高住高练对肥胖大鼠肝脏SREBP-1c表达的影响

目的:探讨高住高练对高脂饮食肥胖大鼠肝脏SREBP-1c表达的影响。方法:出生21天离乳SD雄性大鼠280只,肥胖造模成功后挑选160只,2周适应性训练后筛选130只,随机分为13组:对照组(同时视为低住低练0周组、低氧安静0周组和高住高练0周组),低住低练1、2、3、4周组,低氧安静1、2、3、4周组,高住高练1、2、3、4周组。用水平动物跑台进行有氧耐力运动,低住低练各组在常氧下进行速度为26 m/min、1 h/d、6 d/w的运动,分别持续1～4周;低氧安静各组每天在低氧下(氧浓度为13.6%,约相当于3500 m海拔高度)生活,自由活动,不安排训练,分别持续1～4周;高住高练各组每天在低氧下(氧浓度为13.6%)生活23 h,训练1 h,速度为21 m/min,6 d/w,分别持续1～4周(非训练日生活24 h)。对照组于正式实验开始前、安静组于相应周数后、运动组于最后一次训练后恢复24 h取材。分别采用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测大鼠肝脏SREBP-1c基因和蛋白表达。结果:相同训练模式不同周数之间比较,高住高练组大鼠肝脏SREBP-1c mRNA和蛋白表达在第1、2、4周较对照组均变化无统计学意义(P>0.05),第3周mRNA表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),第3周蛋白表达下降,与1、2周组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。相同周数不同训练模式之间比较,第1、4周,高住高练组肝脏SREBP-1cmRNA和蛋白表达与低住低练组和低氧安静组比较差异无统计学意义(P>0.05),第2周高住高练组SREBP-1c蛋白表达高于低住低练组(P<0.01),第3周高住高练组SREBP-1c mRNA和蛋白表达低于低氧安静组(P<0.05)。结论:3周高住高练抑制肥胖大鼠肝脏SREBP-1c mRNA和蛋白表达效果较好。

脂肪分化障碍引起的胰岛素抵抗、脂肪肝及高胆固醇血症小鼠模型研究

目的观察aP2-SREBP-1c转基因小鼠糖脂代谢生物特征,探讨其在糖脂代谢紊乱性疾病研究中的应用。方法动物分为aP2-SREBP-1c转基因小鼠及其同窝野生型小鼠2组,均为雌性,观察两组小鼠体质量、进食量、进水量,不禁食及禁食12 h血中TG、TC、LDL-C、Glu水平,肝脏、肌肉脂质含量,口服糖耐量、胰岛素及瘦素,稳态胰岛素(HOMA-IR),脂肪、肝脏病理组织学变化。结果与野生型比较,aP2-SREBP-1c转基因小鼠肾周、性腺周围、皮下脂肪均明显减少(P<0.01),褐色脂肪明显增加(P<0.01),肝脏切片显示明显脂肪肝病理变化,肝脏质量明显增加(P<0.01),血中胰岛素、葡萄糖水平及HOMA-IR明显增加(P分别<0.01、0.05、0.001),瘦素明显下降(P<0.01),禁食状态血中TC、LDL-C水平均显著升高(P<0.05,P<0.01),显示存在明显的脂肪分化障碍、胰岛素抵抗、高胆固醇血症和脂肪肝。结论 aP2-SREBP-1c转基因小鼠可用于糖尿病、脂肪肝、高胆固醇血症等糖脂代谢紊乱疾病的研究。

