鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察

IBDV超强毒株LX株接种 2周龄SPF雏鸡后 ,其致病性不同于经典强毒株CJ80 1株 ,它主要引起接种鸡全身性炎症反应 ,法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官中大量异嗜性白细胞、巨噬细胞浸润 ,淋巴细胞严重坏死崩解 ,胸腺皮质严重萎缩、坏死 ,骨髓中造血细胞减少、巨噬细胞和脂肪细胞增生。在接种后 14d法氏囊淋巴滤泡严重萎缩、淋巴细胞排空形成囊腺样结构 ,未见恢复正常 ,其它免疫器官形态基本恢复正常。电镜观察 ,接种后 2和4d可见胸腺淋巴细胞胞浆浓集、染色质周边化形成新月形 ,表现细胞凋亡特征 ;在法氏囊坏死淋巴细胞胞浆中可见6 0nm大小呈晶格排列或散在的病毒粒子。研究初步探明了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒的致病机理。

SPF鸡人工感染禽源大肠杆菌、H9亚型禽流感病毒后的体液免疫应答和死亡率分析

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和E.coli173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种E.coli组死亡率最高;各混合感染组试验鸡针对E.coliOMPs和LPS的抗体水平低于单独感染E.coli组,其中又以先接种MPAIV再接种E.coli组为最低,提示MPAIV和E.coli间存在协同致病作用,这种协同机理可能与因MPAIV的感染导致一定程度的免疫抑制并进而促进了E.coli在体内的定居与繁殖有关。

我国商业化SPF级小鼠病原体污染分析

目的按现行国标《实验动物微生物学检测方法》和《实验动物寄生虫学检测方法》对我国商品化的无特殊病原体(specific pathogen free,SPF)小鼠进行微生物状况检测,为生产高质量的实验动物提供依据。方法对五家主要实验动物生产单位生产的ICR、KM、C57BL/6、BALB/c及BALB/c-nu品系的SPF级小鼠进行随机抽检。检测抽检小鼠所携带的微生物和寄生虫情况。结果在抽检的SPF级小鼠中,病毒污染主要包括呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo-3)、小鼠肺炎病毒(PVM)和多瘤病毒(POLY);主要细菌污染为肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌。这些微生物病原体中,除条件性致病菌绿脓杆菌外,其他病原体对小鼠本身和实验研究均具有一定的影响。

金黄地鼠封闭群SPF化后的微卫星遗传学检测

目的检测和评估金黄地鼠封闭群SPF化后的遗传学变化,为SPF金黄地鼠遗传质量的控制提供技术资料。方法应用小鼠和大鼠的微卫星标记筛选适于金黄地鼠遗传检测的微卫星标记,并结合微卫星荧光标记-半自动基因分型技术,对成都生物制品研究所的SPF级金黄地鼠及其来源的普通级金黄地鼠进行遗传检测,计算其群体遗传学参数。结果对18个小鼠和6个大鼠微卫星标记进行了筛选,分别有2个小鼠和2个大鼠微卫星标记在金黄地鼠种群中具PCR扩增多态性。4个检测的微卫星位点在普通级金黄地鼠和SPF金黄地鼠种群分别发现25和20个等位基因,两群体的期望杂合度分别为0.4979和0.5048,其群体遗传多样性无显著差异;群体间的不同微卫星位点FST范围从0.0095到0.0367,平均为0.0315,表明两群体间的遗传分化很弱,其遗传多样性主要存在于群体内;Nei(1972)遗传距离和Nei(1978)无偏遗传距离分别为0.0678和0.0570,表明了2群体之间很高的遗传相似度和非常近的亲缘关系;Hardy-Weinberg平衡检验表明普通级和SPF金黄地鼠分别有2个和3个位点偏离遗传平衡,且偏离位点均表现为杂合子缺陷。结论该SPF金黄地鼠基本保持了其来源普通级黄地鼠的遗传多样性,两群体间遗传分化程度和遗传差异很小,但应进一步加强其封闭群的繁育控制,保持其遗传稳定性。

实验动物SPF鸡质量控制标准介绍

无特定病原体(SPF)鸡是目前国际上公认的唯一陆禽类实验动物,是禽用及部分人用生物制品生产和检定的重要原材料之一。SPF鸡的微生物学、遗传学、配合饲料和饲养管理等方面的系列质量标准的制定和发布实施,对规范SPF鸡的生产,提高其在禽病和生命科学研究中的可靠性和可重复性,保证疫苗质量,具有重要意义。本文从微生物学、遗传学、配合饲料、饲养管理和运输等5个方面,梳理了SPF鸡质量控制有关的现行国家标准、团体标准和地方标准,期望能为SPF鸡的生产和使用单位提供有益的参考。

