下调Socs3表达增加肾癌细胞对干扰素α敏感性的实验研究

目的探索抑制细胞因子信号转导SOCS蛋白是否可以降低肾细胞癌的IFN抗性及可能机制。方法培养人肾癌ACHN细胞并转染SOCS3 siRNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测SOCS家族的mRNA、蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖活性;建立小鼠肾癌肺转移模型,记录小鼠的生存情况。结果与对照组比较,IFN-α处理组SOCS3 mRNA表达显著增加(4.96±0.21 vs.103.22±0.24,P<0.001)。MTT法结果显示,与阴性对照组(转染NC-siRNA)比较,5.0、12.5、25.0、50 nmol/L SOCS3 siRNA可显著降低IFN-α处理组ACHN细胞增殖率(P<0.05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组比较,SOCS3 siRNA组中p-STAT1及p-STAT3表达明显升高(p-STAT1:1.87±0.07 vs.1.02±0.01,P<0.001;p-STAT3:1.35±0.24 vs.1.12±0.03,P<0.05)。敲低SOCS3表达可增强IFN-α治疗肾癌肺转移小鼠的生存。结论下调SOCS3表达增强了STAT1激活和IFN-α的体外和体内抗肿瘤活性。基于SOCS3在介导对IFN-α免疫疗法的耐药性中发挥的作用,使用靶向SOCS3的siRNA和IFN-α的联合疗法可能是治疗肾癌及肾癌肺转移癌的有吸引力的候选药物。

SOCS3负调控流感病毒诱导干扰素表达机理的初步研究

【目的】探究细胞因子信号转导抑制因子3(Suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在流感病毒(Influenza virus)感染过程中对干扰素(Interferon,IFN)信号通路的调控作用。【方法】通过慢病毒感染的方式在人非小细胞肺癌细胞(A549细胞)中过表达SOCS3,利用siRNA技术在A549细胞中敲低SOCS3的表达,然后使用流感病毒感染SOCS3过表达或敲低的细胞系以及对照细胞系,于不同时间点收取RNA或蛋白样品,采用RT-PCR和Western blot技术检测干扰素信号通路中关键节点分子的表达或活化情况。【结果】检测发现细胞中过表达SOCS3后I型干扰素IFN-β和III型干扰素IL-28(Interleukin-28)、IL-29(Interleukin-29)表达水平下降,而敲低SOCS3表达后IFN-β及IL-28、IL-29的表达水平升高。进一步研究发现,过表达SOCS3对识别流感病毒RNA的模式识别受体视黄酸诱导基因-I(Retinoic acid-inducible gene 1,RIG-I)、黑色素瘤分化相关蛋白5(Melanoma differentiation-associated protein 5,MDA5)、Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)以及干扰素调节因子7(Interferon regulatory factor 7,IRF7)的mRNA表达均有抑制作用。同时SOCS3还能影响干扰素下游信号转导与转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)的活化,细胞中过表达SOCS3抑制流感病毒诱导的STAT1的磷酸化,而敲低SOCS3表达则使STAT1的磷酸化水平升高。【结论】流感病毒感染后,SOCS3能够在转录水平下调模式识别受体及干扰素调节因子的表达,抑制Ⅰ型和Ⅲ型干扰素的产生,同时还影响STAT1的活化从而阻断干扰素信号的传递。

壳寡糖通过调控SOCS3/STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠神经炎症

目的探讨壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠神经炎症的改善作用及机制。方法通过对10周龄C57BL/6N小鼠腹腔注射LPS建立神经炎症模型。动物随机分为5组,分别是:对照(CON)组、LPS组、LPS+COS低剂量(LPS+COS 50 mg/kg)组、LPS+COS中剂量(LPS+COS 100 mg/kg)组、LPS+COS高剂量(LPS+COS 200 mg/kg)组。LPS注射完毕后进行旷场实验、新物体识别、Morris水迷宫等行为学实验。处死动物后,收集脑组织,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析脑内促炎因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和抗炎因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的表达;Western blot分析脑内信号传导及转录激活蛋白(STAT3)、细胞因子信号抑制物(SOCS3)蛋白的表达水平。结果行为学实验结果表明,COS可以改善LPS诱发的小鼠认知障碍下降等表现。ELISA结果表明,LPS组小鼠的促炎细胞因子的释放量显著增加,抗炎细胞因子的释放量显著降低;而COS灌胃可逆转这一变化趋势。Western blot结果提示,与CON组相比,LPS的STAT3磷酸化水平显著升高,同时也促进SOCS3的蛋白表达升高;而COS则显著下调这两个蛋白的表达。结论COS可能通过抑制SOCS3/STAT3信号通路改善LPS引起的小鼠神经炎症。

