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大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建
1
作者
曾明
许文香
王斌
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2004年第1期16-17,22,共3页
目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表...
目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表达载体 ,经SDS PAGE电泳分析目的蛋白表达量。结果 所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源 ,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的 2 0 %。
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关键词
大肠杆菌
O157:H7
stx2
毒素
B亚单位
基因
克隆
序列
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职称材料
鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
2
作者
刘璐
曾浩
+4 位作者
罗萍
吴剑
张卫军
毛旭虎
邹全明
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009年第2期111-114,123,共5页
目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3...
目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。
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关键词
EHEC
O157:H7
stx2
亚单位
噬菌体
Fab抗体库
原文传递
题名
大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建
1
作者
曾明
许文香
王斌
机构
中国药品生物制品检定所
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2004年第1期16-17,22,共3页
文摘
目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表达载体 ,经SDS PAGE电泳分析目的蛋白表达量。结果 所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源 ,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的 2 0 %。
关键词
大肠杆菌
O157:H7
stx2
毒素
B亚单位
基因
克隆
序列
Keywords
E.coli O 157 :H 7
stx2
toxin B
subunit
Sequence
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
2
作者
刘璐
曾浩
罗萍
吴剑
张卫军
毛旭虎
邹全明
机构
第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009年第2期111-114,123,共5页
基金
军队"十一五"科技攻关项目(06G078)
国家高技术发展研究计划863项目(2006AA02Z405)
文摘
目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。
关键词
EHEC
O157:H7
stx2
亚单位
噬菌体
Fab抗体库
Keywords
EHEC O157:H7
stx2 subunit
Phage
Fab antibody library
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建
曾明
许文香
王斌
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2004
0
下载PDF
职称材料
2
鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
刘璐
曾浩
罗萍
吴剑
张卫军
毛旭虎
邹全明
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009
0
原文传递
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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