微小RNA-452-5p及SRY盒相关基因7在食管癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系研究

目的 探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7(SOX7)在食管癌组织中的表达水平以及临床病理参数和预后的关系。方法 选取2017年6月至2019年5月期间我院收治的106例食管癌患者作为研究对象。检测食管癌患者miR-452-5p、SOX7 mRNA的表达,分析癌组织中miR-452-5p、SOX7 mRNA表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并采用COX单因素和多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果 相比于癌旁组织,癌组织中的miR-452-5p表达水平更高(P<0.05),SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。相比于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度(Tis~T2)食管癌患者,miR-452-5p在有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ期、浸润深度(T3~T4)癌组织中有更高的表达水平,SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,患者3年总生存率miR-452-5p高表达组为30.4%(17/56),miR-452-5p低表达组为54.0%(27/50),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.082,P=0.014);SOX7 mRNA高表达组和SOX7 mRNA低表达组患者患者3年总生存率分别为53.7%(29/54)、28.8%(15/52),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=6.742,P=0.009)。COX单因素回归分析结果显示,miR-452-5p、SOX7 mRNA、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移与食管癌预后有关。COX多因素回归分析结果显示,影响食管癌预后的独立因素有淋巴结转移、SOX7 mRNA低表达、肿瘤分期Ⅲ期、miR-452-5p高表达、浸润深度(T3~T4)。结论 miR-452-5p在食管癌组织中呈高表达、SOX7 mRNA在食管癌组织中呈低表达,其水平与淋巴结转移、肿瘤分期、浸润深度有关,且密切关联食管癌患者预后。

中国荷斯坦牛SRY基因编码区的克隆与原核表达

利用PCR技术从雄性中国荷斯坦牛的基因组DNA中克隆了Y染色体性别决定基因(Sex-deter-m in ing R eg ion on the Y Chrom osom e,SRY)的编码区全长序列,构建了表达载体pET-28a/SRY,并将其在大肠杆菌(E.coli)中进行了诱导表达,对表达产物进行了检测。结果表明,SRY基因编码区长687 bp,编码229个氨基酸;表达载体pET-28a/SRY构建成功;表达产物中含有相对分子质量为33 ku的SRY蛋白。

黄鳝性别决定与SRY基因不相关

以人和鼠的SRY片断为探针与黄鳝基因组DNA进行杂交,发现雌雄黄鳝中均有相同的杂交带.用一对SRY基因保守区HMG box的引物,在雌雄黄鳝的基因组DNA中均扩增出约200 bp片段.将此片断克隆测序后发现雌雄个体中此片断仅相差1个bp,且与人的SRY基因HMG盒基因极相似.以该片段与雌雄个体的RNA进行Northern杂交未能检测到杂交带,RT-PCR反应扩增出一条微弱的200 bp片段.以上结果表明:在雌雄黄鳝的基因组DNA中均存在SRY同源片断;黄鳝中的SRY同源片断可能与其性别无直接关系,而是具备其他功能,由此推测低等脊椎动物的性别决定可能由其他基因控制.

林麝及马麝SRY基因片段克隆及其在系统进化分析中的应用

根据已报道的偶蹄目动物并参照人和狗SRY基因碱基序列设计一对简并引物 ,以林麝 (Moschusberezovskii)及马麝 (M chrysogaster)基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增出SRY基因CDS区。克隆的林麝及马麝SRY基因片段经测序 ,其长度为 6 84bp。从父亲遗传角度出发 ,利用GenBank中收录的 18种偶蹄目SRY基因 ,用邻位相接法 (NJ)和最大简约法 (MP)分别构建了鹿科、牛科和麝科的系统进化树。聚类树显示麝形成一个单系 ,支持麝作为独立一科的观点。