SOCS3基因多态性与急性脑梗死遗传易感性及进展的关系

目的:分析急性脑梗死(ACI)病人的SOCS3基因多态性,并探讨其与疾病进展的关系。方法:根据入院时美国国家卒中量表(NIHSS),将310例ACI病人分为轻度和中重度。根据入院后7 d的NIHSS评分将病人进一步分为进展组和非进展组。根据SOCS3基因rs8064821的测序结果,检测到CC、CA和AA三种基因型,分析各基因型的分布差异及其对疾病进展的预测价值。结果:ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的基因型分布为CC(161例)、CA(127例)和AA(22例),频率分别为51.93%、40.97%和7.10%。中重度组病人的CC基因型比例低于轻度组,CA、AA基因型比例高于轻度组(P<0.01)。与非进展组相比,进展为神经功能缺损的病人CC基因型比例较低,CA和AA基因型比例较高(P<0.01)。结论:CA和AA基因型是皖北地区ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的主要基因型,携带CA和AA基因型的病人更易出现神经功能障碍。

FGF21通过SOCS3/JAK/STAT通路调控肝细胞脂质代谢研究

目的通过敲减细胞内成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factors 21,FGF21)的表达,观察其对肝细胞脂质代谢的影响,并探讨FGF21调控肝细胞脂质代谢的分子机制。方法通过FGF21干扰慢病毒转染HepG2细胞,降低FGF21的表达,以空载体转染HepG2细胞作为对照,分为干扰组和对照组。两组均以棕榈酸油酸刺激构建非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)细胞模型。采用油红O染色法观察肝细胞内脂质沉积情况,测定分光光度值,计算脂质含量;利用蛋白质印迹(Western blot)法检测肝细胞中SOCS3、JAK2、STAT3蛋白的变化。结果油红O染色及吸光度值显示,与对照组相比,干扰组肝细胞内脂滴含量显著减少;Western blot结果表明,干扰组肝细胞内细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)、Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)蛋白表达水平均显著升高。结论在肝细胞模型中,敲减FGF21表达,可通过激活SOCS3/JAK/STAT信号通路从而抑制肝细胞脂质沉积。但其具体作用机制仍需进一步深入研究。

SOCS3在病理性疼痛中的作用

细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)是细胞因子信号传导抑制因子蛋白质家族(SOCS)的一员。SOCS3是一种重要的细胞内蛋白质,在体内负调控细胞因子介导的信号通路,参与机体免疫、生长、造血、新陈代谢及肿瘤增殖等各种关键过程。近年的研究发现,SOCS3参与疼痛的调控,在神经病理性疼痛、炎性疼痛等多种类型疼痛及吗啡耐受中发生表达的变化。在坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)模型中,磷酸二聚化的STAT3转移到细胞核内诱导脊髓背角SOCS3表达增加,在完全弗氏佐剂(CFA)炎性疼痛大鼠中,下丘脑室旁核(PVN)内SOCS3在急性期蛋白质表达水平增加、其慢性期表达下降,在骨癌疼痛大鼠腰2~5背根神经节(DRG)中SOCS3蛋白质水平显著下降。鞘内注射SOCS3慢病毒载体、阿司匹林触发的脂蛋白A4(ATL)和芍药苷,或通过抑制非编码RNA表达降低非编码RNA对SOCS3的抑制作用,能够增加SOCS3表达发挥镇痛作用。SOCS3通过抑制Janus激酶/信号转导子和转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路及下游基因的表达,阻碍白细胞介素-1(IL-1)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性因子的分泌,以及核因子κB(NF-κB)的激活和转移等,发挥抗炎和镇痛作用。本文主要对SOCS3缓解疼痛的可能机制进行综述,探讨SOCS3在病理性疼痛中的作用。

