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Fluorescence Tracking of Exogenous DNA in Genetic Transformation of the Chinese Oak Silkmoth Antheraea Pernyi via Sperm-Mediated Gene Transfer 被引量:1
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作者 刘丹梅 李文利 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2014年第4期391-395,共5页
Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( ... Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( SMGT). Sperms entry into the female reproductive system and eggs were observed using fluorescence microscopy. The ability of A. pernyi sperms to uptake exogenous DNA was confirmed,and transfer of the exogenous DNA was shown by GFP expression in the transgenic eggs. Our result suggested that SMGT could also be used to directly generate transgenic A. pernyi expressing functional genes of interest. 展开更多
关键词 Antheraea pernyi(A.pernyi) exogenous DNA fluorescein isothiocyanate(FITC) label green fluorescent protein(GFP) sperm-mediated gene transfer(SMGT)
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Progress in gene transfer by germ cells in mammals 被引量:4
2
作者 Yidong Niu Shulong Liang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第12期701-714,共14页
Use of germ cells as vectors for transgenesis in mammals has been well developed and offers exciting prospects for experimental and applied biology, agricultural and medical sciences. Such approach is referred to as e... Use of germ cells as vectors for transgenesis in mammals has been well developed and offers exciting prospects for experimental and applied biology, agricultural and medical sciences. Such approach is referred to as either male germ cell mediated gene transfer (MGCMGT) or female germ cell mediated gene transfer (FGCMGT) technique. Sperm-mediated gene transfer (SMGT), including its alternative method, testis-mediated gene transfer (TMGT), becomes an established and reliable method for transgenesis. They have been extensively used for producing transgenic animals. The newly developed approach of FGCMGT, ovary-mediated gene transfer (OMGT) is also a novel and useful tool for efficient transgenesis. This review highlights an overview of the recent progress in germ cell mediated gene transfer techniques, methods developed and mechanisms of nucleic acid uptake by germ cells. 展开更多
关键词 erm cell sperm-mediated gene transfer testis-mediated gene transfer ovary-mediated gene transfer
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PAMAM-D对异种移植用外源基因转染猪精子细胞的安全性研究
3
作者 杨惠祥 乔宝民 +3 位作者 王广有 李胜芝 张玥 马腾骧 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期769-772,共4页
目的研究应用PAMAM-D对异种移植用外源基因hDAF转染猪精子细胞的安全性。方法制备PAMAM-D/hDAFcDNA复合物,将PAMAM-D及复合物与处理后猪精子细胞共孵育,经精子质量检测工作站检测孵育后的精子活力和精子畸形率。结果经精子质量检测工作... 目的研究应用PAMAM-D对异种移植用外源基因hDAF转染猪精子细胞的安全性。方法制备PAMAM-D/hDAFcDNA复合物,将PAMAM-D及复合物与处理后猪精子细胞共孵育,经精子质量检测工作站检测孵育后的精子活力和精子畸形率。结果经精子质量检测工作站检测,PAMAM-D和PAMAM-D/DNA复合物对猪精子细胞活力和精子细胞畸形率没有明显影响。结论 PAMAM-D及其复合物对猪精子细胞没有明显毒性,应用PAMAM-D制备异种移植用转基因动物是一种安全的方法。 展开更多
关键词 精子载体 PAMAM-D 异种移植 安全性 人衰变加速因子基因
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脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备