赤麂SRY基因的测序及其与部分偶蹄目动物SRY基因序列的比较

采用人SRY基因的一段保守序列的引物 ,通过PCR在雄性赤麂中扩增出了赤麂SRY基因的特异片段 ,通过DNA斑点杂交证实其扩增产物与人SRY基因有着较高的同源性。将PCR产物克隆到载体 pGEM TVec tor中 ,转化DH5α菌 ,经与人SRY基因探针进行菌落杂交筛选出赤麂SRY基因的阳性克隆 ,并对其进行了测序 .将其序列与基因库中录入的所有偶蹄目动物的SRY基因序列进行同源性比较 ,用UPGMA法构建了其系统进化树 ,从分类和进化上对赤麂SRY基因进行分析。

黑麂Y染色体的鉴别和Sry基因的克隆及定位

以流式细胞仪分离小麂(Muntiacus reevesi)Y染色体和黑麂(Muntiacus crinifrons)Y1,Y2,X+4和1号染色体,利用DOP-PCR技术富集了分离的各单条染色体。然后,将小麂的Y染色体的DOP-PCR产物经Cy3标记后直接作为涂染探针, 应用染色体涂染技术与雌雄黑麂的核型标本进行杂交,确认了黑麂真正的Y染色体为Y2染色体。再以黑麂的Y1,Y2,X+4和1号染色体的DOP-PCR产物为模板,用人的特异性的 SRY（sex determining region of the Y chromosome ） 基因引物对其进行扩增,结果表明黑麂只有Y2染色体出现了SRY扩增片段。然后扩增产物克隆和测序,比较它与人的同源性,初步把黑麂的Sry基因定位在Y2染色体上。最后提取雄性黑麂的基因组DNA,并用同一对引物对其进行扩增,亦得到Sry基因的片段,对此扩增片段进行克隆,测序,结果表明其与Y2染色体得到的Sry基因片段完全一样，与人SRY基因的同源性均为83%。

浣熊SRY-HMG box的克隆和序列分析

We amplified the 197 bp HMG box sequence by using Polymerase Chain Reaction (PCR) with primers according to the known SRY sequence from male raccoon genomic DNA, and then cloned and sequenced. The nucleic acid and amino acid sequence comparison between raccoon and other mammals revealed high conservation of the SRY HMG box in mammals (about 80%), which implied that the DNA binding activity was crucial to mediate the action of SRY in sex determination. The variation of raccoon HMG box sequence mainly occurred on purine by replacement and missense mutation, which implicated that only the HMG box protein with advanced structure had efficient activity. The homology and difference between mammals HMG box was accorded to the evolution systematic tree.

小麂Sry基因的克隆和测序

应用人的性别决定基因SRY(Sex determiningRegionYgene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补法克隆到质粒pGEM-T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果表明小麂Sry基因保守序列与人的SRY基因保守区相同碱基的比值为152/184,达到82.6%。提示小麂Sry基因与人的SRY基因存在着较高的同源性,说明SRY基因在进化过程中高度保守。

雄牛特异的SRY同源序列的扩增和分析

利用人、兔、鼠SRY序列设计引物,应用PCR扩增牛的SRY序列,获得200bp的雄牛特异的扩增片段。克隆该扩增片段,获得重组质粒pCH21,进行序列分析,并与人、兔和鼠SRY的对应区域比较,具有高度同源性。用pCH21 DNA作探针与牛的基因组DNA酶切图谱杂交,显示了雄牛特异的1.7kb的杂交带。分析200bp的PCR扩增片段是牛的SRY基因片段。用同一对引物扩增人和山羊的DNA样品,也获得雄性特异的200bp的扩增片段。

4例SRY阳性的46,XX男性综合征患者临床及细胞分子遗传学研究

目的:探讨SRY阳性的46,XX男性综合征患者的临床及细胞分子遗传学特征。方法:分析4例SRY阳性的46,XX男性综合征患者的临床特点,并进行染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)、SRY基因检测、Y染色体微缺失等细胞和分子遗传学检测。结果:4例患者社会性别均为男性,身材低于正常男性均值。均因不育就诊,双侧睾丸体积小、质地软,精液检查均为无精子症。阴茎发育正常。性激素检查示高促性腺激素性性腺功能不全。染色体核型均为46,XX,Y染色体微缺失检测示AZFa,b,c区域均缺失。SRY基因均存在,FISH结果3例患者显示SRY基因易位于X染色体短臂。结论:SRY阳性的46,XX男性综合征患者常为男性表型,但睾丸发育不良,多伴有身材矮小和不育。患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子表型是由于缺失AZF。Y染色体长臂上可能存在与身高相关的基因。深入进行细胞、分子遗传学研究有助于揭示46,XX男性综合征基因型-表型的关系。

