甜菜果胶酶促交联对蛋白质乳化液稳定性的影响

研究了辣根过氧化物酶(HRP)和漆酶(Laccase)催化甜菜果胶间交联的反应条件及其对蛋白质乳化液稳定特性的影响。紫外-可见分光光度法和傅里叶变换红外光谱结果均表明,HRP和Laccase在水相中可催化甜菜果胶间形成共价交联。HRP的反应体系为:5 mL反应体系中含6 mg甜菜果胶,20 U HRP,0.5%(质量分数)H2O2,35℃下反应2 h;Laccase的反应体系为:5 mL反应体系中含6 mg甜菜果胶,15 U Laccase,40℃下反应24 h。激光衍射粒度仪测定结果表明,不同酶反应体系下,蛋白质乳液特性不同。Laccase交联体系引起牛血清白蛋白(BSA)、乳清分离蛋白(WPI)乳状液发生分层现象,随反应时间延长,分层更加明显;而在HRP反应体系下,BSA乳状液的稳定性能明显提高。

酪氨酸为底物的过氧化物酶催化荧光反应

G.G.Guilbault等人曾对过氧化物酶催化H_2O_2氧化高香草酸(HVA)的反应进行过较详尽的研究。利用这个反应可以对有关的氧化还原酶、辅酶、有机底物、无机离子和微量H_2O_2进行分析检测。但是,以高香草酸为底物,价格昂贵,作为通用检测方法不够经济。Guilbault认为酪氨酸有类似的反应,且价格便宜,但未进行详细研究。我们在此基础上。

辣根过氧化物酶的电化学固定化及其对H_2O_2的生物电催化还原作用

利用电化学固定化方法制备了聚吡咯／辣根过氧化物酶（ＰＰ／ＨＲＰ）膜电极，并研究了其电化学行为。在除氧的磷酸盐缓冲液介质中，ＰＰ／ＨＲＰ电极加速Ｈ_２Ｏ_２的还原，归因于酶加成物的直接电子传递。探索ＨＲＰ与电子传递体Ｋ４Ｆｅ（ＣＮ）６在聚吡咯（ＰＰ）膜中的同时固定化条件及其膜电极的电化学行为，实验证实，Ｋ_４Ｆｅ（ＣＮ）_６在酶膜中的存在使得Ｈ_２Ｏ_２的还原电位强烈正移，在－０．０５Ｖ的工作电位下能对Ｈ_２Ｏ_２进行检测，相应的电极过程可用间接氧化还原催化机理解释。

经上丘逆行标记法视网膜神经节细胞定量的实验研究

目的 建立一种视网膜神经节细胞 (RGCs)定性及定量的研究方法 ,并了解大鼠RGCs密度分布情况。方法 暴露大鼠双上丘后将饱含 3 0 %辣根过氧化物酶 (HRP)溶液的明胶海绵片贴附于双上丘表面 ,大鼠存活 2 4h后 ,取出视网膜行HRP组织化学反应 ,计算机图像分析系统对RGCs进行分类及计数。结果 左右眼RGCs密度分别为 14 66±3 76/mm2 及 14 5 7± 40 4/mm2 ,左眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 90± 3 71/mm2 及 14 4 2± 3 82 /mm2 ,右眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 67± 410 /mm2 及 14 4 6± 40 0 /mm2 。结论 成功地建立了直接上丘HRP逆行标记RGCs定量计数法 ,正常大鼠双眼RGCs密度基本相同 ,颞侧及鼻侧RGCs密度基本相同。

大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶阳性神经的来源

采用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪与还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH-d)相结合方法 ,观察大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经纤维的来源。结果 :当 HRP注入“内关”穴后 ,在脊神经节的颈 6至胸 1 (C6-T1)节和脊髓前角观察到 HRP-NOS双标记神经元。结论 :“内关”穴区有 NOS阳性感觉和运动神经纤维分布。

抗肾综合征出血热病毒和抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体的建立

成功地获得了既抗肾综合症出血热病毒,又抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体(简称抗HFRSV-抗HRP BsMcAb)。方法是,先将分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤A25-1细胞用杂氮鸟嘌呤进行诱变试验,建立了分泌抗HFRSV McAb的HGPRT细胞株(即HAT敏感型细胞株)251AGD6。用此细胞与HRP免疫的Balb/c小鼠脾细胞再次融合,得到分泌抗HFRSV-抗HRP的BsMcAb杂交杂交瘤(Hybrid Hybridoma)261-HRPB10细胞株。用双抗原免疫斑点试验和双抗原ELISA试验测定251-HRPB10腹水BsMcAb,滴度均为1000;用IFA测定单向抗HFRSV抗体滴度为10000;用免疫斑点法和ELISA测定单向抗HRP抗体滴度,均为100000。杂交杂交瘤的染色体数目在150条左右,证实是三细胞两次杂交瘤。

