单精子卵胞浆内注射术中不同来源精子的处理方法

目的 :介绍单精子卵胞浆内注射术 (ICSI)中不同来源精子的洗涤处理方法。方法 :轻度少、弱精精液或正常精液精子 ,采用Percoll梯度离心法或直接离心加上游法处理 ;严重少、弱精精液精子或无精子症的附睾液精子 ,采用直接离心法处理 ;无精子症的睾丸组织内精子 ,采用组织磨碎加直接离心法处理。结果 :三种方法处理后 ,均获得足够的活动精子用于ICSI治疗 ,ICSI操作均能顺利进行。采用直接离心法获得的精子行ICSI可以获得相似的治疗结果。结论 :不同来源精子都可以经直接离心法处理 ,并能有效用于ICSI治疗中。

精子洗涤对精液中HBV DNA含量的影响

目的 :检查HBV感染者精液是否存在乙型肝炎病毒 (HBV) ,探讨精子洗涤是否能去除其中的HBVDNA。方法 :用实时荧光定量PCR(FQ -PCR)法检测 5 7名血清HBsAg阳性患者精液中HBVDNA ,采用Percoll非连续梯度离心及上游法分离其中 2 1份精液 ,并对洗涤后标本进行HBVDNA检测。结果 :6 2份精液标本中有 15份HBVDNA阳性 ,阳性率为2 4 .19% ;2 1份用于洗涤的精液标本中 ,有 7份HBVDNA阳性 ,洗涤后仍有 6份标本阳性。结论 :部分HBV感染者精液具有传染性 ,精子洗涤不能完全去除精液中的乙肝病毒。将HBV感染者的精液用于人工授精或体外受精应慎重。

洗精处理的细菌学分析

人类精液中可能存在各种微生物,人工授精引起生殖道感染已有报道,要实现更高一级的授精技术,如宫腔内授精,配子输卵管内移植,体外授精等必须从细菌学角度去证实精子经过处理后不含任何引起盆腔感染的微生物。作者收集20例不孕妇女的丈夫与有生育能力的健康供精者精液标本,按工作习惯分随意收集与注意清洁处理的特定收集两组,比较洗精处理前后定量细菌培养菌落数。培养结果,洗精处理前,除特定收集精液标本2份需氧与厌氧菌阴性外,其余18份需氧与厌氧菌均为阳性,每份标本阳性菌落数范围1～4个,总菌落数40,菌落计数均>10~2cfu(集落形成单位)/ml;57.5%>10~3cfu/ml;30％>10~5cfu/ml。洗精后特定收集组无论需氧与厌氧菌为阴性,随意收集组需氧菌培养无一例阳性,而厌氧培养7例阳性,但菌落均<10~2cfu/ml。对比洗精处理前显著减少(P<0.01),7例特定收集标本经洗精处理后沉淀物电子显微镜超薄切片与扫描检查均未见有任何微生物附着精子任何部位,也未见有游离微生物。因而认为从注意无菌操作收集精液开始,经过洗精处理是可以有效去除人精液微生物的。

两种不同方法处理牛分离精子对体外受精效果的影响

本试验旨在探讨采用2种不同方法处理牛分离精子对精子活力、浓度及体外受精(IVF)效果的影响。将体外培养成熟卵母细胞随机分为2组,与分别用洗涤法和Percoll法处理牛分离精子进行IVF,并观察处理后各组的精子活率、浓度和IVF后囊胚发育率。结果显示,洗涤法和Percoll法处理后精子活力和IVF后的囊胚发育率均无显著差异,但采用洗涤法处理后分离精子浓度极显著高于Percoll法,可显著提高分离精子利用效率,且方法简便、经济,应优先选择使用。

四种精液处理方法优选冷冻精子的比较

目的 探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据。方法 门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液。冷冻精液复苏后,根据优选处理方法不同分为4组:SW组、DGC组、SU组和MACS组,每组样本各20例。比较分析各组优选前后精子浓度、前向运动精子活率、膜完整性、正常形态率及DNA碎片率等的差异。结果 SW组,处理前后前向运动精子活率、精子膜完整性、正常形态率及DNA完整率,均无显著性差异(P>0.05);DGC和SU组中,优选后前向运动精子活率[分别为(78.19±12.13)vs.(34.17±8.61)、(82.20±7.17)vs.(42.86±16.38)]、精子膜完整率[分别为(84.62±5.84)vs.(68.17±6.74)、(81.44±4.47)vs.(65.19±6.15)]、正常形态率[(20.42±4.63)vs.(12.16±5.75)、(25.02±4.61)vs.(10.24±5.37)]及DNA完整率[(86.73±7.07)vs.(67.98±6.45)、(88.49±3.09)vs.(67.44±5.89)]均显著高于同组优选前(P<0.05);MACS组中,优选后冷冻精子的膜完整性[(84.00±5.33)vs.(69.21±7.79)]、正常形态率[(13.72±4.58)vs.(7.90±3.80)]及DNA完整率[(91.95±2.82)vs.(69.79±3.90)]亦显著高于优选前(P<0.05),但前向运动精子活率没有显著改善(P>0.05)。结论 四种方法在处理冷冻精子方面各有优缺点,临床可以根据精液标本的质量或者对于精液制备液的要求来选择不同的精子优化方法。MACS可以较好地优化DNA完整率,其在辅助生殖领域的应用具有一定前景。