4
作者 吴连连 袁红花 朱孝荣 《实验动物科学》 2012年第6期10-12,16,共4页
目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚... 目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1 精子介导转基因 转基因小鼠
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精子介导法建立sFat-1转基因小鼠模型
5
作者 李小平 曾博 +2 位作者 邹方东 岳碧松 尹海林 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期1003-1006,共4页
利用精子介导的基因转移(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)方法,将sFat-1 DNA片段直接和小鼠精子孵育,再通过体外受精、胚胎移植等技术建立sFat-1转基因小鼠模型。经PCR检测,16只后代中发现2只阳性个体,Southern blot进一步鉴定的结... 利用精子介导的基因转移(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)方法,将sFat-1 DNA片段直接和小鼠精子孵育,再通过体外受精、胚胎移植等技术建立sFat-1转基因小鼠模型。经PCR检测,16只后代中发现2只阳性个体,Southern blot进一步鉴定的结果显示有2只后代整合了sFat-1基因,成功建立sFat-1转基因小鼠模型,转基因率为12.5%。本研究运用精子介导的转基因方法将sFat-1基因整合到小鼠基因组中,为进一步研究sFat-1的生物学功能提供了实验动物模型。 展开更多
关键词 sFat-1基因 精子介导的基因转移 多不饱和脂肪酸
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大珠母贝精子介导外源基因转移研究 被引量:16
6
作者 胡炜 喻达辉 +2 位作者 汪亚平 吴开畅 朱作言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期165-168,共4页
将大珠母贝(PinctadamaximaJameson)精子与“全鱼”GH基因重组体pCAgcGH和pCAgcGHc的线性DNA混合,温育30min,经6次、27、10kV脉冲电处理后,与卵子受精,得到若干贝苗。从贝苗中提取DNA,经PCR扩增和Southernblot分子杂交表明,部分受体带... 将大珠母贝(PinctadamaximaJameson)精子与“全鱼”GH基因重组体pCAgcGH和pCAgcGHc的线性DNA混合,温育30min,经6次、27、10kV脉冲电处理后,与卵子受精,得到若干贝苗。从贝苗中提取DNA,经PCR扩增和Southernblot分子杂交表明,部分受体带有外源基因,当与精子温育的外源基因浓度分别为2μg/mL,6μg/mL及18μg/mL时,相应贝苗携带外源基因比率分别为56%,20%和50%。即在此范围内,基因转移的阳性率与外源基因的浓度呈正相关。 展开更多
关键词 大球母贝 电脉冲 精子介导 基因转移
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鱼类精子携带的外源基因导入 被引量:32
7
作者 李国华 崔宗斌 +1 位作者 朱作言 黄善衔 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期242-247,共6页
将鲤鱼(或泥鳅)精子在保存液内与人生长激素(hGH)重组质粒DNA保温,再与鲤(或泥鳅)卵受精。由此发育的鱼苗经DNA分子杂交和PCR检测证明,33.3%(或37.0%)的个体带hGH基因,其拷贝数在4—150/细胞... 将鲤鱼(或泥鳅)精子在保存液内与人生长激素(hGH)重组质粒DNA保温,再与鲤(或泥鳅)卵受精。由此发育的鱼苗经DNA分子杂交和PCR检测证明,33.3%(或37.0%)的个体带hGH基因,其拷贝数在4—150/细胞之间。在一定条件下,精子可作为携带外源基因的载体,通过受精作用产生转基因鱼。 展开更多
关键词 鱼纲 精子 基因转移 外源基因
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中华蜜蜂精子介导egfp基因转移 被引量:13
8
作者 郭冬生 孙亮先 +1 位作者 曾志将 张巧利 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期878-882,共5页
中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫,也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴,然后通过人工授精技术将精子导入处女王... 中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫,也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴,然后通过人工授精技术将精子导入处女王,再对实验蜂群后代进行分析。结果显示EGFP蛋白在一群实验组蜂的1~2日龄小幼虫中表达较强,能检测到0.01%~0.02%荧光阳性小幼虫个体;通过PCR和RT—PCR技术分析,证实转入的外源egfp基因获得表达。实验结果表明精子载体法能够用于中华蜜蜂外源基因的转移和表达。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 精子 基因转移 EGFP基因 精子载体法 人工授精
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外源基因对精子的影响及其在山羊早期胚胎中的表达 被引量:4
9
作者 叶华虎 董罡 +7 位作者 袁菊芳 隋丽华 胡娟峰 李瑞生 刘彦 马啸 陈振文 曾林 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1421-1426,共6页
在前期实验中发现,山羊精子可自发结合外源DNA,但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊,进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达,结果发现:外源基因与精子共同孵育后,精子的活率、顶体... 在前期实验中发现,山羊精子可自发结合外源DNA,但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊,进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达,结果发现:外源基因与精子共同孵育后,精子的活率、顶体反应发生率和受精能力均呈下降态势,其降幅与精子的结合能力密切相关。利用与DNA共育后的精子进行体外受精,外源基因可被导入卵母细胞并在早期胚胎中获得表达,但胚胎阳性率因精子供体不同而差异显著(P<0.05);其中来源于高、中结合能力供体生产的胚胎,分别有16.2%(25/154)和5.3%(4/76)可检测到外源基因存在,但表达仅见于高结合能力供体生产的早期胚胎,表达率为6.5%(10/154);低结合能力供体生产的胚胎无外源基因。研究表明,在以精子载体方法生产转基因动物的实验过程中,筛选对DNA结合能力较强的精子供体是提高转基因效率的前提,但需要考虑外源DNA对精子受精能力的影响。 展开更多