IgG3酶联免疫分析方法的建立及初步应用研究

目的：建立IgG3酶联免疫分析（ELISA）方法，探讨IgG3在炎症性疾病患者血清中的水平变化。方法：用兔抗人IgG3的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别结合待测标本中的IgG3，再用此多克隆抗体标记生物素（Bio-Ab），用亲和素标记辣根过氧化物酶（HRP-A），向固相酶标板中加入标准品或待测品，反应、洗涤后，加入Bio-Ab，反应、洗涤后，加入HRP-A，反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的IgG3含量。结果：该法测定范围为（1．875-60）ng／ml，最低检出量1．5ng／ml，批内和批间误差分析〈8％和10％。用该法测得正常青年人血清IgG3含量为（12.91±4．25）ng／ml（n=64），风湿病患者为（11．23±4．64）ng/ml（n=64），肺部感染患者为（9．32±2．00）ng／ml（n=24），后两组血清IgG3水平均显著低于正常青年人（P〈0．05）。结论：我们建立的IgG3 ELISA方法稳定、简便，特异性和灵敏度高，适于检测人血清ISG3水平的变化。

常温预辐射聚合法物理包埋辣根过氧化物酶的研究

本文发展了一种新型的,常温下预辐射聚合物理包埋酶的方法。此法避免了酶直接受到辐照而引起的失活,且简单易行、包埋效率高,固相酶的使用性能亦很好。实验表明,常温预辐射固定化技术对辐射敏感的生物活性分子的固定化将是一种很有希望的新型物理包埋法。

壳聚糖-胶体金修饰丝网印刷电极测定过氧化氢

实验制作了丝网印刷酶电极,采用不同的方法对电极进行修饰,比较了壳聚糖酶电极和壳聚糖胶体金修饰酶电极对过氧化氢的响应。结果表明,在磷酸盐缓冲液(0.1 mol·L^(-1),pH7.2,PB)中,酶电极的二茂铁氧化峰消失,而还原峰电流高,峰形较好,在检测过程中,电极性能稳定,重复性好。当过氧化氢浓度范围在0.08-40 mg·L^(-1)时,壳聚糖胶体金修饰酶电板对过氧化氨响应电流具有较好的线性关系,面归方程为 Y=0.9406610gC-1.48549(C 为过氧化氢浓度),检测下限为80μg·L^(-1),检测精度高,反应灵敏,而且抗干扰能力较强,适合用于食品中过氧化氢的快速检测。

木质素-对甲酚共聚物的制备与分析

采用了一种全新的反相微乳液体系，十六烷基三甲基溴化铵＼正丁醇＼异辛烷＼水，用辣根过氧化物酶催化合成木质素对甲酚共聚物，证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明：木质素与对甲酚发生了聚合反应。差示扫描量势分析的结果表明，引入对甲酚改善了木质素的热性能。

ATRP法合成AC-g-PSStNa及其对辣根过氧化物酶固定化的影响

以活性炭(AC)为原料,利用原子转移自由基聚合法(ATRP)合成了AC-g-PSSt Na有机无机杂化材料,并对其进行FT-IR、SEM、XPS表征。以AC-g-PSSt Na为载体对辣根过氧化物酶(HRP)进行固定化,比较游离酶和固定化酶的pH稳定性、热稳定性及储存稳定性。结果表明,Ac-g-PSSt Na固定化HRP的pH稳定性及热稳定性均强于游离酶,特别是在高温范围内表现出高的催化活性;在碱性环境中固定化酶的活性比游离酶高。可见AC-g-PSSt Na复合材料可有效地应用于固定化HRP。

大鼠下丘脑室旁核与终纹床核及前额叶皮质间纤维联系的研究

分别注射辣根过氧化物酶(HRP)入大鼠的PVN和BNST,用组织化学的方法在确定注射部位准确的情况下,在PVN、BNST及PFC观察被标记的神经元或轴突末梢,探讨大鼠下丘脑室旁核(PVN)与终纹床核(BNST)及前额叶皮质间(PFC)之间是否存在投射通路;将HRP注射到PVN后,在同侧的BNST见标记的细胞体,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢;将HRP注射到BNST后,在同侧的PVN见标记的轴突末梢,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢。大鼠BNST有神经纤维投射到PVN,PFC与PVN及BNST之间没有直接的或只有极少量的纤维联系,在机体面临威胁性情境时,BNST可能激活HPA轴引发生理和行为反应,PFC是否通过与PVN或BNST的直接或间接的纤维投射实现其调节功能值得关注。

酶催化合成草浆木质素-对甲酚共聚物的研究

在反相微乳液体系 (十六烷基三甲基溴化铵 \正丁醇 \异辛烷 \水 )中 ,用辣根过氧化物酶催化合成木质素 对甲酚共聚物 ,证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明 ,木质素与对甲酚发生了聚合反应 ,差示扫描量热分析的结果也表明 ,引入对甲酚改善了木质素的热性能 ,合成的共聚物最高分子量可达

