小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue non-specific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用。方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位。通过Image-proplus 6.0图像分析软件,对图像进行半定量分析。采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验。结果:出生后1d,中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡。中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势。结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成。

中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究

目的探讨牙胚中间层细胞在釉质分泌与矿化过程中的矿化相关因子的表达。方法取出生后1、3、5、7、9、11、13、15 d的BALB/c小鼠,HE染色法进行中间层发育情况的组织学观察,选择出生后7 d和13 d标本免疫组化检测TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、FM、BGN、DCN在中间层和成釉细胞的表达。结果在釉质形成的阶段,TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞中有阳性表达,TNSALP、E-cad在中间层的阳性表达先于成釉细胞,随分泌过程阳性表达由中间层转移到成釉细胞;BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞阳性表达仅见于成釉细胞分泌的后期,分泌早期未见阳性表达。结论中间层对成釉细胞的分泌功能发挥起支持或诱导作用,中间层细胞与成釉细胞的上皮间矿化相关分子的表达对成釉细胞的分泌具有重要的调控作用。

中间层在成釉细胞分化及分泌期的形态学观察

目的明确中间层细胞在釉质形成过程中的形态学变化,为进一步研究其在成釉细胞分化和釉质形成中的具体作用机制提供理论依据。方法建立出生后BALB/C小鼠牙胚中间层发育HE染色的实验模型;电镜观察其超微结构的变化。结果钟状晚期细胞处于分化期,中间层为2～3层的多细胞层结构,电镜下可见少量的粗面内质网、线粒体等细胞器成分,内釉上皮呈柱状或高柱状,可见中间层与成釉细胞间的桥粒连接;釉质分泌期,中间层呈明显的单细胞结构,细胞排列紧密,与周围组织的界限清楚,成釉细胞呈高柱状,可见大量釉质的分泌,线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等细胞器成分明显增多,细胞间的桥粒连接明显;随着釉质的不断建立,釉质分泌基本完成,中间层结构已不易辨认,此时牙齿亦部分萌出,电镜下细胞间联系疏松,细胞器成分萎缩变减少。结论中间层对成釉细胞的分化及釉质形态的正常发育起到一定的调控作用,并在釉质形成中起到了一定的物质转运及营养支持功能。

中间层细胞增殖与凋亡在釉质形成中的作用

目的检测小鼠牙釉质形成过程中中间层细胞的增殖与凋亡的表达情况,探讨细胞增殖与凋亡在釉质形成过程中的作用。方法制备出生后1、3、5、7、9、15和17天发育阶段的BALA/C小鼠牙胚的石蜡标本,采用SP免疫组织化学技术及原位末端标记法观察中间层细胞及成釉细胞分化各阶段细胞增殖及凋亡的表达情况。结果釉质形成早期,中间层细胞、成釉细胞均呈PCNA阳性表达,且两者在同期表达强弱程度上具有一致性,随着牙冠发育的完成,PCNA的表达减弱;凋亡在分化各期的成釉细胞中皆有表达,尤其在成熟期成釉细胞中表达明显增强,中间层细胞中可散见凋亡现象。结论细胞增殖与凋亡是牙齿正常发育所必需的重要调控机制,中间层细胞与成釉细胞间的增殖与凋亡在时空表达强弱程度变化上具有一致性,具有一定"量"的变化相关性,提示中间层细胞在釉质形态的正常发育过程中起到一定的调控作用。

TNSALP在牙胚冠部硬组织发育期的组织学定位

目的:研究组织非特异性碱性磷酸酶(Tissue non-specific alkaline phosphatase,TNSALP)在牙胚冠部硬组织发育中的组织学分布,探讨其在牙釉质及牙本质形成过程中的作用。方法:取出生后第3 d、5 d、9 d、11 d、15d的BALB/c小鼠15只,解剖分离含下颌第一磨牙区下颌骨,脱钙,制片,HE染色法进行牙齿发育情况的组织学观察,免疫组化PV二步法进行TNSALP组织学定位。结果:第3 d釉质开始形成,成釉器中仅中间层有弱阳性TNSALP表达;第5 d伴随牙釉质的不断分泌,TNSALP在中间层细胞阳性表达,成釉细胞仍为阴性;在第9 d随着釉质形成功能的加强,其表达逐步由中间层细胞向成釉细胞过渡,此时成釉细胞呈阳性表达,至第11 d表达强阳性,从而呈现明显的时空特异性。在牙本质最先形成的上皮根鞘区域,成牙本质细胞的下层区域同样先于成牙本质细胞层阳性表达TNSALP。且随牙本质厚度的增加,成牙本质细胞中的表达不断增强,在出生后第5 d牙胚切片的牙尖区域,成牙本质细胞层、成牙本质细胞下层及其下方的牙髓均阳性表达。结论:TNSALP在牙釉质及牙本质形成过程中均具有重要作用,同时证实中间层细胞及成牙本质细胞的下层区域细胞在其相应的硬组织形成过程中具有一定的调控作用。