载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉,进行淋巴管内皮受体1(LYVE1)、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光组织化学染色,染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明,移至自制的样本容器中,荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低,外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强,更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便,特异性好。

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳综合实验设计

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是生物化学实验课程中的经典实验,但因其操作单一、等待时间过长,学生的收获感不强,有必要进行综合设计。把上课时间分为三个时段,在各个时段设计多种学习活动:串讲原理、做练习题使相关知识融会贯通;阅读文献,提出疑问;设置试误样品组、做相关实验,启发学生顿悟。通过这些学习活动,学生不仅学会了电泳技术的基本操作,还深刻理解了实验原理,强化了勇于探索的科学精神,体会了顿悟的快乐。

苏丹黑B染色处理细胞技术在快速检测微藻油脂含量中的应用

探讨了采用苏丹黑B染料染色处理微藻细胞技术估测微藻油脂含量的可行性.结果表明,微藻细胞经苏丹黑B染色处理后在645 nm光波长处有最大吸收峰值A645,微藻油脂含量与经苏丹黑B染色处理后微藻细胞的吸光值A645呈明显的相关性.建立了考察的7种微藻油脂含量与吸光值A645的线性回归方程,线性关系显著（p〈0.01）.基于藻湿重,微藻油脂含量的线性范围为1.79~39.63 mg/g,估算的相对偏差〈10%.因而,采用苏丹黑B染色处理微藻细胞技术适宜用来检测微藻的油脂含量.

A^2/O工艺强化反硝化除磷体系中微生物特性分析

为了更直观地认识反硝化除磷体系中生物脱氮除磷机理及运行状态,本文尝试了对A2/O工艺强化反硝化除磷体系在稳定运行期的活性污泥采取直接染色的手段,观察聚-β羟基丁酸(PHB)和聚磷酸盐(Poly-P)的沿程变化状况,同时结合活性污泥的电镜扫描图像,考察该系统的微生物菌群特征.试验结果表明,在厌氧阶段,微生物细胞内PHB的量大幅提高,上清液中磷酸盐的含量上升,聚磷酸盐含量明显下降,粒径为1~1.5μm、呈球状和棒状的菌群构成的葡萄状细胞簇占居优势;在缺氧阶段,微生物细胞内PHB的量下降,上清液中磷酸盐含量下降,聚磷酸盐含量上升,粒径为0.5~1μm的椭球菌与1.0~1.5μm的球杆菌占优势;在好氧阶段,微生物细胞内PHB的量较低或接近零,上清液中磷酸盐的含量接近零,聚磷酸盐含量明显上升,此时粒径1.0~1.5μm的球菌以单个或成对出现,球菌不再饱满,呈现接近消失的状态.相比之下,单纯的脱氮系统则不存在上述微生物特性的变化.

苏丹黑B染色法原位检测2株淡水小球藻胞内油脂累积

以2株淡水小球藻Chlorella pyrenoidosa XJ01和Chlorella sorokiniana XJ02为研究对象,对苏丹黑B染色法测定微藻胞内油脂质量分数的条件进行优化,建立苏丹黑B染色法原位测定微藻油脂的方法;并在通气条件下,检测微藻脂质质量分数及脂质累积过程。研究结果表明:当辅助染色破壁的盐酸浓度为1.0 mol/L,染色时间和温度分别为10 min和100℃时,苏丹黑B染色效果最好;在不同生长阶段,C.sorokiniana XJ02胞内油脂质量分数均比C.pyrenoidosa XJ01的高;此外,2株藻胞内油脂质量分数在对数生长期中期开始快速增加,到生长稳定期油脂质量分数达到最高,C.pyrenoidosa XJ01和C.sorokiniana XJ02油脂质量分数最高分别为25%和38.2%,随后油脂质量分数开始缓慢降低;利用苏丹黑B将微藻细胞染色后在显微镜下观察到的胞内油滴结果与其胞内油脂测定结果基本相符。