茯苓酸通过调节JAK2/STAT3/SOCS3信号通路减轻急性心肌梗死大鼠的心肌纤维化

目的初步探讨茯苓酸(PA)通过调节Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)/细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌纤维化的影响。方法采用左冠状动脉前降支结扎法构建AMI模型,造模成功大鼠随机分为Model组、PA低、中、高剂量组(1、5、10mg/kg)、激活剂组(10mg/kg PA+1mg/kg colivelin),随机选取12只作Sham组只穿线不结扎,各组灌胃和腹腔注射相对应的药物,每天1次,连续4周。超声心动图检测大鼠心功能;苏木精和伊红(HE)及马森三色(Masson)染色观察心肌组织病理损伤及纤维化程度;免疫组化染色测定心肌I型胶原蛋白(COL-I)、III型胶原蛋白(COL-III)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠心肌组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,试剂盒测定羟脯氨酸(HYP)含量;Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、JAK2/STAT3/SOCS3信号通路蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组大鼠LVEF、LVFS显著降低,LVEDd、LVEDs、LVPWT、CVF、IL-6、TNF-α、HYP水平、COL-I、COL-III、TGF-β1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、SOCS3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与Model组比较,PA低、中、高剂量组大鼠LVEF、LVFS显著升高,LVEDd、LVEDs、LVPWT、CVF、IL-6、TNF-α、HYP水平、COL-I、COL-III、TGF-β1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、SOCS3蛋白表达水平显著降低,其中PA高剂量组变化更显著(P<0.05);与PA高剂量组比较,激活剂组大鼠上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论PA可能通过抑制JAK2/STAT3/SOCS3信号通路,抑制炎症反应、减轻心肌纤维化,改善AMI大鼠心脏功能。

槲皮素调控SOCS3/STAT3信号通路对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨槲皮素(Que)调控细胞因子信号转导抑制分子3(SOCS3)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生物学行为的影响。方法:以TPC-1细胞为研究对象,设置分组为对照组、Que低(Que-L,25μmoL/L Que)、中(Que-M,50μmoL/L Que)、高浓度(Que-H,100μmoL/L Que)组、Que-H+shRNA NC组(先利用Lipofectamine2000转染试剂盒转染shRNA NC,再经100μmoL/L Que处理)、Que-H+SOCS3 shRNA组(先利用Lipofectamine2000转染试剂盒转染SOCS3 shRNA,再经100μmoL/L Que处理),流式细胞仪检测TPC-1细胞凋亡变化;CCK-8及Transwell实验检测TPC-1细胞增殖、迁移及侵袭变化;qRT-PCR检测TPC-1细胞SOCS3、STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测TPC-1细胞中SOCS3、p-STAT3/STAT3、磷酸化非受体酪氨酸激酶Janus激酶2(p-JAK2)/JAK2表达水平。结果:与对照组相比,Que-L组、Que-M组、Que-H组TPC-1细胞凋亡率、SOCS3 mRNA及蛋白表达显著增加,增殖率、侵袭及迁移数、STAT3 mRNA、p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2表达显著下降(P<0.05);与Que-H+shRNA NC组相比,Que-H+SOCS3 shRNA组TPC-1细胞凋亡率、SOCS3 mRNA及蛋白表达显著降低,增殖率、侵袭及迁移数、STAT3 mRNA、p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2表达显著增加(P<0.05)。结论:Que通过激活SOCS3/STAT3信号通路可抑制PTC细胞系TPC-1细胞的恶性生物学行为。

