钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋内流的作用机制

【目的】探讨钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞中Ca^2＋内流的作用机制。【方法】将酶解分离好的大鼠结肠平滑肌细胞，随机分为以下4组：①对照组；②EGTA组；③EGTA＋Veraparmil组；④EGTA＋W7组。荧光探针Fura-2／AM标记细胞内游离Ca^2＋，荧光分光光度计检测大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋浓度。【结果】在无Ca^2＋缓冲液中加入EGTA（1mmol／L）使Ca^2＋浓度由静息时（82．24±3．65）nmol／L升高至（267．45±4．86）nmol／L，继之，向细胞外液中引入两种浓度的Ca^2＋（1．5mmol／L和3．0mmol／L），导致Ca^2＋浓度进一步升高，分别为（470．23±4．21）hmol／L、（945．32±3．56）nmol／L．上述升高效应对L型电压操纵性钙通道阻滞剂维拉帕米（verapamil，5μmol／L）不敏感（P〉0．05），但钙调蛋白抑制剂W7对上述升高效应有抑制作用（P〈0．01）。【结论】钙调蛋白参与大鼠结肠平滑肌细胞的钙内流。钙调蛋白抑制剂W7能抑制由EGTA引起的细胞钙内流。这对于进一步深入研究钙通道活性改变，为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病具有重要意义。

肺动脉平滑肌细胞钙含量与先心病肺动脉高压的关联性研究

目的探讨肺动脉平滑肌细胞钙含量与肺动脉高压(Pulmonary Hypertension,PH)的关系。方法采用流式细胞术分别检测先天性心脏病合并(PH组)或未合并(非PH组)PH患儿的肺动脉平滑肌钙离子含量。结果PH组中肺动脉平滑肌细胞钙含量较非PH组高,差异有显著统计学意义(3.044±0.732vs1.079±0.409,P<0.01)。结论肺动脉平滑肌细胞中钙含量与PH的发生有关联,检测其平滑肌细胞中钙离子含量可为临床分型提供依据。

罗格列酮对体外培养大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及GW9662的干预作用

[目的]观察罗格列酮对血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的影响及探讨其可能机制。[方法]采用罗格列酮处理及处理前GW9662干预体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（AVSMCs），用流式细胞学法检测细胞凋亡率，原位凋亡检测法（TUNEL）检测细胞凋亡。[结果]罗格列酮对大鼠VSMCs凋亡诱导存在时间依赖和浓度依赖：随着罗格列酮诱导时间的增加，细胞凋亡率逐渐增加，24h细胞凋亡率最高，超过24h凋亡率没有继续增加；随着罗格列酮浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加，100μmol／L时细胞凋亡率最高，超过100μmol／L细胞凋亡率不再增加。并且GW9662可逆转罗格列酮对AVSMCs凋亡的诱导。[结论]罗格列酮可能通过与PPAR—r结合并使PPAR—r激活诱导AVSMCs凋亡。

急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞Ca2＋及L型钙电流的影响

【目的】研究急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞Ca2＋及ICa-L（L-型电压门控钙通道电流）的影响，以探讨钙通道活性改变在急性低氧性肺血管收缩（HPV）反应中所起的作用。【方法】应用全细胞膜片钳技术，于急性酶分离的大鼠单个肺动脉平滑肌细胞上，并用常氧和低氧的细胞浴液持续灌流肺动脉平滑肌细胞，以观察其对大鼠肺动脉平滑肌细胞Ca2＋及ICa-L的影响。【结果】用低氧的细胞浴液灌流肺动脉平滑肌细胞能显著增加肺动脉平滑肌细胞内Ca2＋荧光强度（P〈O．01），降低相应电压下的ICa-L峰值（P〈0．01），使电流一电压曲线相对上移。【结论】急性低氧可通过对ICa-L通道的抑制作用，使肺动脉平滑肌细胞膜发生去极化，肺动脉收缩而导致急性肺血管阻力增加，进而产生肺动脉高压。这可能在低氧性肺血管收缩反应中起着重要的作用。

大鼠肺动脉平滑肌细胞钙池操纵的钙通道及其意义

【目的】通过对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙库操纵性通道（SOC）的研究，阐述导致肺动脉平滑肌细胞内钙离子稳态失衡的信号途径，为治疗相关疾病提供新的思路。【方法】荧光探针Fura-2／AM标记细胞内Ca^2＋后。用荧光分光光度计检测EGTA耗竭胞内钙库后激活的SOC通道对急性酶分离的大鼠肺动脉平滑肌细胞（Ca^2＋）的影响。【结果】在无Ca^2＋缓冲液中，大鼠肺动脉平滑肌细胞静息Ca^2＋为（72．48±3．12）nmol／L，向细胞悬液中分别引入两种浓度的Ca^2＋（终浓度分别为1．5；3．0nmol／L），此时静息Ca^2＋为（121．56±6．45），（187．97±2．98）nmol／L，而预先用EAGA10mmol／L处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞Ca^＋显著提高。上述升高效应对Verapamil（5μmol／L）不敏感，但可被2APB（20～100μmol／L）抑制。且抑制率随2-APB浓度的提高而增加。【结论】通过对急性酶分离的大鼠单个肺动脉平滑肌细胞上胞内钙库耗竭激活的SOC通道的研究，对于进一步深入研究钙通道活性改变在肺血管收缩（HPV）反应中所起的作用具有重要意义。

有机阴离子转运蛋白1在人血管平滑肌细胞表达的意义

目的检测有机阴离子转运蛋白1(OAT1) mRNA和蛋白质在人血管平滑肌细胞的表达以及尿酸刺激对其表达的影响。方法分离培养人脐动脉血管平滑肌细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR方法扩增特异性OAT1cDNA片断,制备探针,用Northern blot方法检测OAT1 mRNA的表达,提取细胞膜蛋白和总蛋白,用Western blot方法检测OAT1的蛋白表达;用800μmol/L的尿酸刺激细胞,观察OAT1的表达变化。结果从人血管平滑肌细胞检测到OAT1 mRNA和蛋白的表达。尿酸可以明显增强OAT1的表达。结论人血管平滑肌细胞有明确的OAT1表达,OAT1可能部分介导了血管平滑肌细胞对尿酸的摄取过程。

锌指蛋白A20抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞迁移的实验研究

目的 探讨锌指蛋白A20对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞作用的可能机制.方法 用锌指蛋白A20基因转染大鼠主动脉血管平滑肌细胞后提取核蛋白用western blot的方法检测NF-κB核移位的量;进行Boyden小室迁移实验,观察平滑肌细胞的迁移能力变化.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉血管平滑肌24 h后NF-κB的核移位明显增加,迁移能力也显著增强;而转染含A20基因质粒的平滑肌细胞NF-κB的核移位及迁移能力达到正常水平.结论 ox-LDL能明显激活平滑肌细胞NF-κB信号系统,并增强平滑肌细胞的迁移能力,可能由此激活动脉壁的炎症反应,诱导平滑肌迁移至内膜,触发动脉粥样硬化发生;A20明显抑制了ox-LDL诱导下的NF-κB活化水平,同时抑制了的平滑肌细胞迁移能力的增强,A20可能是通过抑制NF-κB信号而起作用,并可能由此阻断了动脉粥样硬化的发生发展.