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Cloning and characterization of a stearoyl-ACP desaturase gene from Jatropha curcas 被引量:4
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作者 罗通 马丹炜 +4 位作者 徐莺 邓骛远 肖猛 卿人韦 陈放 《Journal of Shanghai University(English Edition)》 CAS 2007年第2期182-188,共7页
Using degenerate primers and RT-PCR, RACE techniques, a 1491 bp cDNA segment of stearoyl-acyl carrier protein desaturase (SAD) is cloned from developing seeds of Jatropha curcas L. The segment contains a 1191 bp of ... Using degenerate primers and RT-PCR, RACE techniques, a 1491 bp cDNA segment of stearoyl-acyl carrier protein desaturase (SAD) is cloned from developing seeds of Jatropha curcas L. The segment contains a 1191 bp of complete open reading frame (ORF). Analysis in the BLAST on NCBI shows that Jatropha curcas SAD (JSAD) gene encodes a protein precursor composed of a signal peptide of 33 amino acids and a mature peptide of 363 amino acids. The homological analysis shows that JSAD has high level of homology both in nucleotide sequence and in amino acid sequence to other plants SADs. The nucleotide and peptide identity of JSAD to Ricinus communis SAD (RSAD) is up to 89% and 96.2% respectively. Molecular modeling of JSAD indicates that its three-dimensional structure strongly resembled the crystal structure of RSAD. 展开更多
关键词 Jatropha curcas stearoyl-acyl carrier protein desaturase fatty acid gene cloning bioinformatics analysis
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澳洲坚果光壳种MiSAD的克隆与表达
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作者 杨倩 杨子平 +5 位作者 邹明宏 宋喜梅 万继锋 陈菁 罗炼芳 曾辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期254-263,共10页
澳洲坚果果仁中含有丰富的不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid,UFA),其不饱和脂肪酸生物合成的分子机制还有待进一步解析。植物硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SAD)是脂肪酸生物合成途径中形成不饱和脂肪酸的关键酶。本研究以澳洲坚果(M... 澳洲坚果果仁中含有丰富的不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid,UFA),其不饱和脂肪酸生物合成的分子机制还有待进一步解析。植物硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SAD)是脂肪酸生物合成途径中形成不饱和脂肪酸的关键酶。本研究以澳洲坚果(Macadamia integrifolia)光壳种为对象,通过PCR技术克隆获得澳洲坚果硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因(MiSAD),并对结构功能和表达模式进行了初步分析。结果显示,克隆获得5923 bp的MiSAD基因组DNA序列,该基因由3个外显子2个内含子组成,包含1191 bp的编码框,与公布的粗壳种MtSAD序列高度一致;编码396个氨基酸;MiSAD分子量为45.22 kDa,等电点为5.93,属于酰基-ACP脱饱和酶,是位于叶绿体或质体基质中的水溶性酶;高度保守的区域存在形成酶活位点的2个E-X-X-H二铁原子中心基序,N端和C端氨基酸序列差异较大;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主;三级结构预测中存在形成脂酰链结合部位的螺旋-转角-螺旋(HTH);与蒂罗花的同源性最高达94.2%,与其他物种的SAD同源性也都在80%以上;分子进化树显示与荷花进化关系较近,属于植物脂酰-ACP脱饱和酶。荧光定量PCR数据显示MiSAD在根、茎、叶、花、果中均有表达,其中叶片和果实中表达量较高,果实中的MiSAD表达量在开花后第100天左右达到最高,之后随着果实的成熟逐渐下降,呈现正态分布趋势。该研究为深入研究MiSAD在澳洲坚果果仁中不饱和脂肪酸生物合成的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 澳洲坚果 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶 基因克隆 表达分析
