2＋-H2O2氧化法测定鹿药提取物抗氧化清除羟基自由基（HO·）的能力，结果表明，在试验浓度范围内，除鹿药醇提液之外，其他提取物制备液都具有清除HO·的作用，清除率23．30％～98．07％，其中5个黄酮单体化合物清除HO·的能力较强，且随浓度增大清除作用增强，并且作用强度明显好于对照维生素C．可见鹿药中具有较好的抗氧化活性成分．

鹿药游离氨基酸提取工艺

以鹿药为试验材料,采用超声波辅助浸提法,通过单因素试验和正交试验,分别对料液比、提取时间、提取温度及超声功率等因素进行考察,优选鹿药游离氨基酸的最佳提取工艺条件。同时,利用氨基酸自动分析仪对鹿药游离氨基酸进行组分及含量测定分析。结果表明:料液比1∶30、提取时间30 min、提取温度40℃、超声功率80 W,超声提取鹿药游离氨基酸的提取率最高。鹿药由16种不同氨基酸组成,其中必需氨基酸占总氨基酸含量的47.93%。料液比对游离氨基酸提取率影响较显著,且游离氨基酸含量随鹿药采收期的延长呈下降趋势。

鹿药化学成分及其抗肿瘤活性

目的研究鹿药Smilacina japonica A.Gray根茎及根的的化学成分及其抗肿瘤活性。方法鹿药乙醇提取物采用大孔吸附树脂、硅胶、凝胶色谱柱和重结晶等方法分离纯化,根据波谱数据及理化性质鉴定所得化合物的结构。然后,MTT法考察其对人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人胃癌细胞株BGC-823和人肺腺癌细胞株SPC-A1的抑制作用。结果从中分得3个化合物,分别鉴定为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-呋甾-5-烯-3β,12,17α,22ξ,26-五醇-12-O-乙酰基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、薯蓣皂苷(2)、(25R)-海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(3)。其中,化合物1对SPC-A1细胞、化合物3对Caco-2和MCF-7细胞增殖有较强的抑制作用,化合物2对Caco-2细胞有抑制作用。结论首次从鹿药中分离得到3个甾体皂苷均具有一定的抗肿瘤活性。

大孔吸附树脂纯化鹿药总皂苷和总黄酮的研究

目的优化鹿药总皂苷和总黄酮成分的大孔吸附树脂分离纯化最佳工艺。方法以总皂苷和总黄酮为考察指标,对大孔吸附树脂的类型以及样品溶液的质量浓度、pH值、洗脱剂的体积分数、用量进行了优化,同时对大孔吸附树脂的重复性、使用周期进行考察。结果优选出D101大孔吸附树脂作为富集、纯化总皂苷和总黄酮的上柱树脂;获得D101大孔吸附树脂柱层析各项优化参数,即上样液质量浓度为1.5g生药.mL-1(其中皂苷质量浓度为6.52mg.mL-1,黄酮质量浓度为4.81mg.mL-1),上样液pH为4.0～5.0,依次用8BV水、4BV体积分数30%乙醇和4BV体积分数70%乙醇以2BV.h-1的流速洗脱,收集体积分数70%乙醇洗脱液。结论优选出的工艺稳定可行。

Sevag法脱鹿药多糖蛋白工艺条件优化

为了优化Sevag法脱鹿药粗多糖蛋白工艺条件,以牛血清白蛋白为标准品测定蛋白质含量,以葡萄糖为标准品测定多糖含量,以蛋白质脱除率、多糖保留率及综合评分为指标,通过正交试验考察氯仿与正丁醇的比例、多糖液与Sevag液的比例、振荡时间、洗脱次数四因素对脱蛋白效果的影响,确定鹿药多糖脱蛋白的最佳工艺条件。结果表明Sevag法脱鹿药多糖蛋白的最佳条件为氯仿∶正丁醇=4∶1,多糖溶液(2 mg/mL)∶Sevag试剂=2∶1,振荡时间15 min,洗脱6次,从综合评分来看,主要的影响因素是脱蛋白次数和振荡时间。Sevag法脱鹿药多糖蛋白的方法简便,工艺稳定且可有效提高多糖的纯度。

鹿药药学研究概况

在广泛文献检索基础上,对鹿药的成分、药理作用和临床应用等研究进展进行概述,为深入开发和利用鹿药提供科学资料。

响应面分析法优选鹿药总皂苷提取工艺

目的利用响应面法优化鹿药总皂苷的提取工艺。方法采用中心组合设计方法,研究乙醇浓度、提取次数、提取时间及其交互作用对鹿药总皂苷提取率的影响。结果最佳提取工艺条件为:70%乙醇、回流提取2次、每次110 min。结论在最佳工艺条件下,鹿药总皂苷的提取率为4.63%,高于其他条件下的提取率,该工艺条件可为鹿药总皂苷的工业生产提供依据。