利多卡因通过激活AMPK/SOCS3信号通路改善阿霉素引起的急性心肌损伤

目的:研究利多卡因(lidocaine,Lido)对阿霉素(doxorubicin,Dox)引起小鼠心脏损伤的治疗效果及作用机制。方法:32只SPF小鼠随机分为Saline组、Dox组、Dox+Lido组、Lido组4组(n=8),观察并检测各组小鼠体重、生存率、多普勒血流成像、心电图、心脏超声,以及血浆肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI),心肌组织中组织因子(tissue factor,TF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)、磷酸化磷酸腺苷活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,p-AMPK)、缝隙连接蛋白(connexin43,Cx43)、细胞因子信号转导抑制因子3(recombinant suppressors of cytokine signaling 3,SOCS3)的含量。结果:与Saline组比较,Dox组小鼠体重、生存率明显降低,心率降低、QRS波时限及QT间期延长,血浆CK-MB、cTnI值明显上升,心脏挛缩,心腔变小,TF、MMP-9升高,心脏组织中p-AMPK、SOCS3、Cx43表达减低;与Dox组相比,Dox+Lido组小鼠体重、生存率增加,心率上升,QRS波时限及QT间期正常,血浆CK-MB、cTnI值处于正常区间,心脏大小未见明显改变,TF、MMP-9降低,心脏组织中p-AMPK、SOCS3、Cx43表达增加。结论:利多卡因能通过激活p-AMPK/SOCS3/Cx43信号通路和抑制TF/MMP-9高表达改善阿霉素诱导的急性心肌损伤。

瘦素对牦牛乳腺上皮细胞中SOCS3和STAT3蛋白表达的影响及催乳素的作用

[目的]本文旨在了解瘦素(LEP)对牦牛乳腺上皮细胞(YMEC)中细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达的作用特点及催乳素(PRL)对LEP功能发挥可能产生的影响。[方法]以牦牛乳腺上皮细胞为载体,以添加和不添加催乳素(500 ng·mL^(-1))为前提,用不同剂量瘦素(0、50、100、200、400、800 ng·mL^(-1))作用YMEC 48 h以及添加JAK2/JAK3信号通路阻滞剂AG490作用48 h,采用Western blot技术检测SOCS3和STAT3蛋白的相对表达水平及STAT3蛋白磷酸化水平。[结果]无催乳素时,除50 ng·mL^(-1)瘦素外,其余各剂量均抑制SOCS3蛋白的表达,而各浓度LEP均抑制STAT3蛋白的表达,STAT3蛋白磷酸化水平高于蛋白表达水平。有催乳素时,SOCS3蛋白除了在100 ng·mL^(-1)LEP下被抑制之外,其余各剂量均有促进作用;800 ng·mL^(-1)LEP对STAT3蛋白表达有显著抑制作用,STAT3磷酸化水平除100 ng·mL^(-1)组外,均有所升高。添加AG490之后,SOCS3与STAT3都主要是通过JAK2激活诱导。[结论]高浓度瘦素会抑制SOCS3及STAT3蛋白的表达,瘦素主要通过JAK2/STAT3通路发挥生理功能,而SOCS3是JAK2/STAT3通路的负反馈调节因子;PRL能够缓解高浓度LEP导致的瘦素抵抗作用,并且能促进SOCS3和STAT3蛋白的表达。

SOCS3通过调控JAK2/STAT3信号通路改善急性肺损伤

目的研究细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS3)对JAK2/STAT3信号通路的调控作用及对急性肺损伤的影响。方法将A549细胞分为control组、model组、LPS+SOCS3组、LPS+SOCS3 NC组、LPS+AG490组、LPS+SOCS3+AG490组和LPS+SOCS3 NC+AG490组。control组A549细胞正常培养;model组细胞用LPS处理;LPS+SOCS3组和LPS+SOCS3 NC组细胞在用LPS处理后,分别转染SOCS3过表达质粒和NC质粒;LPS+SOCS3+AG490组和LPS+SOCS3 NC+AG490组细胞分别在model组和LPS+SOCS3 NC组基础上用JAK2特异性抑制剂处理。显微镜观察各组细胞形态学改变;CCK-8测定各组细胞活力;ELISA检测促炎因子IL-6和TNF-α含量;qPCR检测各组细胞SOCS3、JAK2、STAT3基因表达;Western blot法检测细胞中SOCS3、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化。结果与control组相比,model组细胞皱缩,连接松散,细胞增殖能力下降(P<0.01),IL-6和TNF-α浓度均上升(P<0.01),SOCS3 mRNA表达下调(P<0.01),JAK2、STAT3 mRNA表达均上调(P<0.01),SOCS3蛋白表达下调(P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白表达上调(P<0.01)。与model组相比,LPS+SOCS3组和LPS+AG490组均细胞形态恢复,连接紧密,细胞增殖能力上升(P<0.01),IL-6和TNF-α浓度均下降(P<0.01),SOCS3 mRNA表达上调(P<0.01),JAK2、STAT3 mRNA表达下调(P<0.01),SOCS3蛋白表达上调(P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下调(P<0.01)。与LPS+AG490组及LPS+SOCS3 NC+AG490组相比,LPS+SOCS3+AG490组细胞形态进一步恢复,连接更加紧密,细胞增殖能力上升(P<0.01),IL-6和TNF-α浓度均下调(P<0.01),SOCS3 mRNA表达上调(P<0.01),JAK2、STAT3 mRNA表达均下调(P<0.01),SOCS3蛋白表达上调(P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白表达下调(P<0.01)。结论SOCS3过表达能够调控JAK2/STAT3信号通路,抑制脂多糖引起的急性肺损伤,与JAK2/STAT3通路抑制剂联用效果更佳。