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黄连木PcSAD基因的克隆及分析 被引量:7
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作者 章文乐 蒲婧懿 +8 位作者 朱梦媛 钮俊 冯清茗 胡惠雯 侯琦 郭静 袁一鸣 张志翔 林善枝 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期503-509,共7页
中国黄连木(Pistacia chinensis Bunge)是种重要的优良木本油料树种,分布广,而且种子具有含油量高、出油率高、油品质好等优点,是生产生物柴油的理想原料。硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(stearoyl-ACP desat-urase,SAD)在植物中催化不饱... 中国黄连木(Pistacia chinensis Bunge)是种重要的优良木本油料树种,分布广,而且种子具有含油量高、出油率高、油品质好等优点,是生产生物柴油的理想原料。硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(stearoyl-ACP desat-urase,SAD)在植物中催化不饱和脂肪酸生物合成的第一步脱饱和反应,对植物细胞膜和种子油脂中脂肪酸成分的调控起着重要作用。本研究采用RACE及RT-PCR方法,首次从黄连木种子中克隆获得长度为1791bp的SAD基因(命名为PcSAD),该基因含有1299bp完整的开放阅读框、编码432个氨基酸。生物信息学分析发现,黄连木PcSAD基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与已报道的其它相近物种具有较高同源性,而且PcSAD含有典型的酰基载体蛋白脱饱和酶2和类铁蛋白家族的保守结构域;另外,开展了PcSAD的原核表达载体构建及诱导表达体研究。上述研究结果可为黄连木PcSAD基因的功能鉴及应用定奠定重要基础。 展开更多
关键词 黄连木 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶 基因克隆 原核表达 生物信息学分析
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乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因的克隆及表达 被引量:2
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作者 牛蓓 徐莺 +6 位作者 宋君 郭晓恒 符佳 邹亮 陈放 高孝锦 郭静 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第8期1806-1812,共7页
硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶是植物脂肪酸合成代谢的关键酶,直接调节膜脂和贮脂中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比例。本研究通过RT-PCR及RACE技术,克隆乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SsSAD)的cDNA全长序列。结果显示,该序列包含1个11... 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶是植物脂肪酸合成代谢的关键酶,直接调节膜脂和贮脂中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比例。本研究通过RT-PCR及RACE技术,克隆乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SsSAD)的cDNA全长序列。结果显示,该序列包含1个1191 bp的完整的开放阅读框(GenBank登录号为EF079655),编码396个氨基酸,含33个氨基酸的叶绿体转移肽。其成熟肽含有363个氨基酸,推测其分子量为41.5 kDa,等电点为5.42。同源性分析及同源建模数据显示SsSAD和其它物种的SAD有较高的同源性,含有1个保守结构域。构建原核表达载体pMAL-SsSAD,转入大肠杆菌DH5α,并对诱导表达条件进行优化。 展开更多
关键词 乌桕 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶 克隆 生物信息学分析 原核表达
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油茶SAD基因原核表达载体构建 被引量:3
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作者 彭邵锋 陈永忠 +1 位作者 陈隆升 陆佳 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第24期133-136,共4页
为研究油茶种子SAD基因的预期功能,以报道的油茶SAD的CDS为模板设计引物,RT-PCR及TA克隆获得含有酶切位点的CDS片段。经过PCR及测序验证序列的正确性后,将PCR扩增产物双酶切后与同样经双酶切的原核表达载体pET30a连接,转化BL21(DE3)菌... 为研究油茶种子SAD基因的预期功能,以报道的油茶SAD的CDS为模板设计引物,RT-PCR及TA克隆获得含有酶切位点的CDS片段。经过PCR及测序验证序列的正确性后,将PCR扩增产物双酶切后与同样经双酶切的原核表达载体pET30a连接,转化BL21(DE3)菌株。菌液PCR所得条带与预期一致,对于重组质粒的双酶切后2类产物电泳的条带分布符合经验分布规律。多种鉴定结果表明已成功构建适宜于原核表达用的重组载体。 展开更多
关键词 油茶 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶 原核表达载体构建
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