星点设计-响应面法优选鹿药总黄酮提取工艺

目的利用响应面法优选鹿药总黄酮的提取工艺条件。方法以乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间为主要影响因素,以总黄酮提取率为评价指标,用响应面法选择提取工艺的最佳条件。结果响应面法筛选的最佳提取工艺为:82.6%乙醇,溶媒用量11.4倍量,提取时间1.91h,理论提取率为2.31%,实际测得值为2.26%。结论星点设计-响应面法优选鹿药中总黄酮提取工艺,方法简单,结果可靠。

鹿药中总黄酮含量的测定

[目的]建立鹿药Smilacina japonica A.Gray中活性成分——黄酮类化合物含量的测定方法。[方法]采用铝盐络合显色分光光度法,以芦丁为对照品,NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂,采用正交试验确定显色剂各组分的最佳用量,在505 nm波长处测定光密度,计算鹿药中的总黄酮含量。[结果]正交试验结果表明,最佳显色剂各组分用量为50 mg/ml NaNO22.0 ml,100 mg/ml Al（NO3）30.5 ml,40mg/ml NaOH15.0 ml。该测定方法在浓度为0.004-0.028 mg/ml时,芦丁光密度与浓度的线性关系良好,R^2=0.999 6。鹿药植株不同部位总黄酮的含量,以鹿药茎叶中较高,为1.8%,根茎中为0.43%,种子中含量极低;不同采收时期中,以9月中旬采收的根茎中总黄酮含量较高。[结论]该方法操作简便、快速、可行,可用于测定鹿药不同部位及不同采收期根茎中总黄酮含量,研究结果为鹿药的质量评价及开发利用提供了理论依据。

中药玉竹及其混淆品的性状和显微鉴别

本文报道8种玉竹:玉竹Polygonatum odoratum(Mill)Druce(野生、栽培)、多花玉竹P.odoratum(Mill)Druce var.pluriflorum(Miq)Ohwi、毛筒玉竹P inflatumKom、小玉竹P humile Fisch ex Maxim.康定玉竹P,prattii Baker、二苞黄精P invo-lucratum(Franch et Sav)Maxim和长苞黄精P desoulayi Kom及其3种混淆品:散斑竹根七Disporopsis aspera(Hua)Engl ex Krause,深裂竹根七D pernyi(Hua)Diels和鹿药Smilacina japonica A Gray的生药性状及显微鉴定的研究结果,并分别列出生药性状、组织构造及粉末特征检索表、组织图和粉末特征图。

鹿药生长发育特性、繁殖特性及生态特征的初步研究

采用野外踏查与野生鹿药移栽观察相结合的方式,对鹿药的生长发育特性、繁殖特性及生态特征进行了初步研究。结果表明,鹿药整个生育期约160d,从4月中旬到10月上旬划分为出苗期、茎叶生长期、现蕾期、开花期、果期和枯萎期6个生长发育时期;鹿药主要是通过根茎进行繁殖,由根茎前1年形成的顶芽萌发为地上茎,而根茎每年伸长生长1节,根茎的寿命为6年;在灌木丛和林下两个生境条件下,地上部分株高、茎粗、鲜重和地下部分根茎长、根茎鲜重的动态变化规律基本一致,都是随生长时间的增长而增加,且灌木丛优于林下生境。

滇黄精与管花鹿药的药材鉴别研究

目的:为滇黄精与管花鹿药的鉴别提供依据。方法:应用药材外观性状鉴别、显微鉴别法对滇黄精与管花鹿药进行生药学鉴别。结果:滇黄精和管花鹿药的外观性状、显微特征均有区别。结论:滇黄精和管花鹿药在外观性状、显微特征方面的区别可作为两种植物的生药学鉴别依据。

鹿药耐阴性研究

鹿药是百合科多年生草本,具有较高的观赏价值,且适宜在阴处生长,为优良的耐阴材料。笔者研究全光照、80%、55%、30%、5%光照处理对鹿药生长、光合及生理特性的影响。结果表明:鹿药光补偿点和光饱和点均较低;净光合速率日变化呈双峰曲线,有明显的光合"午休"现象;鹿药的株高、单片叶面积、比叶重及叶绿素含量随着透光率的降低均呈上升趋势,并在30%透光条件下达到最大;在30%透光条件下鹿药叶色浓绿,观赏效果最佳;而在全光照下,鹿药叶片的叶尖,叶缘出现灼伤、翻卷现象,长势较差。综合考虑,30%光照为鹿药生长的适宜光环境。

