复方驱蚊精油化学成分分析及其驱避活性评价

[目的]分析由薄荷、浮萍、石菖蒲、迷迭香4种中药植物配伍而成的复方驱蚊精油的化学成分,并进行驱避活性评价。[方法]通过气质联用色谱技术(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)分析复方驱蚊精油的化学成分,按照《空间驱避产品药效试验及评价(Y型管法)》,评价精油对白纹伊蚊成虫的驱避活性。[结果]鉴定出主要挥发性成分58种,占精油总成分的98.28%,萜类18种(44.99%)、烯烃类9种(20.27%)、酯类5种(14.07%)、芳香烃类8种(12.00%)、烷烃类7种(3.48%)、醇类9种(2.78%)、酮类2种(0.69%)。复方驱蚊精油对白纹伊蚊的驱避率(percent repellency,PR)平均达90%。[结论]复方驱蚊精油的化学成分较多,对白纹伊蚊起到驱避作用的可能有薄荷醇、薄荷酮、α-蒎烯等多种化学成分,平均驱避效果达到A级水平。

HPLC法同时测定15个产地浮萍中4种黄酮类成分

目的建立HPLC法同时测定15个产地浮萍Spirodela polyrriza(L.)Schleid.中4种黄酮类成分(荭草苷、牡荆苷、木犀草素、芹菜素)的含有量。方法分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.5%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长350 nm。结果荭草苷在0.228 0~5.700 0μg(R^2=0.999 7)、牡荆苷在0.086 4~5.400 0μg(R^2=0.999 8)、木犀草素在0.132 0~5.500 0μg(R^2=0.999 8)、芹菜素在0.026 4~6.600 0μg(R^2=0.999 9)范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为100.31%~104.58%,其含有量依次为荭草苷>牡荆苷>木犀草素>芹菜素。结论不同产地浮萍中荭草苷和牡荆苷的含有量有明显差异,而木犀草素和芹菜素比较稳定。

不同品系及苯丙氨酸饲喂对紫萍中类黄酮累积的影响

目的探讨不同品系紫萍主要类黄酮含量以及苯丙氨酸饲喂对不同品系紫萍生长及总黄酮含量的影响。方法对天津、武汉、贵阳采集的浮萍样本进行形态学及DNA条形码鉴定,利用超高效液相色谱(UPLC)测定6个品系紫萍的木犀草苷、荭草苷和牡荆素含量。用0、0.005、0.05、0.5、1 mmol·L^(-1)浓度的苯丙氨酸饲喂不同品系紫萍10 d,收样测定其鲜重、干重及总黄酮含量。结果采集的浮萍样本经鉴定为紫萍属。6个品系紫萍中p143的总黄酮和3种主要类黄酮的含量最高。0.005 mmol·L^(-1)苯丙氨酸饲喂明显促进WHD和5543的鲜重累积。0.05 mmol·L^(-1)苯丙氨酸饲喂分别使5543、W0716、9509的总黄酮含量上调了16.5%、33.1%和42.6%。结论6个品系紫萍中p143的黄酮含量最高,低浓度苯丙氨酸饲喂可以促进部分品系紫萍的生长及总黄酮含量累积。

基于UPLC指纹图谱评价不同产地浮萍的质量

目的建立浮萍药材的UPLC指纹图谱,综合比较不同产区浮萍的质量。方法采用UPLC建立浮萍药材的指纹图谱;应用PCA分析法和聚类分析对UPLC指纹图谱进行分析。结果浮萍药材UPLC指纹图谱共7个共有峰,其中4个为牡荆素、荭草苷、木犀草苷、木犀草素;产自江苏、山东、湖北和福建4个产地的浮萍药材相似度为0.987~1.000;主成分分析结果表明,荭草苷、牡荆素、木犀草苷、木犀草素等7个特征峰对评价浮萍质量具有重要作用;通过聚类分析18批药材被分成2类,产自山东的3批归为一类,其他15批归为一类。结论 UPLC指纹图谱结合PCA和聚类分析,可以客观地评价不同产地浮萍药材的质量。

浮萍的化学成分研究

从中药浮萍的正品紫萍的乙醇提取物中分离出４个黄酮化合物，经理化常数和光谱鉴定其结构，分别为芹菜素（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、木犀草素（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、芹菜素－７－Ｏ－葡萄糖苷（ａｐｅｇｅｎｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏ－ｓｉｄｅ）和水犀草素－７－Ｏ－葡萄苷（ｌｅｕｔｅｏｌｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ），它们是紫萍中的主要化学成分。