不同接种途径对H9亚型禽流感病毒在SPF鸡的致病性

目的探讨H9亚型AIV不同接种途径对SPF鸡致病性的影响。方法以气管接种和静脉接种途径对SPF鸡进行人工感染。结果气管接种组死亡率为16.7%,而静脉接种组未见死亡;称重发现气管接种组平均体重显著低于静脉接种组;跟踪泄殖腔排毒发现气管接种组试验鸡排毒率高于静脉接种组,排毒时间也长于后者;病理切片观察可见气管接种组病变严重,恢复期长;在免疫组化试验中,气管接种组可在肺中检测到病毒存在,而静脉接种组各组织中均未检测到病毒的存在。结论气管接种H9亚型AIV组比静脉接种组致病性更强,是评价H9亚型AIV致病性更为有效的接种途径。

SPF巴马小型猪的培育及应用

利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。

IBDV感染SPF雏鸡法氏囊中TLR3表达的动态变化

为了研究鸡Toll样受体3(ch TLR3)基因在传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的雏鸡法氏囊内的表达情况,试验用IBDV感染14日龄SPF雏鸡,采用荧光定量PCR技术及间接免疫荧光技术检测法氏囊中TLR3基因及蛋白的表达情况。结果表明:感染组雏鸡法氏囊中TLR3 mRNA及蛋白表达均呈先升高后降低的趋势。说明TLR3参与雏鸡抵抗IBDV入侵的过程。

HBK-SPF鸭MHCI区域微卫星标记分析

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序,发现A位点具有多态性,为(GT)n的重复结构,第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应,结果直接测序,在重复结构之前的108bp中,发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物;C位点位于MHC I拷贝基因UDA和UEA之间,扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源,无法判断基因型;D位点表现为单态,为(ATA)15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭MHC I基因结构和建立家系提供了依据。

SPF级SD大鼠部分生物学指标的建立

目的建立SPF级SD大鼠的部分正常生理、生化指标。方法分别取1、2、3、4、6、9、12月龄的SPF级SD大鼠,雌雄各半。测量动物的生长曲线、脏器系数和血液生化等指标。结果雄性动物的体重增长趋势比雌性动物高;随年龄的增长,脏器系数逐渐减低;多数生化指标受年龄及性别因素影响。

体内原位电穿孔致雄性SPFKM小鼠睾丸损伤的实验研究

目的利用电穿孔仪对成年雄性SPFKM小鼠睾丸进行电穿孔实验,以观察电穿孔对成年雄性SPFKM小鼠睾丸的损伤,为体内精子介导基因转移提供依据。方法设置高压和低压两组不同的体内电穿孔参数,将SPFKM小鼠睾丸置于电穿孔仪上的钳型电极的两侧进行体内电穿孔,2周后处死动物,分离睾丸和附睾,将睾丸称重后用4%多聚甲醛固定,常规组织切片和HE染色,显微镜下观察;将附睾置于M16培养基中分离其中精子,稀释后置显微镜下观察。结果(1)高压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:高压电穿孔可造成睾丸的不可逆损伤;其睾丸质量也显著低于对照组睾丸质量(P<0.01)。(2)低压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:低压电穿孔虽可造成睾丸一定的损伤,但这种损伤是可逆的,经过一段时间的恢复后雄鼠仍具有生殖能力。并且电穿孔后的睾丸质量与对照组睾丸质量不存在显著差异(P>0.05)。结论合理地设计体内电穿孔参数,一方面不会对SPFKM雄鼠睾丸的生殖能力造成严重影响,另一方面它还可为外源基因导入到生殖细胞提供了一种可能。

SPF鸡营养需要分析及参考营养标准的研究

本文分析了SPF鸡特殊的生活环境、生理机能和饲料处理方法,研究了制定SPF鸡营养需要量标准应考虑的核心因素,在此基础上提出了SPF鸡不同阶段的参考饲养标准。结果认为,SPF鸡的能量需要较普通鸡稍低,其它营养成分的需要量应主要考虑补足饲料灭菌过程中的损失量。

SPF鸡新引种群的饲养与保种研究

随着中国养禽业的发展和疫苗生产的不断扩大，无特定病原（ＳＰＦ）鸡蛋的需求量也随着增加。为了提高生产力和市场竞争力，１９９５年初北京实验动物研究中心从美国引入了ＳＰＦ种蛋。其中母系１８００枚，父系２００枚。引入种蛋在一个完全独立的屏障系统中孵化和饲养，经两次微生物监测完全符合引种标准后解除隔离。新种群按照预先设计的保种方案，经几个世代的保种繁育，各项生产性能表现出高于或等于引入种群的生产性能。特别是产蛋率和受精率从引入种群的８３％和９３％提高到８５％和９８％。与中心原有种群（澳大利亚）相比，各项生产性能有了大幅度提高，经济效益明显提高。