鹿药的质量标准研究

目的:建立鹿药的质量标准。方法:从原植物形态、性状特征、显微特征、薄层色谱(TLC)等方面对药材进行定性鉴别;测定药材的水分、灰分、浸出物;采用高效液相色谱法测定药材中(25S)-17α-羟基-5α-螺甾烷-9-烯-3β-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)-[β-D-木吡喃糖基(1→3)]-β-D-葡萄吡喃糖基(1→4)-β-D-半乳吡喃糖苷(SJ-13)的含量,色谱柱为Waters SunFire C18,流动相为乙腈-水(35∶65,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为203 nm,柱温为20℃,进样量为10μL。结果:原植物为多年生草本植物,高30～60 cm;药材表面呈棕色至棕褐色,具皱纹;显微特征为表皮1列细胞;药材粉末呈灰黄色,含大量草酸钙针晶。药材样品的TLC图斑点大部分清晰,分离度好;药材中水分为5.26%～8.88%,总灰分为4.60%～28.86%,酸不溶性灰分为1.56%～23.39%,水浸出物为23.84%～51.26%,醇浸出物为22.65%～57.36%;SJ-13检测进样量线性范围为8.92～31.22μg(r=0.999 9),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于1%,加样回收率为97.0%～99.2%(RSD=0.8%,n=6),耐用性试验的RSD均小于1%,10批药材样品中SJ-13的含量范围为4.40～29.80 mg/g。结论:初步拟定鹿药药材中水分不得过11%,总灰分不得过35%,酸不溶性灰分不得过28%,水浸出物不得少于19%,醇浸出物不得少于18%,SJ-13含量不得少于4.40 mg/g;该试验所建标准可用于鹿药的质量控制。

鹿药中3种黄酮的结构鉴定及含量测定

目的研究鹿药中黄酮类成分的化学结构及其含量。方法采用多种色谱法进行分离,理化性质和波谱数据进行结构鉴定,HPLC法对分离得到的黄酮进行含量测定。结果共分离得到3个黄酮类化合物,HPLC法测得其含量分别为:木犀草素0.186 mg·g^(-1),槲皮素0.158 mg·g^(-1),山柰酚0.297mg·g^(-1)。结论山柰酚为首次从鹿药属中分离鉴定,HPLC法测定3种黄酮类成分,方法简捷,专属性良好,重现性良好,可作为鹿药质量控制的一种方法。

鹿药抗真菌有效部位筛选及其作用机制研究

旨在筛选鹿药抗真菌的有效部位,初步探讨鹿药抗真菌有效部位的作用机制.首先采用75%乙醇加热回流提取与石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取相结合的方法对鹿药进行提取分离制备鹿药正丁醇萃取物、石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、水萃取部位,通过微量液基稀释法、生长实验、时间-杀菌曲线实验、生物被膜实验、棋盘式微量液基稀释法等考察鹿药不同萃取部位的抗真菌和抗生物被膜活性,CCK8法考察鹿药部位的细胞毒性,并采用点板实验和激光共聚焦显微镜初步研究鹿药部位对真菌细胞壁的作用.结果发现鹿药的正丁醇部位具有良好的抗真菌和抗生物被膜活性,MIC值范围为104~832 μg/mL,其抗真菌活性浓度低于细胞毒性浓度.此外,鹿药的正丁醇部位与两性霉素B或阿尼芬净联用具有协同抗真菌活性.初步机制研究显示鹿药正丁醇作用后的真菌对细胞壁抑制剂和两性霉素B敏感性增加,且会引起真菌几丁质含量增加.因此,鹿药的正丁醇部位可能是其抗真菌的有效部位,其抗真菌活性可能与影响细胞壁尤其是增加几丁质含量有关.

鹿药属植物化学成分及药理作用研究进展

鹿药Smilacina japonica是多年生百合科草本植物,有悠久的药用历史,尤其在民族药方面应用较多,作为药食同源植物近年来需求增加,因此对鹿药属植物化学成分和药理作用的研究增多。鹿药属植物含有甾体、黄酮、多糖、氨基酸、酚酸、酰胺等多种活性成分,具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化等药理活性。根据国内外文献报道,总结并综述了鹿药、管花鹿药S.henryi、高大鹿药S.atropurpurea等鹿药属植物的化学成分及药理作用的研究进展,以期为鹿药属植物资源的开发及医药保健方面的合理应用提供参考。

鹿药新呋甾皂苷的分离鉴定及活性研究

目的:研究鹿药Smilacina japonica根茎及根的化学成分及活性。方法:采用超声提取,柱色谱分离与纯化,根据理化性质及红外、质谱、一维、二维核磁共振等波谱方法鉴定结构,进行了体外抗肿瘤活性测定。结果:分离得到1个化合物,鉴定为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-呋甾-5-烯-3β,12,17α,22ξ,26-五醇-12-O-乙酰基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),该化合物具有抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞生长的活性。结论:化合物1为新化合物。

鹿药多糖的超声提取工艺及含量测定

以野生鹿药(Smilacina japonica A.Gray)的根茎及根为对象,研究了鹿药多糖的超声提取工艺并测定了多糖含量。结果表明:水为提取剂,超声提取的最佳工艺参数为料液比1∶20(g∶mL),温度30℃,超声时间20 min。多糖含量测定采用苯酚-硫酸法,葡萄糖为对照品,最大吸收波长490 nm,回归方程为A=13.049C+0.003 7,r=0.999 8,该方法的精密度、重复性、加样回收率、稳定性的RSD分别为3.80%、4.43%、0.04%、0.16%。采用最佳工艺提取和含量测定,测得鹿药中多糖含量为(23.79±0.02)%。