响应面优化紫萍黄酮提取工艺及其抗氧化活性

采用响应面法优化微波提取紫萍黄酮的条件。在单因素实验的基础上,选取乙醇体积分数、微波功率、液料比为影响因子,应用Box-Behnken中心组合法进行三因素三水平的试验设计,以紫萍黄酮得率为响应值,进行响应面分析(RSM),结果表明:微波提取紫萍黄酮的最佳提取条件为乙醇体积分数62%、液料比17∶1(mL/g)、微波功率500 W、微波时间9 min;在优化工艺下,紫萍黄酮的得率达到4.14%。对微波提取的紫萍黄酮进行抗氧化性研究发现紫萍黄酮对DPPH.清除作用较好,其抗氧化活性要优于相同浓度的抗坏血酸(VC)和2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)。

PB试验结合BBD响应面法优化浮萍多糖的提取工艺研究

目的:优化浮萍多糖的提取工艺。方法:在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman试验法,对影响浮萍多糖提取率的5个因素进行筛选。根据PB试验结果,选取醇沉至终的乙醇体积分数、料液比、浸提温度为考察因素,运用Box-Behnken响应面法对浮萍多糖的提取工艺进行优化。结果:3个因素对浮萍多糖提取率影响的大小依次是:浸提温度>乙醇体积分数>料液比。最优工艺为:醇沉至终的乙醇体积分数为81%、料液比为1∶42、浸提温度为100℃、浸提时间为60 min、浸提4次。结论:运用Plackett-Burman法和Box-Behnken响应面法优选的浮萍多糖提取工艺稳定可行,可用于浮萍多糖的提取。

紫萍提取物对过氧化氢诱导内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的研究紫萍提取物是否具有保护内皮细胞免受过氧化氢损伤的作用。方法采用MTT比色法筛选紫萍提取物作用于内皮细胞的安全剂量,建立H2O2对内皮细胞的氧化损伤模型,并研究紫萍提取物的保护作用。最后采用检测试剂盒方法分析紫萍提取物作用后内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化。结果紫萍提取物的浓度<100μg/ml,作用时间为24 h时,无明显细胞毒性。以1 mmol/L的H2O2作用于ECV-304细胞1 h造氧化损伤模型,10,25,50μg/ml的紫萍提取物具有预防氧化损伤作用,可使细胞的存活率由21.98%分别上升至37.49%,51.71%和64.74%,其机理可能是紫萍提取物能够剂量依赖性的增强SOD,CAT和GSH-Px等酶的活性。但是紫萍提取物无治疗氧化损伤的作用。结论紫萍提取物可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。

除草剂对水生植物的生理生态效应

首先研究了常用除草剂对水生植物的生理生态效应。结果表明在 12种除草剂中 ,乙草胺、丁草胺、艾割对紫萍 (Spirodelapolyrhiza (L .) Schleid)、金鱼藻 (Ceratophyllum demersum )生长影响显著。其后进行的丁草胺对金鱼藻生物量及生理生化影响研究表明 :金鱼藻生物量 (干重 )随丁草胺浓度的升高显著下降 ,处理后 16 d,两者呈显著的负相关。丁草胺处理后金鱼藻光合放氧速率明显下降 ,至 16 d,2、4、6、8m g/L处理分别比对照减少 36 .0 2 %、4 1.6 4 %、4 2 .74 %和 4 8.4 3% ;呼吸耗氧速率亦显著下降 ,4、6、8m g/L处理分别比对照下降 2 5 .87%、6 6 .6 4 %、6 7.94 %。呼吸耗氧速率的改变与丁草胺浓度呈极显著的负相关 ;丁草胺处理后金鱼藻叶绿素含量显著下降。谷胱甘肽 - S-转移酶 (GSTs)的变化也与丁草胺处理浓度有关 ,低浓度 (1m g/L )呈现先高后低 ,至 16 d显著低于对照 ,高浓度 (8mg/L )为先低后逐渐恢复。除草剂对水生植物的影响有可能影响整个水生生态系的功能。

浮萍药用研究概况

在广泛文献检索基础上,介绍了浮萍的基源、成分、主要功效,为深入研究开发提供基础资料。

浮萍中黄酮类化学成分的分离与鉴定

目的研究浮萍Spirodela polyrrhiza(L.)Schleid.的化学成分。方法采用正相和反相硅胶柱色谱以及半制备型HPLC进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果分离得到了5个黄酮苷类化合物,分别鉴定为芹菜素8-C-(2″-O-阿魏酰基)-β-D-葡萄糖苷(apigenin-8-C-(2″-O-feruoyl-)-β-D-glucoside,1),荭草素(rietin,2),牡荆素(vitexin,3),木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin7-O-β-D-glucoside,4),芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin7-O-β-D-glucoside,5)。结论化合物1为一个新化合物,化合物2和3为首次自该植物中分离得到。