干扰SREBP-1c对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响

目的构建SREBP-1c基因的miRNA真核表达载体,观察其对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响。方法设计并构建SREBP-1c基因的3个miRNA干扰载体,经测序鉴定miRNA载体构建成功后转染肝细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。Western blot检测转染后SREBP-1c的表达;甘油三酯测定和油红O染色检测细胞内脂质沉积;Western blot检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC1)的表达。结果靶向干扰SREBP-1c的miRNA真核表达载体构建成功。Westernblot结果显示,转染SREBP-1c-1miRNA和SREBP-1c-3miRNA载体后,L02和HepG2细胞内SREBP-1c蛋白水平表达均明显减低(P<0.05),SREBP-1c-1miRNA的干扰效果最好(P<0.05)。与对照组相比,转染SREBP-1c-1miRNA载体后L02和HepG2肝细胞内甘油三酯含量均明显降低(P<0.05),细胞内脂滴明显减少;FAS和ACC1蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 SREBP-1c基因沉默通过FAS/ACC1降低了内质网应激状态下肝细胞脂质合成。

柴芪汤对非酒精性脂肪肝大鼠固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的:观察柴芪汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)m RNA及蛋白表达的影响,探讨其防治NAFLD的可能机制。方法:将32只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴芪汤组和罗格列酮组,每组8只,采用高脂高糖高盐饮食喂养8周复制NAFLD模型,造模第一天开始用药,给予柴芪汤[5.67g/(kg·d)]及罗格列酮混悬液[3 mg/(kg·d)]灌胃干预,8周后检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及肝组织中TG含量;观察肝组织病理形态改变;Western Blot测定肝SREBP-1c蛋白表达;RT-PCR测定肝SREBP-1c m RNA表达。结果:模型组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平及肝组织中TG含量明显高于正常组(P<0.05),2用药组各项指标低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);但2组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2用药组SREBP-1c m RNA及蛋白表达水平较模型组降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但2用药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:柴芪汤能够改善NAFLD大鼠肝脏脂肪变,其干预效果与西药罗格列酮相似,抑制SREBP-1c m RNA和蛋白表达,从而降低NAFLD大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HLD-C、LDL-C,这可能是柴芪汤治疗NAFLD的机制之一。

姜黄素对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏SREBP-1c mRNA表达的影响

目的:研究姜黄素干预小鼠固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)在肝脏表达与非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的相关性。方法:应用RT-PCR方法对比正常组、NAFLD模型组、姜黄素治疗组中肝脏SREBP-1c的mRNA表达进行分析。结果:SREBP-1c mRNA在模型组表达增高,在姜黄素治疗组与正常组相比表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NAFLD模型组肝脏中SREBP-1c mRNA的表达明显增高而治疗组表达也增高;应用姜黄素对于NAFLD的治疗作用可能不是通过调节SREBP-1cmRNA的表达而实现的。

甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响

目的:探讨甲醛对HepG2细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量的影响及其可能机制。方法:以0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L的甲醛(formaldehyde,FA)分别处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活性,GPO-POD酶法测定细胞内TG含量。另分别以0.004、0.02、0.1 mmol/L的甲醛处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用Western blot法检测肉碱棕榈酰转移酶1(carnitine palmitoyl transferase 1,CPT1)、固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotern-1c,SREBP-1c)、腺苷酸核糖基化因子1(ADP-ribosylation factor 1,Arf1)和包被蛋白Ⅰ(coat protein comlexⅠ,COPⅠ)的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,0.5～12.5 mmol/L FA染毒24 h或0.1～12.5 mmol/L染毒48 h时可显著降低HepG2细胞活性(P均<0.05);0.1 mmol/L FA染毒24 h,或者0.1和0.02 mmol/L FA染毒48 h,均可致HepG2细胞内TG含量显著升高(P均<0.05);FA染毒48 h引起肝细胞内CPT1表达水平明显降低(P均<0.05),SREBP-1c和COPⅠ表达水平在染毒24和48 h后均增高(P均<0.05),FA染毒24 h后Arf1表达水平明显增加(P<0.05)。结论:FA接触可引起HepG2细胞内TG含量增加,其机制可能与脂肪酸β氧化受到抑制和脂肪合成增加有关。