低能离子注入油脂高产菌株黏红酵母(Rhodotorula glutinis)的选育

本文对油脂高产菌株选育过程中的筛选方法进行研究,采用苏丹黑B染色作为定性分析、酸热耦合超声波作为定量分析高产油脂菌株的筛选方法,通过低能离子注入黏红酵母(Rhodotorula glutinis)进行诱变,筛选油脂高产菌株。结果表明:获得了一株油脂高产菌株D30,产量比出发菌株提高33.05%,传代试验表明了D30的遗传稳定性良好,当发酵96 h,其油脂产量达3.10 g/L。另外,对D30发酵动力学进行了研究,当发酵时间为10 d时,其生物量为47.98 g/L(菌体湿重),油脂产量达到7.81 g/L。

产油微生物的筛选及其产油率测定

为寻求可再生、环境友好且经济可行的化石能源替代燃料,采用苏丹黑B和尼罗红染色法及甲醇-氯仿提取法对平顶山各地不同生境富含油脂土壤中的高产油脂微生物进行分离筛选。结果表明:试验分离到2株产油菌株PDS1和PDS2。其中,产油细菌PDS1为革兰氏阴性菌,产油率为29.47%;产油细菌PDS2为革兰氏阳性菌,产油率为23.57%。

髓系过氧化物酶和苏丹黑B染色缺乏的急性变异型早幼粒细胞性白血病2例报道

目的 :探讨急性变异型早幼粒细胞性白血病 (M3v)髓系过氧化物酶 (MPO)和苏丹黑B(SBB)染色缺乏的意义。方法 :报告 2例MPO和SBB染色缺乏的急性变异型早幼粒细胞性白血病 ,对 2例急性变异型早幼粒细胞性白血病进行细胞化学染色。结果 :例 1患者骨髓涂片原始 (粒 )细胞 4 .0 % ,微颗粒型早幼 (粒 )细胞 90 .0 % ;细胞化学染色氯醋酸酯酶 (chloroacetateesterase ,CE)阳性率 98.0 % ,MPO、SBB阳性率仅为 1 8.0 %、8.0 % ;例 2患者骨髓涂片原始 (粒 )细胞 30 .5 % ,微颗粒型早幼粒细胞 64 .0 % ;细胞化学染色CE阳性率 72 .0 % ,MPO、SBB均为阴性。 2例患者均使用全反式维甲酸治疗 ,例 1患者 3天后放弃治疗 ,例 2获得缓解 ,但拒绝化疗 ,于 2 81天后因复发死于颅内出血。结论 :极少数急性变异型早幼粒细胞性白血病细胞可出现MPO、SBB染色缺乏 。

开放条件下高聚β-羟基丁酸酯含量的甲烷氧化混合菌群的富集

目的:在开放条件下以甲烷为底物富集高聚β-羟基丁酸酯(PHB)含量的甲烷氧化菌群,获得能够利用低成本碳源高产PHB的菌种。方法:采用丰盛-饥饿模式间歇供料,以甲烷为底物,好氧开放式培养甲烷氧化混合菌群,利用苏丹黑染色法动态检测丰盛和饥饿阶段胞内PHB含量的变化,以此为基础考察丰盛-饥饿期比例对富集高PHB含量的甲烷氧化菌群的影响。结果:丰盛-饥饿期比例为1∶3时,微生物PHB含量从17.7%增加到35.5%,且开放培养过程中菌群结构稳定。结论:通过丰盛-饥饿模式间歇供料开放式培养所得的高PHB含量的稳定的甲烷氧化菌群,具有工业生产PHB的应用价值。

一种快速筛选产聚羟基烷酸细菌方法的建立

为了从土壤微生物中快速分离纯化得到产聚β-羟基脂肪酸(PHAs)的微生物菌株,研究比较了几种聚羟基烷酸产生菌筛选方法。结果表明,尼罗蓝染色法优于苏丹黑染色法,而且0.1%的尼罗蓝丙酮染液55℃染色细菌菌落10 min,紫外灯下观察菌落,能合成聚羟基烷酸的菌落具有明显的荧光现象。进而推出对于产生物降解塑料菌株的染色,尼罗蓝染色法优于苏丹黑染色法,尼罗蓝菌落染色法是一种简单、快速、可靠的筛选聚羟基烷酸产生菌的方法。