大孔吸附树脂分离紫萍中总黄酮的工艺研究

目的探讨大孔吸附树脂法纯化紫萍总黄酮的工艺。方法将AB-8，HPD-450和HPD-6003种大孔吸附树脂对紫萍总黄酮的吸附效果进行了比较，并对AB-8的吸附特性进行了研究。结果AB-8，HPD-450和HPD～600对紫萍总黄酮的吸附量分别为：80．04，82．26和75．96mg／g，解吸率分别为90．47％，80．88％和75．84％。AB-8纯化紫萍总黄酮的工艺条件为：上柱样品pH值为5～6，以1BV／h的速度流过树脂，待吸附平衡后，用4BV的蒸馏水以2BV／h的速度淋洗树脂，然后用70％的乙醇溶液以1BV／h的流速进行洗脱，收集第2～3BV时的洗脱液，其干燥品中的黄酮纯度可达80％左右。结论AB-8型大孔吸附树脂最适合于紫萍总黄酮的分离纯化。

Cu胁迫对紫背萍的生长及活性氧清除系统的影响

通过水培实验研究了重金属铜(Cu)胁迫下的紫背萍的生理响应。结果表明:Cu对紫背萍的生长有低浓度(≤1.8mg.L-1)促进、高浓度(>1.8mg.L-1)抑制作用。紫背萍的植物体数(Y1)、叶绿素含量(Y2)均与Cu浓度(X)呈显著负相关,回归方程为:Y1=-0.53X+34.47、Y2=-0.035X+0.90;Cu对紫背萍的植物体净增殖量、叶绿素含量的4天半数抑制浓度(4d-IC50)分别为5.48mg.L-1和12.12mg.L-1。紫背萍体内的SOD活性(Y3)和CAT活性(Y4)与Cu浓度(X)之间均呈曲线相关,回归方程分别为:Y3=-5.367X2+140.56X-59.25、Y4=-7.146X2+123.65X+1101.03。POD活性在Cu浓度不超过10mg.L-1时,较之对照相差不大,但在18mg.L-1时则大幅度下降。

壳聚糖对紫萍提取液絮凝处理的工艺研究

为了后续紫萍总黄酮分离纯化过程的便利，本文采用壳聚糖乙酸溶液对中药紫萍粗提液进行了絮凝除蛋白的处理，并研究了絮凝过程中壳聚糖加入量、絮凝温度、粗提液pH值和壳聚糖粘度对絮凝效果的影响。结果表明，粘度为30Pa·s的壳聚糖，当加入量为待絮凝液体积的6％，絮凝温度为60℃，粗提液pH值为5．5时，除蛋白效果最好，同时对溶液中黄酮类化合物的影响最小。

不同产地浮萍中元素含量测定及化学计量学分析

目的:研究青萍和紫萍两种浮萍中元素含量的分布差异。方法:采用电感耦合等离子体质谱法同时测定浮萍中25种无机元素的含量,并对测定的各元素含量进行主成分分析及正交偏最小二乘判别分析,构建了以浮萍中元素含量分布为研究对象区分青萍和紫萍间差异的实验研究模型。结果:不同产地浮萍中无机元素种类组成无明显差异,但其含量差异较大,含量最高的元素均为K元素;Ca、Mg、Na、P等常量元素及人体必需的微量元素Mn、Fe等含量也较高;此外还含有极微量的重金属元素,这对于研究浮萍所在地的重金属污染提供了有效参考。结论:两种浮萍内都含有丰富的无机元素,这可能与其药理药效作用的发挥有着密切的关系。

紫萍叶状体衰老过程中的内肽酶谱变化和外源L-丝氨酸对内肽酶谱的影响

采用双向凝胶电泳技术分析紫萍叶状体衰老期间内肽酶同工酶的变化以及外源L-丝氨酸对内肽酶影响的结果表明,在衰老的紫萍叶状体中检测到9种内肽酶同工酶,丝氨酸内肽酶EP3可能在叶状体衰老的早期起作用,而半胱氨酸内肽酶EP9在第6天出现,是衰老后期活性最强的内肽酶。培养液中加入外源的L-丝氨酸后,叶状体蛋白质含量下降加剧,与衰老相关的内肽酶EP3、EP4和EP9的活性明显增强或提前出现。