健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α-固醇调节元件结合蛋白-1-脂肪酸合成酶信号转导通路的影响

目的探讨健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝X受体(liver X receptorα,LXRα)-固醇调节元件结合蛋白-1(sterolregulatory element-binding protein-1,SREBP-1)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)信号转导通路的影响。方法将32只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)SD雄性大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组,每组8只。正常组进食普通饲料,其他组进食高脂饲料,健脾疏肝丸组给予4.86 g/(kg·d)灌胃,易善复组给予0.123 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。灌胃与造模同时进行,共8周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。对大鼠肝组织切片进行HE染色和油红O染色,于光学显微镜下观察。采用免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠LXRα、SREBP-1及FAS的表达水平。结果 (1)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠ALT[(3.40±0.81)U/L vs(9.98±2.27)U/L vs(7.80±1.52)U/L vs(6.43±1.89)U/L]、AST [(10.61±1.17)U/L vs(23.63±4.82)U/L vs(18.04±2.98)U/L vs(16.42±3.30)U/L]、TNF-α[(2.40±0.96)×10-3μg/L vs(6.64±0.92)×10-3μg/L vs(4.87±1.35)×10-3μg/L vs(4.45±1.39)×10-3μg/L]、IL-6 [(0.95±0.81)pg/ml vs(7.88±3.08)pg/ml vs(3.17±1.26)pg/ml vs(1.64±0.55)pg/ml]、TG [(0.33±0.13)mmol/L vs(0.90±0.24)mmol/L vs(0.62±0.37)mmol/L vs 0.62(0.46,0.66)mmol/L]、TC [(2.10±0.42)mmol/L vs 5.34(5.17,6.12)mmol/Lvs(3.68±0.63)mmol/Lvs(3.41±0.81)mmol/L]、HDL-C [(1.07±0.17)mmol/Lvs(0.62±0.14)mmol/Lvs(0.78±0.13)mmol/Lvs(0.79±0.12)mmol/L]及LDL-C[0.38(0.26,0.41)mmol/L vs(0.69±0.11)mmol/L vs(0.41±0.13)mmol/L vs(0.43±0.10)mmol/L]水平差异均有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6及TNF-α显著升高,HDL-C显著降低(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组和易善复组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6、TNF-α显著降低,HDL-C显著升高(P<0.05);与健脾疏肝丸组相比,易善复组大鼠血清TC显著降低(P <0.05),其他各指标差异无统计学意义(P> 0.05)。(2)肝组织HE染色和油红O染色示:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变严重;与模型组相比,健脾疏肝丸组大鼠肝脏脂肪变减轻。(3)免疫组织化学结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα(345872±52737 vs 544998±55506 vs 436319±65076 vs 448588±104641)、SREBP-1(259408±71143 vs 538701±62336vs 399705±102395 vs 394167±158047)和FAS(201683±48205 vs 466884±74934 vs 425589±63672 vs417852±84373)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组各蛋白相对表达水平均显著升高(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平显著下降(P <0.05);健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(4)Western blot结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα[0.80±0.29 vs 1.57(1.30,1.67) vs 1.09±0.30 vs 1.10±0.36]、SREBP-1(0.42±0.12 vs 1.15±0.45 vs 0.86±0.20 vs 0.84±0.20)和FAS(0.43±0.12 vs 1.10±0.40 vs 0.81±0.26 vs 0.80±0.28)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组对比,模型组小鼠各蛋白相对表达水平显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组小鼠LXRα蛋白相对表达水平显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(5)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠肝组织LXRα[1.13±0.38 vs 4.14(4.01,4.35) vs 2.65±1.85 vs 1.35(0.54,4.23)]、SREBP-1、FAS[1.37±0.49 vs 4.35±1.97 vs 1.98(1.88,3.22)m RNA相对表达量差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组LXRα[1.46±0.51 vs 6.13±1.17 vs 3.82±2.06 vs 1.56(1.19,4.74)]、SREBP-1、FAS vs1.83(1.64,4.29)] m RNA相对表达量显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达均显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论健脾疏肝丸对大鼠NAFLD的改善作用可能与其抑制LXRα-SREBP-1-FAS信号转导通路有关。

