胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状况及其临床意义

【目的】研究胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状况及与临床病理特征关系。【方法】采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测51例胃癌组织和正常胃粘膜组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状态，并探讨其与临床病理特征的关系。【结果】①胃癌组织中HOXA5基因启动子的甲基化率（74.5%）明显高于正常胃粘膜组织（37．3％），差异有统计学意义（x^2=14．356，P=0．000）。HOXA5基因启动子甲基化率与肿瘤分化程度（x^2=4．311，P=0．038）、浸润深度（x^2=5．669，P=0．017）、淋巴结转移（x^2=9．349，P=0．002）和肿瘤分期（x^2=16．023，P=0．000）呈负相关，而与年龄和性别无关（P均〉0．05）。②胃癌组织中HOXA10基因启动子的甲基化率（68．6％）明显高于正常胃粘膜组织（41．2％），差异有统计学意义（x^2=7．761，P=0．009）。HOXA10基因启动子甲基化率与肿瘤分化程度（x^2=5．304，P=0．021）、浸润深度（x^2=15．457，P=0．000）和淋巴结转移（x^2=6．157，P=0．013）呈负相关，而与肿瘤分期、年龄和性别无关（P均〉0．05）。③HOXA5基因启动子甲基化率与其蛋白表达之间具有负相关性（r=-0．495，P=0．000），HOXA10基因启动子甲基化率与其蛋白表达之间亦具有负相关性（r=-0．343，P=0．000）。两基因启动子甲基化率之间存在正相关性（r=0．751，P=0．000）。【结论】胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子呈高甲基化状态，并且与其蛋白表达之间呈负相关；DNA异常甲基化可能是HOXA5和HOXA10基因表达改变的重要调控机制之一。

晚期胃癌患者组织中PVT1、Her-2基因表达水平与临床病理的关系

【目的】探讨晚期胃癌患者组织中人浆细胞瘤转化迁移基因1（PVT1）、人表皮生长因子受体-2（Her-2）表达水平及其与胃癌临床病理特征的关系。【方法】采用免疫组织化学染色法检测分析本院收治的80例经病理确诊的晚期胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中PVT1、Her-2表达水平。【结果】胃癌组织标本PVT1高表达率、Her-2阳性表达率均明显高于较癌旁组织（P〈0．05）；印戒细胞患者PVT1高表达率（81．25％）、Her-2阳性率（75．00％）明显高于乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌（P〈0．05）；相关性分析显示PVT1高表达、Her-2阳性表达与胃癌TNM分期、淋巴结转移呈正相关（P〈0．05），与细胞分化程度呈负相关（P〈0．05），但与患者性别、年龄无相关性（P〉0．05）。【结论】晚期胃癌患者组织中PVT1、Her2基因表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移、细胞分化、临床病理有明显相关性，临床可据此为晚期胃癌患者选择合理手术方案。

STEAP基因在胃癌组织中表达与淋巴结转移的关系

目的探讨前列腺六跨膜上皮抗原（STEAP）基因 mRNA 表达在胃癌发病过程的意义。方法收集28例新鲜胃癌组织,21例胃癌旁组织以及16例胃癌淋巴结转移组织。常规 Trizol 方法提取组织总 RNA,将这些总RNA反转录成cDNA后,利用实时荧光定量PCR检测STEAP 基因表达。统计分析STEAP基因表达变化与胃癌发病及淋巴结转移的关系。结果与癌旁胃组织相比,STEAP 基因在胃癌组织中表达明显增高。与胃癌淋巴结转移组织相比,STEAP基因在胃癌组织中表达则相应降低。结论 STEAP基因在胃癌中表达上调,并促进了胃癌淋巴结转移。

IL-1β、GSTM1、hMLH1基因在胃癌中的表达及其与临床病理的关系

【目的】探讨白介素-1β（IL-1β）、解毒酶谷胱甘肽硫转移酶M1（GSTM1）、DNA错配修复基因（hMLH1）在胃癌中的表达及其与临床病理的关系。【方法】检测200例胃癌患者（胃癌组）和200例胃良性病变患者（对照组）IL-1β、GSTM1、hMLH1基因表达情况，分析其与胃癌临床病理的关系。【结果]胃癌组IL-1β（T／T）、GSTMl缺失、hMLHl低表达显著高于对照组，且差异有显著性（P〈0．05）；年龄〉60岁、肿瘤直径〈5cm、肿瘤低分化与IL-1β（T／T）基因型表达率高相关；男性、年龄〉60岁与GSTM1缺失率高相关；肿瘤位置、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期与hMLH1低表达相关；logistic回归分析显示，IL-1β（T／T），GSTM1缺失，hMLH1低表达影响胃癌患者5年生存率的危险度（OR）分别为3．124，4．576，7．534，且3种基因存在相互协同作用（P〈0．05，OR〉1）。[结论]IL-1β（T／T）基因型表达、GSTM1缺失、hMLH1低表达均与胃癌发生发展密切相关，此三种基因存在相互协同作用，患者携带交互作用基因可增加罹患胃癌和死亡的风险。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人胃癌BCG-823细胞系增殖及HOXA5基因表达的影响