PCR扩增Sry基因进行鲸类动物性别的鉴定

哺乳动物Y染色体短臂上的Sry基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry基因保守区序列设计引物 ,以非性别特异性的线粒体DNA细胞色素b基因作为阳性对照 ,用PCR扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry基因片断并对其进行凝胶电泳分析来鉴定鲸类动物的性别。通过此方法对 87个已知性别鲸类动物标本的检验 ,结果完全正确 ,并进一步应用此方法成功地完成了另外 33个未知性别鲸类标本的性别鉴定。由此建立了一套简单、快速。

染色体显微切割与DOP-PCR结合对赤麂Sry基因克隆、测序及初步定位

应用显微切割技术获得赤麂１号、Ｙ１、Ｙ２染色体，通过ＤＯＰ－ＰＣＲ增加模板ＤＮＡ拷贝数，然后用人的性别决定基因（Ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｙ， ＳＲＹ）中ＨＭＧ框内设计１对引物，对ＤＯＰ－ＰＣＲ产物进行扩增。在雄性赤麂Ｙ２染色体ＤＯＰ－ＰＣＲ产物中扩增出与人ＳＲＹ基因同源的Ｓｒｙ基因片段，克隆、测序，首次在分子水平上证明赤麂Ｙ２染色体是真正的Ｙ染色体，同时对赤麂Ｓｒｙ基因进行了初步定位。

二价染色体上黄鳝SRY盒基因的高分辨区域定位

黄鳝是合鳃目、合鳃科、黄鳝亚科的唯一代表种，主要分布于东印度、东南亚、日本和中国，具有较重要的经济价值。因其是雌雄同体，具有先雌后雄的天然性逆转生理规律，对于其染色体组中是否存在异形性染色体，历来就有截然相反的２种观点，所以，黄鳝的性别决定机制一直是...

SRY基因及其性别决定

对近十年来关于脊椎动物尤其是哺乳动物的SRY基因及其性别决定机制的研究进展作了简要的综述。扼要阐述了哺乳动物的SRY基因的结构、转录、表达及其在性别决定中的作用模式及相关的基因家族。

性发育异常患者的染色体核型、SRY基因及其序列分析

目的观察性发育异常患者的染色体核型、性别决定基因(SRY基因)表达及其序列变化。方法采用G显带方法分析29例性发育异常患者的性染色体核型,用PCR技术扩增其SRY基因,并对其中6例两性畸形患者扩增的SRY基因进行测序。结果 6例两性畸形患者中2例染色体核型为45,X/46,XY,3例为46,XY,其SRY基因阳性,直接测序未发现SRY基因突变;1例核型为46,XX,SRY基因阴性。16例Klinefelter综合征患者染色体核型为47,XXY,1例Klinefelter综合征患者染色体核型为46,XY/47,XXY,其SRY基因均阳性;6例Kallman综合征患者染色体核型为46,XY,其SRY基因均阳性。结论大部分性发育异常患者的染色体核型异常;SRY基因阳性两性畸形患者的SRY基因序列未见异常。

性反转综合征的SRY基因分析

目的:探讨性反转综合征(sex reversal syndrome,SRS)的发病原因。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)及PCR产物直接测序方法对22例性发育异常患者的人类性别决定区域(sex-determining region of Y chromosome,SRY)基因进行特异性扩增和序列检测分析。结果:在22例患者中有7例患者SRY基因检测结果与染色体性别不一致,其中3例为46,XX女性性反转患者的SRY基因为阳性(其中1例46,XX,Gp+),3例为46,XY男性性反转患者的SRY缺失,1例为45,X女性患者的SRY基因阳性;其他15例患者SRY基因与染色体性别一致,但都伴有不同程度的性发育异常,即存在Y染色体患者,SRY为阳性;无Y染色体的患者,SRY为阴性。通过对12例SRY阳性患者进行测序分析,均未发现碱基突变。结论:SRY基因的缺失或易位是导致SRS的最主要原因,同时也表明人类的性别决定和分化还有其他相关基因参与。