清肝祛湿活血方对非酒精性脂肪肝大鼠Srebp-1c表达的影响

目的:探讨清肝祛湿活血方对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(Srebp-1c)表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,多烯磷脂酰胆碱组,清肝祛湿活血方低、中、高剂量组6组。常规饲养7天后,空白组给予普通饲料喂养;其余各组给予高脂饲料喂养+腹腔注射四环素制备非酒精性脂肪肝大鼠模型,共4周。造模成功后清肝祛湿活血方各剂量组用清肝祛湿活血方治疗,多烯磷脂酰胆碱组予易善复治疗,模型组和空白组给予等量蒸馏水。给药4周后观察大鼠血脂、肝组织病理学改变及Western Blot法测定肝脏Srebp-1c表达。结果:与模型组比较,清肝祛湿活血方低、中、高剂量组TG和TC明显降低(P<0.05);肝脂肪变性明显减轻;肝脏Srebp-1c表达均明显下降(P<0.01)。结论:清肝祛湿活血方能下调大鼠肝脏Srebp-1c表达,对非酒精性脂肪肝有较好的治疗作用。

高含量DHA/EPA甘油三酯鱼油改善脂肪肝大鼠脂质代谢作用的研究

目的探讨高含量DHA/EPA甘油三酯(TG)鱼油对脂肪肝模型大鼠脂质代谢的改善作用及机制。方法采用在饲料中添加1%乳清酸的方法建立脂肪肝大鼠模型。将大鼠分为乙酯鱼油对照组、低含量DHA/EPA-TG鱼油对照组和高含量DHA/EPA-TG鱼油低、中、高剂量组,每组10只。分别灌胃不同结构形式的鱼油20d后,检测大鼠血清脂质和肝脏脂质含量;采用RT-PCR法测定肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-α)等脂质代谢调控因子mRNA表达和脂肪酸合成酶(FAS)、苹果酸酶(ME)、葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)等脂肪合成相关酶以及肉碱棕榈酰转移酶(CPT-1)等脂肪分解相关酶mRNA表达量。结果高含量DHA/EPATG鱼油可显著降低血清和肝脏脂质水平(P<0.05,P<0.01),明显抑制SREBP-1c、FSA、ME、G6PDH等脂肪合成相关基因mRNA表达(P<0.01),有效上调PPAR-α、CPT-1(P<0.05,P<0.01)等脂肪分解相关基因mRNA表达,且作用效果为三种鱼油中最优。结论高含量DHA/EPA-TG鱼油可明显改善脂肪肝大鼠脂质代谢,其机制与下调脂肪酸合成相关基因表达,促进脂肪酸分解相关基因表达有关。

PM2.5对HepG2细胞脂质堆积影响及机制研究

目的探讨大气PM2.5对人肝肿瘤细胞株Hep G2细胞脂质堆积的影响及可能的作用机制。方法采集广州城区大气PM2.5,以6.25、12.5、25、50和100μg/ml PM2.5分别染毒Hep G2细胞,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8法)测定细胞存活率,确定PM2.5实验浓度。6.25、12.5、25μg/ml PM2.5染毒细胞36 h后,采用油红O染色观察肝细胞内脂滴变化,测定细胞内甘油三酯和总胆固醇含量,并采用实时荧光定量PCR法检测细胞肝X受体α(liver X receptor alpha,LXRα)和固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)的表达情况。结果油红O染色显示,染毒组Hep G2细胞内可见大量红色脂滴,并伴有脂滴融合现象。PM2.5染毒细胞36 h后,各染毒组Hep G2细胞总胆固醇含量高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);甘油三酯含量高于对照组,且随着PM2.5浓度的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。PM2.5染毒细胞24 h和36 h后,染毒组Hep G2细胞LXRα和SREBP-1c的m RNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 PM2.5可促进肝细胞脂质堆积,该过程可能与其上调LXRα和SREBP-1c的表达有关。