Alcohol-induced steatosis in liver cells

Alcohol-induced fatty liver (steatosis) was believed to result from excessive generation of reducing equivalents from ethanol metabolism, thereby enhancing fat accumulation. Recent findings have revealed a more complex picture in which ethanol oxidation is still required, but specific transcription as well as humoral factors also have important roles. Transcription factors involved include the sterol regulatory element binding protein 1 (SREBP-1) which is activated to induce genes that regulate lipid biosynthesis. Conversely, ethanol consumption causes a general down-regulation of lipid (fatty acid) oxidation, a reflection of inactivation of the peroxisome proliferator- activated receptor-alpha (PPAR-α) that regulates genes involved in fatty acid oxidation. A third transcription factor is the early growth response-1 (Egr-1), which is strongly induced prior to the onset of steatosis. The activities of all these factors are governed by that of the principal regulatory enzyme, AMP kinase. Important humoral factors, including adiponectin, and tumor necrosis factor-α (TNF-α), also regulate alcohol-induced steatosis. Their levels are affected by alcohol consumption and by each other. This review will summarize the actions of these proteins in ethanol-elicited fatty liver. Because steatosis is now regarded as a significant risk factor for advanced liver pathology, an understanding of the molecular mechanisms in its etiology is essential for development of effective therapies.

SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用

目的探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c(SREBP-1c)cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的表达水平。结果在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加(P均<0.01)。结论已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。

黄芪散有效部位群对胰岛素抵抗HepG2细胞SREBP-1c及其靶基因表达的影响

目的：观察黄芪散有效部位群（HQS）对胰岛素抵抗HepG2细胞固醇调控元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）及其靶基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：噻唑蓝（MTT）比色法检测HQS对细胞活性的影响,采用高糖高胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,造模同时予以不同浓度HQS进行干预,并以二甲双胍（MET）作为阳性药,另设空白组。采用荧光D-葡萄糖同系物2-脱氧-D-葡萄糖（2-NBDG）检测细胞糖摄取量,测定细胞内甘油三酯（TG）,游离脂肪酸（FFA）含量,油红O染色法观察细胞脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞内SREBP-1c,乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）,脂肪酸合成酶（FAS）,硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1）基因的表达。结果：依据MTT实验结果,选择25,50,100 mg·L^-1分别作为HQS低、中、高质量浓度值（HQS-L,HQS-M,HQS-H）,处理时间为24 h。与空白组比较,模型组细胞糖摄取显著减少（P〈0.01）,细胞内TG,FFA含量显著升高（P〈0.01）,胞浆内可见大量红色的小泡性脂滴,SREBP-1c,ACC1,FAS,SCD1 mRNA的表达显著上调（P〈0.01）。与模型组比较,不同质量浓度HQS均可显著升高细胞糖摄取量（P〈0.05,P〈0.01）,HQS-H,HQS-M可显著降低细胞中TG,FFA含量（P〈0.01）,减少细胞内脂滴数量,HQS-L亦可降低FFA含量（P〈0.05）,此外,HQS-H可显著下调SREBP-1c,ACC1,FAS,SCD1 mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）,HQS-M亦可下调SREBP-1c,FAS,SCD1 mRNA的表达（P〈0.05）,对ACC1 mRNA表达具有一定程度的抑制。结论：HQS可能通过抑制SREBP-1c的表达,减少脂质合成,改善HepG2细胞胰岛素抵抗。

脂肪生成影响恶性肿瘤发展与转移机制的研究进展

正常组织中用于供能的脂肪酸主要来自饮食中的游离脂质,但在生长旺盛的肿瘤组织中,能量却来自于脂质的重新合成,所以在不同来源的肿瘤组织中见到脂质合成相关基因的变化,在原发肿瘤中和肿瘤发生相关的生脂基因功能已经基本明确。研究表明在肿瘤细胞中脂肪酸合成酶,硬脂酰辅酶A脱氢酶1、乙酰辅酶A羧化酶在肿瘤的生成和发展起非常重要的作用。脂肪酸的功能与能量贮存、生物膜的结构、信号转导和蛋白质的乙酰化有关,但是现在对脂肪重新生成进程在肿瘤转移中的作用尚不明确。由于耐药性的产生和化疗药物的毒副反应,恶性肿瘤的化疗效果一直不满意,为了寻找新的、选择性抗肿瘤方法,以脂代谢催化酶为靶点的抗肿瘤药物亟待进一步研究和应用。