红细胞增多症SOCS3 mRNA的表达情况及其与JAK2 V617F点突变的相关性研究

目的研究真性红细胞增多症(PV)细胞因子信号传导抑制蛋白(SOCS3)mRNA的表达情况及其与JAK2 V617F点突变的相关性。方法选取2017年3月至2019年2月间衡水市人民医院收治的PV患者192例作为观察组,根据JAK2 V617F点突变情况将其分为突变阳性组(130例)和突变阴性组(62例),选择同期健康体检者90名作为对照组。比较三组血清SOCS3 mRNA表达水平,并计算SOCS3 mRNA诊断PV患者JAK2 V617F点突变的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度,同时采用单因素和多因素Logistic回归分析PV患者JAK2 V617F点突变的影响因素。结果三组SOCS3 mRNA表达水平:突变阳性组>突变阴性组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SOCS3 mRNA诊断PV患者JAK2 V617F点突变的敏感度为91.76%,特异度为92.00%,准确度为92.86%,阳性预测值为90.22%,阴性预测值为93.15%;单因素分析结果显示,JAK2 V617F突变阳性组与突变阴性组的性别、年龄、WBC、Hb、红细胞压积、PLT、SOCS3mRNA比较差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示,SOCS3 mRNA>0.25 nmol/L、Hb>170 g/L、红细胞压积>55%、PLT>420×109/L均为影响PV患者JAK2 V617F点突变的独立危险因素(P<0.05)。结论PV患者JAK2 V617F点突变受多种因素影响,SOCS3 mRNA表达水平增高为其独立危险因素,SOCS3 mRNA表达水平可为临床早期诊断PV患者JAK2 V617F点突变提供指导方向。

miR-19a-3p靶向上调SOCS3参与急性川崎病病理发展的机制研究

目的:探讨微小RNA-19a-3p(miR-19a-3p)/细胞因子信号抑制物3(SOCS3)信号轴在川崎病(KD)病理发展过程中的调控机制。方法:采集我院川崎病患儿、川崎病治疗后患儿血清,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白质印迹(Western Blot)法检测miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达变化。小鼠腹腔注射白色念珠菌水溶物(CAWS)建立川崎病模型,分为正常对照组、模型组、si-miR-19a-3p组、ad-SOCS3组、si-NC组、ad-NC组,每组10只。取小鼠冠状动脉组织,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮素(ET)水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察冠状动脉病理变化;免疫组化法检测SOCS3阳性表达水平;RT-qPCR及Western Blot法检测miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达变化;Western Blot法检测Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、核转录因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表达水平。取人冠状动脉内皮细胞(HCAEC),用川崎病患儿血清培养HCAEC以模拟体外川崎病模型,并分为正常对照组、川崎病组、si-miR-19a-3p组、si-SOCS3组、si-miR-19a-3p+si-SOCS3组、si-NC-1组、si-NC-2组;ELISA法检测细胞上清液炎性因子TNF-α、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;管腔形成试验检测管腔形成情况;RT-qPCR法及Western Blot法检测miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达变化。结果:川崎病患儿血清中miR-19a-3p表达升高,SOCS3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);随着川崎病患儿康复,miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达均趋于正常。沉默miR-19a-3p及上调SOCS3表达后,川崎病小鼠死亡减少,冠状动脉血管损伤缓解,SOCS3介导的炎性通路相关蛋白表达降低(P<0.05)。下调SOCS3表达可逆转miR-19a-3p沉默发挥抑制HCAEC凋亡、管腔形成、炎性因子分泌等作用(P<0.05)。结论:miR-19a-3p高表达、SOCS3低表达可能参与川崎病血管炎性损伤过程,沉默miR-19a-3p可靶向上调SOCS3表达,抑制炎症反应,减轻川崎病冠状动脉血管损伤。

