SLP-2基因反义核酸对食管鳞癌细胞系TE12生长和增殖的影响

背景与目的应用cDNA微阵列从食管鳞癌配对组织中得到一批在食管鳞癌中差异表达的基因,其中包括SLP-2(stomatin-likeprotein2,SLP-2),它在食管鳞癌中高表达。为验证SLP-2在食管鳞癌中的高表达,构建SLP鄄2真核表达载体,以探讨SLP鄄2与食管鳞癌发生、发展的关系。方法利用PCR从正常食管上皮cDNA中扩增SLP-2的开放阅读框,将SLP-2重组到pcDNA3.1/myc-His(-)中,构建SLP鄄2的真核表达质粒。然后将重组子导入食管鳞癌细胞系TE12中。半定量RT鄄PCR鉴定转染细胞,获得阳性细胞克隆。采用MTT比色法、平板克隆形成实验、流式细胞术和MTS比色法分析SLP鄄2对TE12细胞的影响。结果SLP鄄2在食管鳞癌中高表达。SLP鄄2基因反义转染抑制TE12细胞SLP鄄2表达时,可抑制细胞生长和增殖,导致S期阻滞,并抑制TE12细胞的粘附功能。结论食管鳞癌中SLP鄄2表达上调促进TE12细胞过度生长和增殖,并参与食管鳞癌的转移。

食管癌细胞线粒体中MYH9蛋白的分布及与SLP-2结合的研究

目的研究非肌性肌球蛋白重链9(myosin,heavy chain 9,non-muscle,MYH9)蛋白在食管鳞癌细胞线粒体内的分布,及MYH9蛋白与线粒体相关蛋白SLP-2的结合情况。方法使用抗stomatinlike protein 2(SLP-2)抗体,在食管鳞癌细胞系KYSE150细胞的裂解液里进行免疫共沉淀,共沉淀物使用MALDI-TOF-MS蛋白质质谱进行分析,以分析与线粒体相关蛋白SLP-2结合的分子。对分析结果再继续使用免疫共沉淀及GST pull down法进行验证。使用蔗糖密度梯度离心纯化分离细胞线粒体,利用Western blot明确MYH9在食管癌细胞线粒体内的分布。结果在食管鳞癌细胞系KYSE150细胞的裂解液内,MYH9蛋白可与SLP-2蛋白共沉淀,并且MYH9蛋白也能与GST-SLP-2结合。MYH9蛋白既存在于KYSE150细胞分离纯化后的细胞质中,也存在于分离出的线粒体中。结论 MYH9在食管癌细胞内部分分布于线粒体中,并与线粒体相关蛋白SLP-2相互结合。MYH9可能影响食管癌细胞线粒体的功能。

SLP-2调控人子宫内膜基质细胞细胞系T-HESC的增殖和分化

目的:研究stomatin样蛋白2(stomatin-like protein 2,SLP-2)对人子宫内膜基质细胞系T-HESC的增殖和分化的调控作用。方法:培养子宫内膜基质细胞系T-HESC,体外诱导蜕膜化,RT-q PCR、Western blot和免疫荧光方法检测SLP-2在体外诱导蜕膜化模型中的表达变化以及蜕膜化标志分子催乳素(prolactin,PRL)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin like growth factor binding protein 1,IGFBP1)和Desmin的表达。转染特异性SLP-2干扰小RNA(si RNA),敲低SLP-2的表达,分析敲低SLP-2表达对基质细胞增殖和分化(蜕膜化)的影响。结果:体外诱导蜕膜化条件下,诱导蜕膜化标志物IGFBP1和PRL的表达明显增加;Desmin显著表达于在体外诱导蜕膜化的细胞中;SLP-2表达明显升高。在蜕膜化细胞中转染SLP-2 si RNA敲低SLP-2表达,蜕膜化行为受到显著抑制;细胞增殖标志分子CCND3表达明显下降,细胞增殖降低。结论:SLP-2的表达可影响人子宫内膜基质细胞细胞系T-HESC的增殖和分化。

SLP-2在宫颈腺癌中的表达及其临床意义

目的通过研究Stomatin-like protein2(SLP-2)在宫颈腺癌中的表达,探讨SLP-2蛋白在宫颈腺癌发病中的作用。方法选择正常宫颈组11例,慢性宫颈炎组13例,宫颈腺癌组43例,应用免疫组化方法,研究SLP-2蛋白在宫颈腺癌组织内表达。结果 SLP-2蛋白定位于宫颈上皮细胞胞质内。宫颈腺癌组织,慢性宫颈炎组织及正常宫颈组织中SLP-2蛋白的阳性表达率分别为69.8%、15.4%和零,其中宫颈腺癌与正常宫颈组织间SLP-2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01),与慢性宫颈炎相比,SLP-2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01),而正常宫颈和慢性宫颈炎组织间SLP-2蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论①SLP-2蛋白在宫颈腺癌中的表达明显高于正常和慢性宫颈炎的人。②SLP-2蛋白在肿瘤的发生和发展中起重要的作用,参与了宫颈腺癌的形成机制,并且将成为宫颈癌早期筛查和诊断的有力工具和治疗的新靶点。