转化生长因子β1对脂变HepG2．2．15细胞HBV复制及抗原合成的影响

目的探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对脂变HepG2．2．15细胞HBV复制及蛋白表达的影响，以及Hep32／HepG2．2．15脂变过程中TGFβ1与细胞因子信号抑制物-3（SOCS-3）mRNA、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP—1c）mRNA的关系。方法细胞分为HepG2／HepG2．2．15细胞对照组（C1／C2组）和脂变组（F1／F2组），并在这两组细胞体系内加入5ng／m1TGFp1干预，形成TGFD1作用组（T1／T2）和脂变＋TGFβ1组（TF1／TF2），采用时间分辨荧光分析仪检测HBsAg、HBeAg，实时荧光定量PCR法检测HBVDNA、SOCS-3mRNA及SREBP-1cmRNA。数据采用单因素方差分析以及析因分析进行统计。结果TGFβ1能显著降低C2组中HBeAg水平（P=0．034），及显著降低F2组中HBsAg（P〈0．001）以及HBeAg（P=0．004）水平。脂变与TGFβ1对下调HBsAg有交互作用。此外，TGFβ1能显著降低C1、F1、C2及F2组中SOCS-3mRNA表达（P〈0．05），同时显著升高C1、F1、C2及F2组中SREBP-1cmRNA的表达（P〈0．05），脂变与TGFβ1对抑制SOCS-3mRNA以及促进SREBP-1cmRNA的表达有交互作用。结论TGFβ1不影响HepG2．2．15细胞中HBV复制，可抑制HBsAg和HBeAg的表达；TGFβ1可抑制SOCS-3mRNA的表达，及促进SREBP—1ctuRNA的表达。

SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用

目的探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c(SREBP-1c)cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的表达水平。结果在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加(P均<0.01)。结论已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。

柴苓调肝颗粒对非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗机制的探讨

[目的]探讨柴苓调肝颗粒治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。[方法]将造模成功的63只雄性Wistar大鼠随机分成7组,每组9只,分别为模型组,饮食控制组,甘乐对照组,三七脂肝丸对照组,柴苓调肝颗粒高、中、低剂量组,未造模的9只大鼠为正常对照组;检测各组的血糖、血胰岛素、肝脏SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA表达。[结果]与正常对照组相比,模型组血糖、血胰岛素、肝组织SOCS-3mRNA、SREBP-1cmRNA表达显著上调;柴苓调肝颗粒高、中、低剂量组SOCS-3mRNA、SREBP-1cmRNA表达较模型组下调,且血糖、血胰岛素水平下降;用药各组间比较,差异无统计学意义。SOCS-3mRNA表达水平与胰岛素抵抗指数、SREBP-1cmRNA表达水平呈显著正相关。[结论]SOCS-3可能通过胰岛素抵抗及上调肝组织SREBP-1cmRNA表达参与NAFLD发病,柴苓调肝颗粒能抑制肝脏SOCS-3mRNA及的SREBP-1cmRNA表达,对NAFLD有一定治疗作用。

四联活菌制剂Bornlisy对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究

本研究采用不同浓度乙醇灌胃的方法建立急、慢性酒精性肝损伤模型,观察四联活菌试剂Bornlisy(BO)及其上清对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。结果表明,BO可显著提高急性酒精性肝损伤小鼠的生存率(p<0.05),BO上清则无上述效果;在慢性酒精性肝损伤模型中,BO可有效降低慢性酒精性肝损伤引起的肝脏指数升高(p<0.05),改善肝组织脂肪性病变和脂滴蓄存,血清中ALT和TG水平显著降低(p<0.05),肝脏SOD活力显著上升了43.30%(p<0.05),GSH-Px活力明显上升了281.44%(p<0.01),BO上清则无明确疗效;进一步分析脂肪酸代谢信号通路,发现BO可显著抑制过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶(ACOX1)和肝脏脂肪酸结合蛋白(L-FABP)m RNA水平的降低(p<0.05),而BO上清对于PPARα、ACOX1的m RNA水平无显著影响(p>0.05)。对固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)通路检测,结果显示BO和BO上清均对SREBP-1c和脂肪酸合成酶(FAS)m RNA表达水平无显著性影响。因此,BO对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用,这可能是通过抗氧化应激、选择性增强PPARα通路来实现。

胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞脂合成作用的影响

为确定胰岛素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GLN)对奶牛肝细胞脂合成作用的影响,本试验体外培养犊牛原代肝细胞,分别用不同浓度的INS和GLN处理肝细胞:对照组(0nmol/L)、浓度梯度组(1,10,100,1 000nmol/L)。培养1h后分别用免疫印迹(Western blot,WB)方法、荧光定量PCR(qRT-PCR)方法以及细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)方法检测INS和GLN处理体外培养肝细胞对关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达水平,SREBP-1c核质分布以及下游靶基因脂代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平的影响。结果显示:INS处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著升高,入核量显著增加,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著升高。而与之相反,GLN处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著降低,入核量显著减少,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著降低。以上结果说明,INS可通过增强SREBP-1c的活性从而促进肝细胞脂合成,增加肝脂沉积;而GLN则通过抑制SREBP-1c的活性从而降低肝细胞脂合成。

H-ras12V促进肝肿瘤细胞脂肪变性机制探讨

目的探讨固醇调节元件结合蛋白1c(transcription factor sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)在Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤细胞脂肪变性中的作用机制。方法采集9个月龄C57BL/6J小鼠(12只)正常肝组织(Wt)和H-ras12V转基因小鼠(12只)的肝肿瘤组织(T)及其周围组织(P),并用病理学方法进行确诊检测。酶偶联比色法检测组织样本中的甘油三酯含量,蛋白质印迹法检测磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylation ofphosphatidylinositol-3kinase,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylation of protein kinase B,p-AKT)及SREBP-1c的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c靶基因乙酰辅酶A羧化酶a(acetyl-CoA carboxylase a,ACACa)、乙酰辅酶A羧化酶b(acetyl-CoA carboxylase b,ACACb)、硬脂酰辅酶A脱氢酶(stearoyl-CoA desaturase1,SCD1)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASn)基因的mRNA表达水平。结果正常肝组织和周围组织未发生组织病理学变化,肝肿瘤组织与周围组织边界清楚,肝肿瘤组织中的肿瘤细胞分化良好并伴有大泡性脂肪变性。与病理结果相一致,与正常肝组织(1±0.29)及转基因小鼠肝肿瘤周围组织(0.78±0.18)相比较,转基因小鼠肝肿瘤组织中的甘油三酯含量(2.14±0.15)显著增高,P值均<0.001,差异有统计学意义。转基因小鼠肿瘤周围组织与正常肝组织中的甘油三酯含量差异无统计学意义,P=0.092。蛋白质印迹法检测结果表明,与正常肝组织相比,p-PI3K在P和T中呈逐步升高趋势,且差异有统计学意义,P<0.05;与正常肝组织相比,p-AKT和AKT在周围组织和肝肿瘤组织中呈升高趋势,但仅肝肿瘤组织中的p-AKT差异有统计学意义,P=0.028;与正常肝组织及周围组织相比,肝肿瘤组织中的SREBP-1c前体蛋白及成熟体蛋白的表达水平均显著升高,P值均<0.001。实时荧光定量PCR检测结果显示,ACACb和SCD1在正常肝组织、周围组织及肝肿瘤组织中的表达呈逐步升高趋势,差异有统计学意义,P<0.05;与正常肝组织及周围组织相比,肝肿瘤组织中ACACa和FASn的mRNA表达水平显著升高,P<0.01,但它们在正常肝组织与周围组织中的表达差异无统计学意义。结论肝肿瘤Ras癌基因可能通过活化PI3K/AKT信号通路激活转录因子SREBP-1c,进而促进与脂质合成代谢相关靶基因的表达,增加肝肿瘤细胞的脂质沉积,诱导脂肪变性。