热补针法对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞JAK-STAT信号通路调节因子SOCS1、SOCS3表达的影响

目的观察热补针法对类风湿关节炎(RA)大鼠关节滑膜细胞JAK-STAT信号通路SOCS1、SOCS3表达的影响,探讨热补针法治疗RA的作用机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、平补平泻组、热补针法组,每组12只。除正常组外,其余大鼠制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。成模后平补平泻组和热补针法组取双侧“足三里”,前者施平补平泻法,后者施热补针法,持续1 min,每日1次,共治疗7次,每次留针30 min。测量各组大鼠足趾容积和足底痛反应时间;免疫荧光染色和Western blot检测关节滑膜组织SOCS1、SOCS3的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀,足趾容积明显增加,足底痛反应时间明显缩短,关节滑膜组织SOCS1、SOCS3表达下降(P<0.05);与模型组比较,平补平泻组和热补针法组大鼠足趾容积明显减少,足底痛反应时间明显延长,关节滑膜组织SOCS1、SOCS3表达明显升高(P<0.05),且热补针法组均优于平补平泻组(P<0.05)。结论热补针法通过提高模型大鼠滑膜细胞JAK-STAT信号通路细胞因子SOCS1、SOCS3表达,达到抗炎效应及调整滑膜细胞分泌功能的作用。

沙棘多糖提取物对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4,SOCS3表达的调控

目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg/kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS(10μg/kg)和DGal N(700 mg/kg)建立急性肝损伤模型,阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。建模4 h后采集血清和肝脏组织,检测血清ALT和AST水平,HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。Western blot检测TLR4,SOCS3的表达情况。结果:沙棘多糖提取物显著降低了LPS/D-Gal N诱导的小鼠血清中ALT和AST水平(P<0.01,P<0.05);HE染色观察显示,沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。Western blot检测表明,沙棘多糖提取物抑制了LPS/D-Gal N诱导的TLR4的表达,但是对SOCS3的表达影响不明显。结论:沙棘多糖提取物有效抑制了LPS/D-Gal N诱导的肝损伤,这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的,而非通过调控SOCS3来实现的。

电针“阳陵泉”、“环跳”对神经病理性疼痛大鼠脊髓SOCS3的影响

目的:观察电针对神经病理性疼痛大鼠痛行为学及脊髓细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组、非电针组,每组10只。采用坐骨神经结扎压迫建立慢性限制性损伤(CCI)神经痛模型,电针组选取双侧"阳陵泉"、"环跳"穴进行电针治疗,观察大鼠痛行为学和脊髓SOCS3、IL-6基因表达的变化,检测脊髓SOCS3神经细胞定位情况。结果:与模型组相比,电针可显著提高CCI大鼠机械痛及热痛阈值(P<0.01);与正常组相比,模型组大鼠脊髓SOCS3、IL-6 m RNA表达显著上调(P<0.01),而电针可显著降低IL-6m RNA表达,并进一步上调脊髓SOCS3表达水平(P<0.01)。在CCI大鼠中,SOCS3主要表达于脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞中。结论:电针可能通过下调IL-6基因表达,并上调SOCS3表达,减轻神经痛大鼠痛敏反应。

