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SeMNPV抑制HaSNPV诱导的Se-UCR细胞凋亡
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作者 程睿 梁昌镛 +3 位作者 南方 胡志红 J.M.Vlak 陈新文 《中国病毒学》 CSCD 2003年第6期587-592,共6页
在采用共感染和共转染的方法构建扩大杀虫范围的重组病毒的研究过程中发现棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能诱导甜菜夜蛾细胞Se-UCR发生典型凋亡,但不能诱导另一... 在采用共感染和共转染的方法构建扩大杀虫范围的重组病毒的研究过程中发现棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能诱导甜菜夜蛾细胞Se-UCR发生典型凋亡,但不能诱导另一株甜菜夜蛾细胞Se-301产生凋亡。以5 MOI的HaSNPV感染Se-UCR,在12h左右可以观测到少量细胞凋亡,24h能观察到明显的凋亡,凋亡细胞数量随时间不断增加,到72h基本上所有的细胞均发生凋亡,成为凋亡小体,基因组DNA片段化。同时发现HaSNPV诱导的甜菜夜蛾Se-UCR细胞凋亡能够被甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleoplyhedrovirus,SeMNPV)所抑制,进一步点杂交试验发现SeMNPV和HaSNPV共同感染Se-UCR获得了HaSNPV在该细胞中的复制。 展开更多
关键词 棉铃虫单核农壳核名角体病毒 甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病 细胞凋亡 杆状病毒
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Localization and Functional Analysis of SeMNPV IE1 in Mammalian Cells
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作者 Xiao-wei MEI Li YAO Zhong-xin ZHANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期183-190,共8页
In this paper, the function of the ie1 gene from baculovirus Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus (SeMNPV), belonging to group II nucleopolyhedrovirus, was studied in mammalian cells. We amplified the SeMNP... In this paper, the function of the ie1 gene from baculovirus Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus (SeMNPV), belonging to group II nucleopolyhedrovirus, was studied in mammalian cells. We amplified the SeMNPV ie1 gene and expressed it by fusing to the C terminal of enhanced GFP protein in HEK 293 cells. Confocal microscopy revealed that the IE1-GFP fusion protein was localized in the nucleus of the mammalian cells. The promoter sequences of AcMNPV gp64, SeMNPV F protein and Drosophila hsp70 were also analyzed, to further study the function of SeMNPV IE1. The results showed that, in the absence of the hr sequence, IE1 improved the expression of the F promoter but didn't influence the gp64 promoter significantly, but IE1 moderately stimulated the hsp70 promoter. 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 甜菜夜蛾核多角体病毒 本地化 增强绿色荧光蛋白 hsp70 共聚焦显微镜 ACMNPV GP64
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39蛋白在苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒中的功能研究 被引量:1
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作者 李赛男 吕怡娜 +3 位作者 姜焕焕 黄麟淇 区炳明 刘文华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1440-1449,共10页
【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV... 【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV中行使功能,为深入探究杆状病毒的核衣壳装配机理打下理论基础。【方法】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统在AcMNPV vp39缺失型重组bacmid(bAcvp39KO)的基础上构建携带SeMNPV vp39基因、绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,egfp)和多角体蛋白基因(Polyhedrin,polh)的重组病毒(vAcSevp39:FLAG)。