国产IVC笼盒在繁育SPF小鼠中的应用探讨

目的探讨国产独立通风笼盒(IVC)在无特定病原体(SPF)级小鼠繁育生产中的应用及实验效果。方法 84对小鼠随机分为3组,每组28对。应用屏障环境系统和IVC笼盒进行SPF级小鼠的繁育生产并分析每组中小鼠的产仔数、离乳数及体重变化等生长发育情况。结果屏障环境系统内与IVC笼盒内各组小鼠的产仔数和离乳数差异均有统计学意义(P<0.01);14日龄内小鼠体重变化差异无统计学意义(P>0.05),从21日龄起各组小鼠体重变化生长发育情况比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论国产IVC笼盒繁育小鼠的生长发育等质量标准若要达到SPF级国家标准。还需完善相关配套措施。

凡纳对虾SPF种苗工程与集约化防病养殖模式

对虾养殖业的可持续发展依赖于健康种苗的供给和虾病的预防。池塘培育凡纳对虾全人工繁育和连续传代技术的发展增加了我国人工养殖对虾种苗的可持续供给,减少对我国斑节对虾、中国对虾和日本对虾等土著对虾种类野生亲虾的捕捞。目前,我国每年生产30万吨以上的凡纳对虾,约占全国总产量的80%。但是,病害仍是我国对虾养殖业的主要威胁,尤其是病毒病原引起疾病的大规模暴发流行。我国凡纳对虾养殖业中最重要的病毒性病原是白斑综合症病毒(WSSV)桃拉病毒(TSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)。本文报道了我国凡纳对虾 SPF 种苗工程和集约化防病养殖模式的最新进展。SPF 种苗工程技术可以使繁育系统排除 WSSV、TSV 和 IHHNV 等严重病毒病原的侵害,提高凡纳对虾亲本和种苗的质量。改进的集约化防病养虾系统则是一种生物安全性更高防病更有效果和环境更友好的集约化养殖系统。

加系SPF大白猪和长白猪群体遗传学分析

目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5271和0.5877;长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5652和0.6066。由于S0155、S0143、S0178、Sw857和Sw936位点内等位基因大小和含量差异显著(P<0.01)可作为大白猪和长白猪品种鉴定的候选位点。F-统计和迁移率分析结果表明,群体内的分化较小,遗传结构稳定。结论引进加系SPF纯种大白猪和长白猪的遗传结构与国内部分纯种大白猪和长白猪相比更为稳定,可作为实验动物模型应用于动物医学和科学研究。

超净生物层流架内长期维持SPF裸鼠生产、应用的体会

我所７年多来在超净生物层流架内繁育裸小鼠１０００余只，进行了１０个课题的研究．历年来在国家卫生部认可的卫生部上海生物制品研究所医学检验中心作９次检查，所养裸鼠达到无特殊病原体（ＳＰＦ）动物标准．结果表明层流架及其区域净化是一种小型的经济的长期保持ＳＰＦ级裸鼠繁育应用的实用方法及设施．

某SPF实验动物中心净化空调系统的自动控制和节能

介绍了该工程自动控制和节能方面的特点,通过现场测试数据分析了该工程的实际运行状态,并提出了节能措施。

定义“SPF”级实验大小鼠和制定健康监测方案时需考虑的因素（英文）

"无特定病原菌(SPF)"名词意味着排除了对宿主致病的特定的病原菌清单。许多机构在使用活体动物开展生物医学研究时,考虑到许多不同的因素,包括动物来源、设施布局、微生物学背景、工程技术标准、运行实践和试验需要,倾向于制定机构层面的生物排除清单。同样地,机构层面的健康监测方案的设计和实施也根据需要有所不同。相比之下,中国的实验动物生产者和使用者受制于国标,国标中根据动物健康分类建立了国家层面生物排除清单,同时也规定了特定的动物健康等级对应的详细的动物房工程设计标准。此外,本文还汇总了北美主要的啮齿类供应商的SPF清单,来提示实验动物使用者在评估自己的实验大小鼠的生物排除清单和制定机构层面的健康监测方案时应该考虑不同的因素,来确保动物种群的健康和科学的完整性。

SPF实验动物屏障系统的运营管理

按照《中华人民共和国实验动物管理条例》的要求建设和管理无特定病原体(Specific Pathogen Free, SPF)级动物实验室,并制定了一系列的管理措施。建成后的SPF级动物实验室的各项条件均符合国家有关标准并验收合格取得《实验动物使用许可证》。总结了我校SPF级实验动物屏障系统的运营管理经验,包括屏障系统设施环境的维护、屏障设施物料及物流管理。