目的观察不同浓度5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人胃癌BCG-823细胞系增殖及对HOXA5基因表达的影响。方法用不同浓度的5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理培养的胃癌BCG-823细胞株，然后用甲基化特异性PCR（MSP）法检测处理前后的胃癌BCG-823细胞株中HOXA5基因启动子甲基化的情况；噻唑蓝（MIT）比色法检测细胞生长抑制率；实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（QRT-PCR）法检测HOXA5基因mRNA表达水平；Western-blot法检测HOXA5蛋白的表达水平。结果（1）BCG-823细胞株中HOXA5基因启动子存在不同程度的甲基化，5-氮杂-2′-脱氧胞苷可降低这种基因启动子的甲基化率，且与其浓度有关（F=438．307，P〈0．01）。（2）5．氮杂-2′-脱氧胞苷处理的细胞组中，HOXA5基因mRNA和蛋白表达量较对照组均有明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）5-氮杂-2′-脱氧胞苷作用BCG．823细胞后，细胞增殖明显受到抑制，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胃癌BCG-823细胞中HOXA5基因启动子可能存在高甲基化；5-氮杂-2′-脱氧胞苷能抑制BCG-823细胞体外增殖，其可能通过诱导HOXA5基因表达增加而发挥抗癌作用，有望为胃癌的综合治疗提供新线索。

EGFL7基因沉默对裸鼠胃癌血管生成的影响

目的 探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）基因沉默对胃癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响.方法 构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞（psh EGFL7组）,以空质粒转染为对照组.观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积.免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白（TSP1）表达;RT-PCR检测MMP-2和TIMP2表达.结果 psh EGFL7组种植瘤体积为（1.86±0.65）cm^3,微血管密度（MVD）为20.84±6.38,分级为1～2级,对照组体积为（4.86±1.15）cm^3,MVD为39.48±9.01,分级为3～4级,两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义（P＜0.05）.EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2 mRNA表达下调,而TIMP2 mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 EGFL7基因沉默可降低胃癌种植瘤血管生成,与调节MMP-2/TIMP2表达,影响VEGF/TSP1平衡有关.

罗格列酮与全反式维甲酸对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响

目的 研究PPARγ激动剂罗格列酮（RSG）与全反式维甲酸（ATRA）对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响及其机制的研究.方法 体外培养SGC7901细胞,实验分为空白对照组、10μmol/L ATRA组、12.5 μmol/L RSG、25 μmol/L RSG组,10 μmol/L ATRA和25 μmol/L RSG联合组.MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期,HE染色检测细胞形态,免疫细胞化学检测PPARγ蛋白,RT-PCR检测PPARγmRNA.结果 10 μmol/L ATRA、12.5 mmol/L RSG、25 mmol/L RSG及两药联合时皆可抑制SGC7901细胞的增殖,且存在浓度及时间依赖,两药联合作用72 h时,生长抑制率为（29.73±0.69）%.ATRA、RSG皆可使细胞周期G0/G1期延长,S期下降,两药联合作用时,S%为（12.87±0.35）%,细胞形态向正常方向转化,细胞的PPARγ蛋白核内表达及PPARγmRNA表达上调,两药联合后作用进一步加强,PPARγ/GAPDH的浓度比值高达0.646.结论 ATRA、RSG均可抑制SGC7901细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞分化和上调PPARγ蛋白及PPARγmRNA的核内表达,ATRA和RSG联合较单药作用效果更强.

下调COX-2对胃癌细胞系SGC7901增殖的影响

目的 探讨小RNA干扰COX-2表达后对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）的方法检测胃癌细胞系SGC7901和胃正常上皮细胞系GES中的COX-2的mRNA表达水平;蛋白电泳印记技术（Western blot）检测COX-2的蛋白表达情况;MTT法检测SGC7901、GES及转染COX-2 siRNA后SGC7901的增殖曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 qRT-PCR结果显示：COX-2在胃癌细胞系SGC7901中的表达明显高于胃正常上皮细胞系GES（P＜0.01）.Western blot结果显示相对于转染COX-2阴性对照（NC）组,转染COX-2siRNA组COX-2表达降低（P＜0.01）;MTT结果显示细胞系SGC7901转染COX-2 siRNA后,细胞增殖能力明显降低.流式细胞术检测凋亡结果显示,COX-2的表达下调后,SGC7901细胞的凋亡明显增加（P＜0.01）.抑制COX-2的表达可以下调Bcl-2及上调Bax的表达（P＜0.01）.结论 COX-2具有促进胃癌SGC7901细胞系的增殖能力.