关键词 精子介导基因转移 精子 胚胎 山羊
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电脉冲作用将外源基因导入稀有鮈鲫精子的研究 被引量:9
10
作者 钟家玉 茅卫锋 朱作言 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期128-132,共5页
将稀有鲫 (Gobiocyprisrarus)精子与重组质粒pCAhLFc线性DNA混合温育 ,经电脉冲处理后与卵子受精 ,孵化出苗。从鱼苗中提取DNA ,经PCR检测 ,2 5 .5 %~ 6 6 .7%鱼苗带有外源基因。在显微镜下观察经电脉冲处理过的精子 ,发现其活力有不... 将稀有鲫 (Gobiocyprisrarus)精子与重组质粒pCAhLFc线性DNA混合温育 ,经电脉冲处理后与卵子受精 ,孵化出苗。从鱼苗中提取DNA ,经PCR检测 ,2 5 .5 %~ 6 6 .7%鱼苗带有外源基因。在显微镜下观察经电脉冲处理过的精子 ,发现其活力有不同程度下降 ,受精率也有不同程度下降 ,说明不同的电脉冲条件对精子有不同程度的损害作用。精子与外源DNA混合温育 ,经电脉冲处理后 ,用DNA外切酶消化后 ,提取精子DNA ,经PCR检测 ,仍有阳性电泳带 。 展开更多
关键词 稀有ju鲫 电脉冲-精子介导转基因法 外源基因导入 转基因鱼
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脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究 被引量:5
11
作者 孙新明 魏泓 +1 位作者 赵永聚 王爱平 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期77-82,共6页
研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后... 研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2%,22.6%,27.5%,差异不显著(p>0.05).③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3%和25.5%,极显著高于原精液直接加入1∶10∶1转染液不洗涤处理组的25.6%和11.4%及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2%和7.8%(p<0.01).④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1%、0.3%、0.6%BSA(质量/体积)的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3%和25.5%、35%和21.4%、27.5%和15.3%及11.2%和8.2%;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高(为41.3%和25.5%).研究表明:脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染. 展开更多
关键词 精子介导基因转移 脂质体 山羊
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家蚕精子介导转基因技术体系的优化 被引量:7
12
作者 张业顺 夏定国 +4 位作者 张国政 唐顺明 沈兴家 赵浩勤 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期201-206,共6页
为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移... 为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移技术方案为:处女蛾交尾囊注射6~8μL以0.1×TE稀释的2 g/Lpig-gyBac转座子载体DNA后正常交配产卵,根据G0代5龄期及蛾期PCR检测标记基因为阳性的蛾区自交,G1代阳性个体自交以获得纯合后代。 展开更多
关键词 家蚕 精子介导转基因 交尾囊注射 转座子载体DNA PCR检测
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精子介导GFP基因在小鼠早期胚胎中的表达 被引量:3
13
作者 董焕声 房勇卫 +5 位作者 李兰 李晓林 孙理兰 翟向玮 潘庆杰 沈伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期535-539,共5页
利用DIG末端标记技术和免疫组化技术分析了小鼠精子体外结合内化外源DNA的效率。试验结果表明,不同小鼠个体的精子结合外源DNA的阳性率有明显差异(P<0.01),平均为13%。利用考马斯亮蓝染色评价了小鼠精子顶体反应发生的情况,筛选出TY... 利用DIG末端标记技术和免疫组化技术分析了小鼠精子体外结合内化外源DNA的效率。试验结果表明,不同小鼠个体的精子结合外源DNA的阳性率有明显差异(P<0.01),平均为13%。利用考马斯亮蓝染色评价了小鼠精子顶体反应发生的情况,筛选出TYH培养液为较合适的体外受精液。利用小鼠体外受精技术,将体外转染GFP基因并获能的小鼠精子与成熟卵母细胞进行体外受精,受精卵进行体外培养,表达GFP胚胎的阳性率为4.7%。验证了精子介导制备转基因小鼠胚胎的可行性,并建立了利用精子载体法制备转基因小鼠胚胎的平台。 展开更多
关键词 转基因动物 精子介导基因转移 体外受精
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电穿孔技术及其在精子介导转基因中的应用 被引量:4
14
作者 张业顺 张国政 +1 位作者 夏定国 赵浩勤 《江西农业学报》 CAS 2006年第6期59-61,共3页
介绍了电穿孔技术和精子介导转基因技术,同时总结了近年来电穿孔技术在精子介导转基因中的应用进展。
关键词 电穿孔 精子介导 转基因 应用
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家蚕精子介导报告基因gfp和egfp转移技术的研究 被引量:4
15