STAT3及SOCS3在鼻息肉患者中对Th17分化的作用观察

目的观察鼻息肉患者磷酸化信号转导与转录激活因子3(phospho-signal transducers and activators of transcription,p-STAT3)、SOCS3(suppressor of cytokine signaling,SOCS3)及Th17相关因子的水平,初步探讨STAT3及SOCS3对鼻息肉患者Th17细胞功能的作用。方法选取40例鼻息肉患者标本及15例对照组标本,采用免疫组化和蛋白免疫印迹法检测p-STAT3及SOCS3在鼻息肉组织中的分布及表达,运用ELISA法检测IL-6和IL-17A的表达情况,采用RT-PCR检测RORγt的表达水平,并对数据进行统计学分析。结果鼻息肉组的p-STAT3、IL-6、IL-17A以及RORγt表达明显高于对照组(P<0.01),SOCS3在鼻息肉组中的表达则低于对照组(P<0.01)。相关性分析显示p-STAT3、RORγt及IL-17A与SOCS3呈负相关(p-STAT3/SOCS3:r=-0.545,P<0.01;RORγt/SOCS3:r=-0.627,P<0.05;IL-17A/SOCS3:r=-0.631,P<0.01),而p-STAT3与RORγt、IL-6、IL-17A呈正相关(p-STAT3/RORγt:r=0.594,P<0.001;p-STAT3/IL-6:r=0.632,P<0.001;p-STAT3/IL-17A:r=0.647,P<0.01)。结论 STAT3异常活化,以及SOCS3低表达所致抑制作用缺失可能是造成鼻息肉中Th17细胞过度活化的重要原因。

拨法对CCI大鼠脊髓中IL-6及SOCS3的影响

目的从炎症反应的角度探索拨法对神经病理性疼痛大鼠的影响。方法采用推拿手法模拟仪定性、定量模拟拨法,对CCI大鼠进行干预,通过光热耐痛阈观察大鼠行为学的改善情况,通过免疫组化观察大鼠脊髓中IL-6及SOCS3表达的变化。结果造模7d后,模型组大鼠光热耐痛阈结果与正常组相比有显著差异(P<0.01),模型组大鼠脊髓中IL-6及SOCS3的表达较正常组显著升高(P<0.01);拨法组用拨法治疗20次后,大鼠光热耐痛阈结果与同期模型组相比有显著差异(P<0.05),且逐渐趋向于正常水平,大鼠脊髓中IL-6的表达较同期模型组有显著降低(P<0.01),脊髓中SOCS3的表达较同期模型组有显著性升高(P<0.01)。结论拨法可一定程度上改善神经病理性疼痛大鼠的痛觉和温度觉,同时可抑制大鼠体内促炎症因子的表达。

SOCS3过表达对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠Th17免疫反应的影响

目的探讨铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠CD4^+T淋巴细胞SOCS3过表达对Th17免疫反应的作用。方法构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠模型,并分离培养小鼠脾脏的CD4^+T淋巴细胞。构建SOCS3慢病毒过表达载体。在体外通过慢病毒基因转染的方法实现CD4^+T淋巴细胞SOCS3基因过表达。对SOCS3过表达细胞给予IL-23刺激,采用Western blot检测细胞中的p-STAT3水平,real-time PCR检测细胞中的RORγt水平,流式细胞分析IL-17+细胞数量,ELISA检测细胞培养液中的IL-17水平。结果铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠CD4^+T淋巴细胞SOCS3过表达后,IL-23刺激诱导的p-STAT3蛋白水平、RORγt mRNA水平、IL-17^+细胞数量以及培养液中的IL-17水平均较对照组明显降低。结论体外研究表明SOCS3过表达对铜绿假单胞菌感染小鼠的Th17免疫反应具有抑制作用。

SOCS3基因转染对肺腺癌细胞株A549原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响

目的 探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A5 49中c fos、c junmRNA表达及细胞增殖的影响。方法 以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A5 49,RT PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达 ;半定量RT PCR测定转染前后细胞中c fos、c junmRNA水平表达变化 ;3H TdR掺入法检测基因转染前后细胞增殖情况。结果 RT PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3稳定表达 ;半定量RT PCR证实转染后细胞中c fos、c junmRNA水平显著降低 (P <0 .0 1) ;且转染组细胞 3H TdR掺入量显著降低 (P <0 .0 1)。结论 SOCS3蛋白可能通过负性调控STAT3介导的信号通路降低c fos、c jun的表达 ,从而抑制肺癌细胞增殖。