大熊猫精液超低温冷冻的比较

对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的 9只雄性大熊猫电刺激采精 ,比较研究了稀释液中甘油含量、精液离心、不同稀释液和冷冻方法对大熊猫精液超低温冷冻保存后的活力、运动状态和顶体的影响。稀释液中甘油的含量为 4 %～ 5%较好 ,冻精解冻后的活力和顶体的正常率能保持鲜精的一半。离心和未离心的精液经超低温冷冻 ,解冻后的活力和运动状态都较接近。TEST和SFS两种稀释液的效果没有明显的差异。细管的冷冻过程较颗粒方便、快捷 ,时间容易控制 ,是一种较好的超低温冷冻精液的方法。

简单的洗涤程序对高龄男性精子功能的影响

目的探讨辅助生殖技术过程中简单的精子洗涤程序对高龄男性精子功能的影响。方法选取2018年3月1日至6月1日在宁夏医科大学总医院生殖中心门诊就诊的男性不育患者68例,将其分为2组:低年龄组(20～<40岁,n=32)和高年龄组(40～50岁,n=36)。每份精液样本依据世界卫生组织标准检测精液的各项常规参数和精子功能,处理过程按照《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册(第5版)》推荐的简单洗涤程序进行操作。分别检测精液处理前2组精液体积、精子浓度、精子活力、精子正常形态率,以及处理前后精子功能指标包括[精子DNA断裂指数(DFI)、精子线粒体膜电位(MMP)及顶体反应(AR)],并进行结果的比较、分析。结果精子常规参数结果显示,高年龄组精子正常形态率低于低年龄组,差异有统计学意义(P<0.05);但2组在精液体积、精子浓度、精子活力方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组经过简单洗涤处理后,精子DFI值均明显升高,且高年龄组升高幅度高于低年龄组;MMP值显著降低,且高年龄组的降低幅度高于低年龄组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组AR值经处理后显著降低,但2组间的降低幅度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高龄对精液体积、精子浓度、精子活力无明显影响,但对精子正常形态率影响较大;在高龄组精子处理过程中精子的DFI、MMP变化较大,需要进一步优化处理洗涤过程,以减少对精子的负面影响。

人工液化和洗涤法体外精液处理技术应用研究

目的：比较人工液化法和洗涤法体外处理不育症精液的疗效。方法：采用胰蛋白酶液化不育症２０例精液宫腔注入（Ａ组），其中未受孕１９例精液，再采用洗涤法后宫腔注入（Ｂ组），观察受孕。结果：Ｂ组精子活力、穿透力明显高于Ａ组（Ｐ＜００５），前者１０例受孕，后者１例受孕。结论：人工液化精液精子质量、受精能力低于人工洗涤精子。

改良精子上游法用于体外受精-胚胎移植

本文报告一种用以收集高活动力精子的改良上游枝术,并在体外受精-胚胎移植中与常规洗涤法相比较。用上游法获得的精子悬液平均精子活动力为93.36±8.44%(X±SD),Ⅰ、Ⅱ级前向运动精子比例占75%以上。比较两种精子分离方法的体外受精率:上游法为45.65%,洗涤法为30.30%,p<0.05。在8例以上游精子授精所得胚胎行胚胎移植中,2例获得妊娠并已足月顺产出“试管婴儿”。

不同获能液及不同处理方法对兔精子获能的影响

本研究主要是为了探讨体外受精过程中不同获能液及不同处理方法对精子获能的影响。本实验采用BO液和TCM199液2种获能液,分别使用上游法和洗涤法对精子进行获能处理,通过分析各组的精子存活时间、活精子百分率和顶体反应率,从而选择最佳的精子获能组合方法。结果表明:采用BO液和TCM199液2种获能液,分别使用上游法和洗涤法对精子获能处理,其对精子存活时间的影响差异均不显著(P>0.05);在相同获能液的条件下,2种不同的精子获能方法对活精子百分率的影响差异均不显著(P>0.05);在相同的精子获能处理方法条件下,采用BO液对活精子百分率的影响均显著高于TCM199液培养组(P<0.05);采用BO液培养,2种不同的精子获能方法对精子顶体反应率的影响差异显著(P<0.05),采用上游法处理时,2种不同获能培养液对精子顶体反应率的影响差异显著(P<0.05)。

精液处理前液化时间对人工受精妊娠率的影响

目的探讨精液取出后液化10~20 min处理与液化21~30 min处理对人工受精妊娠率的影响。方法选择2011年12月—2015年12月行人工授精助孕的患者,随机分为A组、B组。A组精液处理前液化10~20 min(176 cycle),B组精液处理前液化21~30 min(360 cycle)。比较组间a+b级精子总数、妊娠率及流产率。计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用χ~2检验,妊娠率的影响因素采用Logistic多因素回归分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 A组a+b级精子总数[(58.0±38.2)×10~6/ml]低于B组[(66.0±29.4)×10~6/ml]a+b级精子总数。A组妊娠率、流产率分别为21.0%(37/176)、29.7%(11/37),B组分别为16.3%(59/360)、22.0%(13/59),两组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。男方年龄、卵泡期用药、非男方因素、处理后a+b级精子总数与妊娠率有关(OR=6.58、4.57、4.13、4.09,均P<0.05)。结论缩短精液处理前液化时间对妊娠率无明显影响。