斑点叉尾源海豚链球菌Srr蛋白海藻酸钠-壳聚糖口服疫苗的制备及其免疫效果研究

制备海藻酸钠-壳聚糖-海豚链球菌Srr蛋白微球疫苗,并检测其对斑点叉尾的免疫效果。采用乳化法利用海藻酸钠-壳聚糖包被Srr蛋白,测定其包封率、载药率及包被蛋白的抗原性;通过拌饲投喂免疫斑点叉尾,分为Srr组、Srr微球组、空微球组以及对照组,间接ELISA法检测免疫后斑点叉尾的血清抗体水平,试剂盒检测多项血清非特异性指标;于免疫后第4周利用海豚链球菌攻毒,计算各组相对保护率,并通过实时荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果显示,通过乳化法制得形态为圆形或椭圆形、大小较为均一的微球疫苗,粒径为(4.26±1.13)μm,包封率为92.38%,载药率为19.41%,Western-blot分析表明Srr蛋白微球具有较好的抗原性;Srr微球组的抗体效价峰值出现在第4周,明显高于其他组,血清总蛋白、T-SOD以及溶菌酶活力均显著或极显著高于其他实验组,并获得60%的相对保护率。荧光定量分析结果显示,Srr微球组攻毒后24h和48h各免疫基因表达量均有所上调。Srr蛋白微球疫苗能够提高斑点叉尾抵抗海豚链球菌的能力,对海豚链球菌起到了一定的预防作用。