作者 左正宏 吴春旭 +2 位作者 桂慕燕 陈元霖 洪满贤 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期580-584,共5页
探讨家蚕精子介导基因转移技术能否有效地将外源基因导入并整合到家蚕基因组中,使之稳定遗传.分别进行了含gfp报告基因的pG350载体和含egfp报告基因的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体的精子介导基因转移实验.结果表明,导入线性pG350载体,... 探讨家蚕精子介导基因转移技术能否有效地将外源基因导入并整合到家蚕基因组中,使之稳定遗传.分别进行了含gfp报告基因的pG350载体和含egfp报告基因的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体的精子介导基因转移实验.结果表明,导入线性pG350载体,在14个G0代实验蛾区的DNA样品中,有5个PCR检测为阳性,阳性率为35.7%;对G1代的PCR与Southern blot检测的结果证明,导入的gfp基因存在于G1代的家蚕基因组中.导入不同浓度或构型的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体时,对G0代的PCR检测结果表明,导入线性pMD-Fib-IE-EGFP组的PCR阳性率为61.2%,而导入环状质粒组的PCR阳性率为57.1%;导入环状pEGFP-N3组的PCR阳性率为46.2%;对部分PCR阳性蛾区进行Southern blot检测结果表明,导入的egfp基因整合在G0代家蚕基因组中.本研究的结果表明,家蚕精子介导基因转移能够将外源基因有效地导入、整合于家蚕基因组,并可遗传至G1代. 展开更多
关键词 精子介导基因转移 家蚕 绿色荧光蛋白
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家蚕转基因方法的初步研究 被引量:3
16
作者 王宇 刘辉芬 +1 位作者 李维 邱兴林 《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第3期455-458,440,共5页
为建立家蚕转基因研究中切实可行的外源基因导入方法、分别用显微注射法、精子介导法、脂质体法和压力渗透法将含有绿色荧光蛋白(gfp)基因的转座子载体和辅助质粒转入到家蚕的受精卵中。在后代中检测到发绿色荧光的蚕茧,用PCR方法检测... 为建立家蚕转基因研究中切实可行的外源基因导入方法、分别用显微注射法、精子介导法、脂质体法和压力渗透法将含有绿色荧光蛋白(gfp)基因的转座子载体和辅助质粒转入到家蚕的受精卵中。在后代中检测到发绿色荧光的蚕茧,用PCR方法检测到后代个体染色体中含有gfp基因,并比较了上述几种方法的优缺点,为进一步进行转基因家蚕的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 转基因家蚕 显微注射 脂质体法 精子介导法
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转人乳铁蛋白基因草鱼抗GCHV的初步研究 被引量:10
17
作者 钟家玉 朱作言 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期528-530,共3页
关键词 草鱼 精子电脉冲介导转基因法 人类乳铁蛋白 出血病 攻毒实验
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精子载体法获得转人her2基因猪 被引量:3
18
作者 任红艳 张兴举 +6 位作者 杨述林 李新云 单同领 靳二辉 唐中林 崔文涛 李奎 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第3期50-52,共3页
将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合,17℃静置处理使外源DNA进入精子头部,通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪,经PCR特异性片段扩增,特异片段序列测定和比对,共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基... 将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合,17℃静置处理使外源DNA进入精子头部,通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪,经PCR特异性片段扩增,特异片段序列测定和比对,共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基因已在猪染色体上整合,其整合率约为20%。本研究利用精子载体法成功获得了转基因阳性猪,为大动物的转基因研究提供了理论与实践的参考。 展开更多
关键词 精子载体法 转基因猪 人her2基因
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精子介导转基因动物的制备 被引量:1
19
作者 秦洁 李碧春 +1 位作者 蔡琳琳 季从亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期34-38,共5页
近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包... 近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包括 :直接将外源DNA与精子共孵育至成熟 ;提取分离的精子DNA或进行预处理至精子发育成熟 ;以及在辅助受精前分离精子细胞等。此外 ,一些显微注射技术 ,如在输精管内进行体内直接转染雄性生殖细胞 ;将体内转染的雄性生殖细胞植入已分离的雄性生殖细胞 ,再显微注射至受体的睾丸 ,这些技术也逐渐成熟起来。研究表明 ,通过体内、体外转染外源DNA的显微操作技术只需将雄性受体与野生型雌性交配就可产生出转基因的后代个体 ,同时也避免了辅助受精和胚胎操作带来的机械损伤 ,因此具有一定的优势。本文综述了精子介导转基因 (SMGT)技术的发展历程、研究现状及前沿进展。 展开更多
关键词 精子 体内 转染 介导 辅助 受体 显微操作 转基因 成熟 外源DNA
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精子载体转基因的研究进展 被引量:2
20
作者 李海华 陈英 林树茂 《中国畜牧兽医》 CAS 2002年第5期30-31,共2页
精子载体法培育转基因动物是目前操作最简便、成本低廉且危险隐患相对较低的一种转基因方法。近 1 0年来的研究结果表明 ,精子载体法可得到转基因阳性动物 。
关键词 精子载体 转基因 动物生产
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