LC–MS/MS法检测黑色粮谷类食品中的苏丹黑B和苏丹红B

采用液相色谱串联质谱（LC-MS／MS）法测定黑色粮谷类食品中苏丹黑B和苏丹红B含量。用正己烷、饱和乙腈提取目标物，以乙腈饱和的正己烷去除油脂，以固相萃取柱富集净化处理，外标法定量。苏丹黑B和苏丹红B的质量浓度在5-100ng／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性，线性相关系数r^2〉0．999，检出限为5μg／kg。加标回收率为90．0％-96．0％，测定结果的相对标准偏差小于1．0％（n=6）。该方法分析时间短，准确性好，适用于黑色粮谷类食品中苏丹黑B和苏丹红B含量的检测分析。

斯氏油脂酵母细胞内油脂含量的快速检测方法研究

以斯氏油脂酵母为研究对象,探讨了利用苏丹黑B染色定量测定其胞内油脂含量的可行性,对苏丹黑B染色法测定胞内油脂含量的条件进行了优化。结果表明:斯氏油脂酵母经苏丹黑B染色处理后在600 nm处有最大吸收峰;在沸水浴中加热6 min和不添加盐酸的情况下,斯氏油脂酵母苏丹黑B染色效果最佳;建立了斯氏油脂酵母胞内油脂含量与吸光值A600的线性回归方程,线性关系显著(R2=0.992 9)。该方法与酸热-有机溶剂法测定结果相对误差在允许范围内,可用于快速测定斯氏油脂酵母胞内油脂含量。

一株产油脂细菌Bacillus sp.A7的分离与鉴定

采用影印平板法从食堂排污口水样中初步筛选出6株产油脂菌株,苏丹黑B染色法进行复筛,3个菌株染色后胞内蓝黑色物质较多,其中编号A7的菌株,生长较快,故将其作为实验菌株。菌株A7呈短杆状,革兰氏染色为阳性。对其部分生理生化特征进行研究:其中PHB染色、淀粉水解实验和卵磷脂实验为阳性,异染粒染色、接触酶实验、反硝化实验和荧光色素实验为阴性。经16SrDNA分子生物学鉴定,该菌属于芽孢杆菌属,暂命名为Bacillus sp.A7。对菌株A7进行扩大培养,采用盐酸水解法提取油脂,测得其油脂质量分数约为21.25%。

微藻油脂含量不同测定方法的比较研究

为了对微藻油脂含量不同测定方法进行比较,以球等鞭金藻8701 Isochrysis galbana Parke 8701和小新月菱形藻Nitzschia closterium f.minutissima两种微藻为研究对象,采用溶剂提取法和苏丹黑B染色法对其油脂含量进行测定,建立了两种微藻油脂含量与苏丹黑染色后吸光度A645 nm的线性回归方程,并应用于微藻油脂积累培养过程的快速测定,利用气相色谱法对两种微藻脂肪酸组成进行分析。结果表明:当提取溶剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(二者的体积比为1∶2)时,油脂提取效果较好,得到球等鞭金藻8701和小新月菱形藻的油脂含量分别为22.99%和16.89%;采用苏丹黑B染色法测定的油脂含量基本和生物量大体一致,是一种可行的估测油脂含量的方法;气相色谱检测结果显示,两种微藻具有明显不同的脂肪酸组成特征,球等鞭金藻8701的饱和脂肪酸含量(55.02%)较小新月菱形藻(51.39%)高。研究表明,从两种微藻的油脂含量和脂肪酸组成来看,球等鞭金藻8701较小新月菱形藻更适用于作为生物柴油的原料。

秀丽隐杆线虫脂肪染色的方法比较(英文)

肥胖及其相关的疾病影响了越来越多的人.在哺乳动物中调节脂肪代谢的因子和脂肪代谢途径在线虫中也是保守存在的,因此线虫是脂肪研究的良好动物模型.在研究线虫脂肪代谢中,存在多种脂肪染色方法,而不同方法所表征的脂肪含量存在一定的差异,通过各种染色方法检测基因突变或者饥饿引起的脂肪含量变化.实验结果表明,采用油红、苏丹黑、尼罗红染料的固定染色法均能够正确地表征线虫的贮存脂肪.