利用Western blotting检测分析SeMNPV vp39在vAcSevp39:FLAG转染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)IPLB-Sf21-AE clonal isolate 9(Sf9)细胞中的表达情况,通过荧光显微镜观察vAcSevp39:FLAG在Sf9中的感染和扩散情况,采用病毒滴度测定并绘制病毒生长曲线检测vAcSevp39:FLAG的感染性芽生型病毒粒子产量,并以电子显微镜观察vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中的形态发生情况。【结果】Western blotting检测结果表明,SeMNPV VP39能在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中获得表达;荧光显微镜观察和病毒生长曲线测定结果表明,在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中无感染性的芽生型病毒粒子产生,与AcMNPV vp39缺失型重组病毒(vAcvp39KO)的现象一致;电子显微镜观察发现,与vAcvp39KO不同的是,在vAcSevp39:FLAG转染的细胞中虽然未产生核衣壳,但在感染细胞的核中存在大量空的透明长管状衣壳结构,表明SeMNPV VP39能挽救vAcvp39KO的衣壳结构装配,但在AcMNPV中不具备装配核衣壳的能力。【结论】SeMNPV VP39在AcMNPV中虽能形成衣壳结构,但不能有效装配核衣壳,导致无芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子产生。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39 甜菜夜蛾核多角体病毒 芽生型病毒粒子 核衣壳装配
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39基因的克隆与生物信息学分析
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作者 李赛男 李萌 +1 位作者 赵海洲 姜玉霞 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 北大核心 2019年第8期190-197,共8页
VP39是杆状病毒核衣壳主要结构蛋白基因,为研究VP39在杆状病毒生活周期中的可能作用,用PCR方法克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39全长基因(Sevp39),将其克隆至pMD18-T载体... VP39是杆状病毒核衣壳主要结构蛋白基因,为研究VP39在杆状病毒生活周期中的可能作用,用PCR方法克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39全长基因(Sevp39),将其克隆至pMD18-T载体上,获得重组质粒T-Sevp39,进行序列测定和生物信息学分析。序列测定结果表明:扩增序列大小为981 bp,与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性99.9%,第308位的碱基由G突变成T。序列分析表明:Sevp39编码蛋白(Sevp39)有多个可能的N-糖基化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点和1个N-豆蔻酰化位点。蛋白序列比对结果表明:Sevp39与绝大部分杆状病毒VP39的序列相似性均大于30%,在Sevp39同源蛋白中有6个高度保守的半胱氨酸残基(Cys)。蛋白质二级结构预测结果显示:Sevp39可能形成7个α螺旋和14个β折叠,高度保守的Cys^17参与了β折叠的形成。上述结果为研究Sevp39在病毒入侵和病毒复制过程中所担负的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 Sevp39 克隆 生物信息学分析
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甜菜夜蛾Secrt基因克隆及其对甜菜夜蛾核型多角体病毒DNA复制的影响
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作者 韩敏敏 孙紫德 +2 位作者 方正 吴庆珊 翁庆北 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1608-1616,共9页
钙网蛋白(calreticulin,CRT)是一类真核生物中高度保守的Ca^(2+)结合蛋白,在病毒复制中起重要作用。为研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)Secrt基因及其在甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV... 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是一类真核生物中高度保守的Ca^(2+)结合蛋白,在病毒复制中起重要作用。为研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)Secrt基因及其在甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)感染细胞中的作用,本研究以宿主Se301细胞cDNA为模板,通过无缝克隆技术获得Secrt基因的完整开放阅读框1200 bp,其编码399个氨基酸。SeCRT蛋白的相对分子量为45.86 kDa,生物信息学分析发现其含有信号肽、无跨膜结构域,含有2个O-糖基化位点及28个磷酸化位点,C结构域末端具ER驻留信号HDEL,是定位于内质网上的亲水性蛋白质。以最大似然法(Maximum likelihood method)构建系统进化树,聚类结果表明SeCRT与其他鳞翅目(Lepidoptera)昆虫CRT聚为一类,其中与斜纹夜蛾(Spodoptera litura)CRT的相似性高达98.25%。实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测表明,SeMNPV感染Se301细胞后,其Secrt基因表达在mRNA水平上呈现先降低后升高最终趋于平稳的趋势,表明Secrt基因响应病毒的感染。随后通过RNAi干扰技术敲低Secrt基因,发现SeMNPV病毒DNA复制减少43.4%,表明Secrt基因影响病毒DNA复制。研究结果为进一步阐明宿主基因Secrt在SeMNPV感染中的分子机理及病毒和宿主间相互作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 基因克隆 钙网蛋白 甜菜夜蛾核型多角体病毒(semnpv) 甜菜夜蛾 病毒DNA复制
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