牦牛SRY基因克隆与分子特征

SRY(Sex-determining region on the Y chromosome,SRY)基因位于哺乳动物的Y染色体,对性别形成起着决定性作用。对高原牦牛SRY基因的编码区进行克隆和分子特征分析,以期从分子水平了解牦牛的性别形成机制。以雄性高原牦牛血液为材料,从基因组DNA中扩增SRY基因编码区(单外显子)序列,将其克隆至pGEM-T easy载体并测序。同时,将牦牛SRY基因编码区与奶牛进行序列比对;对牦牛SRY蛋白与其他物种SRY蛋白进行序列比对;采用在线生物软件对牦牛SRY蛋白的特性和结构进行预测。牦牛SRY基因(GenBank:EU547257)编码区长687 bp,编码229个氨基酸。克隆获得的牦牛SRY基因编码区与奶牛该序列存在2个碱基的变异,造成1个氨基酸的变异;各物种SRY蛋白具有较高的同源性;牦牛SRY蛋白(GenBank:ACB 29799)主要由亲水性氨基酸构成,同源建模预测的SRY HMG区域的3D模型显示,SRY HMG区域三维结构呈由三个α-螺旋组成的"L"型。首次从高原牦牛基因组中克隆了SRY基因,并进一步揭示了其分子特征,为从分子水平人为的控制牦牛性别奠定了重要基础。

一例罕见SRY阴性46，XX，inv(9)男性

目的:探讨46,XX男性性反转综合征的临床表现和遗传学基础。方法:对1例46,XX,inv(9)(p11q13)男性不育患者进行系统检查,包括精液分析、血清激素和性腺组织活检,PCR法分析SRY基因和Y染色体上包括AZF区域的23个特异性位点,用FISH技术进一步证实患者核型及SRY的缺失,同时检测与性腺分化相关的SOX9和DMRT1基因内部的STR位点,以观察有无基因剂量的改变。结果:外周血淋巴细胞染色体核型分析为46,XX,inv(9)(p11q13)。Y染色体上SRY和其它23个特异位点均为阴性。未发现SOX9和DMRT1基因剂量改变。性腺组织活检证实为发育不良的睾丸组织。由于睾丸组织DNA模板提取失败,故未能检测睾丸组织的特异性位点。结论:本病例的性反转不是由SRY基因转移引起的。性别决定和分化的机制目前还不完全清楚,除了SRY等已知的基因外,可能还存在其它未知但重要的性别决定基因。

阿勒泰羊、藏绵羊(贾洛类群、欧拉类群)Sry基因序列分析及亲缘关系研究

利用山羊Sry基因设计引物,PCR扩增获得阿勒泰羊、藏系欧拉羊、藏系贾洛羊包含Sry基因整个编码区的雄性特异性片段.经测序及人工校对、剪切获得Sry基因编码区序列.分析结果表明三个类群羊Sry基因序列完全相同,且与其他品种羊具有高度的同源性:阿勒泰羊、藏系贾洛羊、藏系欧拉羊与普通绵羊、盘羊及摩弗伦羊具有相同的Sry基因序列,亲缘关系最近,其次是赤羊,最远是大角羊.这说明,这三个类群羊可能是由中国盘羊经当地居民长期人工选育而成的地方性品种(系).

SRY盒基因在斑马鱼和胡子鲇中的保守性分析

本文采用人类ＳＲＹ基因探针，与ＥｃｏＲＩ消化的中国的胡子鲇（Ｃｌａｒｉａｓｆｕｓｃｕｓ）和美国的斑马鱼（Ｂｒａｃｈｙｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ）基因组ＤＮＡ进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析。首次在这两种鱼中发现了ＳＲＹ盒基因及其存在的特征；在斑马鱼中发现了明显的限制性片段长度多态性；并深入分析了ＳＲＹ盒基因的进化保守性。