海金沙卵发生的组织化学研究

采用组织化学方法对海金沙(Lygodium japonicum(Thunb.)Sw.)卵发生进行了研究。高碘酸-锡夫反应(PAS反应)结果显示:颈沟和腹沟细胞外产生的黏性物质为多糖类物质;在卵细胞发生早期颈卵器细胞内均含有质体,且淀粉粒含量丰富,随着颈卵器的发育,卵细胞以及颈沟和腹沟细胞内淀粉粒数量和体积均逐渐减少,最后退化消失。苏丹黑B反应结果显示:海金沙颈沟和腹沟细胞外产生的黏性物质也含有脂类物质,而卵细胞内并未有明显脂类物质产生;卵细胞质膜处也并没有糖类或脂类物质的积累。本研究从组织化学角度佐证了海金沙的特殊性,即既有原始蕨类的特征,又有进化蕨类的特征。

苏丹黑B降低大鼠肠道自发荧光及其在免疫荧光染色中的应用

目的探讨降低大鼠肠道组织自发荧光的简便可行方法。方法取正常SD大鼠(n=5)肠道做冷冻切片,荧光显微镜下观察自发荧光(AF),检测苏丹黑B(SBB)对AF的影响及其在肠道免疫荧光(IF)染色中的应用。结果大鼠各肠段组织在FITC和TRITC通道存在大量明显的AF,且不受血清封闭的影响;应用0.3%SBB处理组织10 min,可显著降低AF;IF染色加SBB处理后的肠道可见AF显著降低,目的蛋白的荧光表达不受影响。结论0.3%SBB染色10 min能显著降低大鼠肠道组织的AF,使IF特异性染色更加鲜明。

斑马鱼髓系造血细胞缺陷突变体的大规模遗传筛选

目的通过大规模化学遗传学方法筛选斑马鱼髓系造血缺陷突变体。方法利用化学诱变剂乙基亚硝基脲(ENU)将雄鱼精原母细胞诱变,通过与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder(F0)的F1代同胞之间交配产生F2家族,F3代来F2家族同胞内交配,并分别以中性红和苏丹黑B染色筛选巨噬细胞和粒细胞缺陷突变体。结果我们筛选了350个F2家族,共1424对鱼。初步筛选到6个斑马鱼髓系造血系统的突变体,其中3个突变体为中性红染色异常,另3个突变体为苏丹黑染色异常,表明以上突变体可能存在巨噬细胞或粒细胞的发育障碍。结论 ENU化学诱变和中性红及苏丹黑B染色筛选斑马鱼髓系造血缺陷突变体是简单、价廉、有效的化学遗传学方法。通过保留突变体对后代进行进一步的研究分析,有望鉴定和克隆影响斑马鱼髓系造血新的基因或已知基因的新的调控途径。

聚羟基烷酸合成菌的分离·鉴定及其生长特性研究

［目的］获取性状优良的聚羟基烷酸（PHAs）合成菌。［方法］以东湖底泥、山坡裸地土、肥沃菜园土和油脂浸润土为初始样品，经富集、分离纯化、苏丹黑B染色、红外光谱及气相色谱定性定量分析筛选出具PHAs合成能力的细菌菌株。［结果］苏丹黑B染色结果表明，在分离出的12株细菌中有3株细菌具有PHAs合成能力，其编号分别是Zj5、Zj8和Zj9。3株细菌均在1 741 cm-1附近呈现吸收峰，菌株Zj8和Zj9的红外谱图相似。菌株Zj5、Zj8和Zj9的PHAs含量分别为146.85、0.65和3.48 mg/L，菌株Zj5被初步鉴定为假单胞菌属细菌。菌株Zj5在pH值为5.0-9.0的环境中均能生长，其生长的最适pH值为7.6；在25-35 ℃下均能正常生长，其最适培养温度和通气量分别为30 ℃和100 ml。［结论］ 菌株Zj5、Zj8和Zj9有PHAs合成能力且菌株Zj5的合成能力最强。

苏丹EIGILI电厂“黑启动”试验

在电网的大面积停电事故的情况下,能否及时向用户恢复送电,取决于系统内的发电机组是否能及时自启动。通过分析苏丹EIG ILI发电厂在电网停电事故时可能出现的几种情况及相应的处理方法,验证了EIG I-LI电厂进行“黑启动”方案的可行性。