肝癌患者外周血T细胞STAP1基因甲基化水平的变化及其临床意义

目的探讨乙肝相关性肝癌患者外周血T淋巴细胞STAP1基因的甲基化水平变化及其对肝癌早期诊断的临床价值。方法分离40例乙肝相关性肝癌患者、20例慢性乙型肝炎患者和20例健康人外周血T淋巴细胞,提取DNA,重亚硫酸盐处理,然后采用焦磷酸测序法检测STAP1基因的甲基化水平。结果肝癌患者外周血T细胞STAP1的甲基化率的中位水平为47.3%,明显高于慢性乙型肝炎患者(37.4%)和健康对照(40.9%),差异有显著性(P=0.005,P<0.001)。慢性乙型肝炎患者和健康对照外周血T细胞的STAP1甲基化率差异无显著性(P=0.927)。T细胞STAP1基因甲基化水平诊断肝癌的灵敏度为91.3%,特异度为8.04%,其灵敏度明显高于甲胎蛋白诊断肝癌的灵敏度(36.1%,P<0.001)。STAP1受试者工作特征(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.847,表明其诊断肝癌的准确性较高(P<0.001)。结论肝癌患者外周血T细胞的STAP1基因甲基化率明显高于慢性乙型肝炎患者和健康对照,提示STAP1与肝癌的发生发展相关;检测T细胞STAP1甲基化水平有助于肝癌的早期诊断。

马铃薯StAP1基因的分子克隆与表达分析

采用RT-PCR方法从马铃薯品种‘Désirée’中克隆了StAP1cDNA序列(GenBank登录号GU220568)。该基因cDNA开放阅读框长度为735bp,编码一个由244个氨基酸残基组成的蛋白,该蛋白分子量为28.57kDa,理论等电点为8.32。StAP1蛋白含有1个高度保守的MADS结构域,与烟草NAP1具有较高一致性。组织表达分析显示,StAP1在马铃薯植株的顶芽、花和叶中有较高水平的转录表达,在块茎中有微量表达。利用反义StCOL转基因马铃薯植株进一步分析表明,StAP1的表达受StCOL的调控。