反相微乳液酶催化合成木质素-对甲酚共聚物

采用一种全新的反相微乳液体系 :十六烷基三甲基溴化铵 正丁醇 异辛烷 水 ,用辣根过氧化物酶催化合成木质素对甲酚共聚物 ,证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明木质素与对甲酚发生了聚合反应 ,差示扫描量热分析的结果表明引入对甲酚改善了木质素的热性能。讨论了该聚合过程中酶浓度 ,活性剂浓度 ,W0 :c(H2 O) c(CTAB) ,酚浓度 ,木质素浓度 ,醇烃比对分子量的影响 .回归实验数据得出控制分子量大小的关联式 ,平均偏差为 8.7%。

耐尔蓝共价键合固定于自组装膜电极表面的电化学特性

文章利用自组装方法,将耐尔蓝共价键合固定于自组装膜电极表面,并研究了其电化学及电催化性质. 耐尔蓝在自组装膜电极表面形成稳定的单分子层,在电极表面呈现准可逆的氧化还原性质,并能有效地电催化氧化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)和电催化还原辣根过氧化物酶(HRP). 其良好的氧化还原性质和电催化特性,可为构造生物传感器提供稳定的媒介层.

偶合反应化学发光酶联免疫分析检测反应新体系的探讨

本文首次提出了偶合反应化学发光酶联免疾分析测定HRP的新方法,系统地分析和研究了偶合反应在化学发光酶联免疫分析中的应用;提出了五类偶合反应化学发光酶联免疫分析测定HRP的新体系,并对各类偶合反应化学发光体系测定的HRP灵敏度作了比较。

IgG4酶联免疫分析的建立及初步应用

用兔抗人IgG4的多克隆抗体(IgG4Ab)包被成固相板,以识别结合待测标本中的IgG4。用生物素标记IgG4Ab得BioIgG4Ab;用亲和素标记辣根酶得HRPA。在已包被IgG4Ab的固相板中加入IgG4标准品(或待测样品),反应、洗涤后,加入BioIgG4Ab,反应、洗涤后,加入HRPA,反应、洗涤后,板上形成IgG4Ab—IgG4—BioIgG4Ab—HRPA复合物,加酶底物显色,用酶标仪在490nm波长测定OD值,作标准曲线,根据标准曲线,查出标本中IgG4含量。该法测定范围:2.5～200ng/mL,最低检出量2.1ng/mL,批内和批间CV分别8.4%和11.2%。测得血清IgG4含量:青年人(30名)为37.7±2.3ng/mL;30名献血员为42.7±9.9ng/mL,49例重症监护患者明显升高为71.2±9.2ng/mL;49例肺部感染患者明显降低为28.4±9.2ng/mL。结果表明该法稳定,灵敏度适于检出人血清IgG4水平。

间苯二胺-H_2O_2-HRP偶合反应伏安酶联免疫分析新体系测定HRP的研究

提出了间苯二胺Ｈ２Ｏ２ＨＲＰ伏安酶联免疫分析新体系测定ＨＲＰ的方法。通过测定ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化间苯二胺的产物从而间接地测定ＨＲＰ的浓度。偶合反应产物在ｐＨ９０的ＢＲ缓冲溶液中，在－０４８Ｖ（ＳＣＥ）左右产生一灵敏的极谱波，在选定的最佳条件下，测定ＨＲＰ的线性范围是６０×１０－１０～８０×１０－８ｇ·ｍＬ－１，检出限可达１０×１０－１０ｇ·ｍＬ－１。用于测定游离的ＨＲＰ及ＨＲＰ标记物，灵敏度较经典的ＥＬＩＳＡ法高。

正常豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元的投射

本文采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行追踪技术结合硫辛酰胺脱氨酸（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学方法，研究正常豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元的上行投射特点。探讨耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元在听觉信号传递中的可能作用。结果表明，一侧上橄榄复合体加压注射ＨＲＰ后，两侧耳蜗核均出现ＨＲＰ标记细胞，同侧耳蜗核ＮＯＳ－ＨＲＰ双标细胞较多占８２．６３％，并可见ＨＲＰ阳性纤维和终末包绕ＮＯＳ阳性胞体，对侧耳蜗核ＮＯＳ－ＨＲＰ双标细胞相对较少，仅占１４．８７％。一侧下丘加压注入ＨＲＰ后两侧耳蜗核均无ＨＲＰ－ＮＯＳ双标细胞。结果提示，耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元向上橄榄复合体投射。

高香草酸-H_2O_2-HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的研究

提出了高香草酸－H2O2－HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的新方法。该法基于HRP催化H2O2氧化高香草酸生成能产生荧光的物质，该物质在Ex＝317nm激发光作用下产生荧光，通过测定在Em＝421nm处的荧光强度，间接测定HRP的含量。在所选定的实验条件下，对HRP测定线性范围为1．0×10（-10）～1．0×10（-8）g／mL，检测限为1．0×10（-10）g／mL。