基于UPLC-QTOF-MS/MS分析的芪葵颗粒化学成分系统筛选与识别

目的系统定性表征芪葵颗粒(黄芪、制首乌、黄蜀葵花)中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用分析方法对芪葵颗粒水提液进行分离检测,获取正、负离子模式下的原始分析数据;借助AB Sciex PeakView软件,综合采用靶向和非靶向的筛选方法,对获得的原始分析数据进行处理,系统筛选鉴定芪葵颗粒中的化学成分;以不少于2个准分子离子的同时出现,排除碎片离子的干扰,锁定筛选所得目标化合物;依据准分子离子及特征二级子离子质谱信息,结合标准品比对,并参考数据库搜索匹配和文献数据比对,对锁定的化合物进行鉴定或合理归属。结果从芪葵颗粒中共筛选出89个化合物,鉴定出71个化合物,包括黄酮类45个,皂苷类14个,蒽醌类4个,二苯乙烯苷类3个,多糖类2个,有机酸类3个。鉴定结果表明羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、乙酰化、甲基化、丙二酰化等多种转化反应参与了芪葵颗粒多样化学成分的形成。结论基于UPLC-QTOF-MS/MS靶向和非靶向相结合的筛选鉴定方法可快速全面表征芪葵颗粒中的主要化学成分及其涉及的转化反应,为深入探讨芪葵颗粒的质量控制、组方优化和药效物质等奠定了基础。

斑秃生发颗粒质量标准的研究

目的 :建立斑秃生发颗粒的质量标准。方法 :用HPLC法对斑秃生发颗粒中主要成分 2 ,3,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 0 β D葡萄糖苷进行含量测定 ,流动相为乙腈 - 3%冰乙酸水 (12∶88) ,检测波长 32 0nm。同时对制剂中的主要药味黄芪、何首乌、当归、羌活进行薄层鉴别。结果 :平均加样回收率为 99 33% ,RSD =1 74 % (n =6 )。薄层图谱斑点清晰 ,阴形对照无干扰。结论 :本方法可靠准确、重现性好 ,可有效控制制剂的质量。

白斑颗粒的薄层色谱鉴别

目的:建立白斑颗粒的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法对白斑颗粒中何首乌、丹参、桃仁、赤芍进行定性鉴别。结果:在薄层层析色谱中均能检出何首乌、丹参、桃仁和赤芍。结论:方法简便、专属性强,可用于该制剂的质量控制。

益视颗粒的质量标准研究

目的:建立益视颗粒的质量标准。方法:用 TLC 法对益视颗粒进行定性鉴别;并用 HPLC 法测定益视颗粒中有效成分的含量.结果:薄层色谱法可鉴别方中制何首乌、厚朴、木香的对应斑点;HPLC 法可测定有效成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷的含量。结论:本法操作简便,重现性好,结果准确,可作为该制剂的质量控制方法。

参芪颗粒的质量标准研究

目的建立参芪颗粒的质量标准.方法采用薄层色谱法对处方中黄芪、何首乌进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1和Re的含量.结果在 TLC色谱中均能检出黄芪、何首乌.高效液相色谱法于30min内能基线分离人参皂苷Rg1和Re.人参皂苷Rg1和人参皂苷Re分别在0.50～5.00μg和0.41～4.10μg范围内有良好的线性关系;该实验方法具有良好的重现性,RSD分别为2.59%和2.63%;平均回收率分别为(99.60±1.93)%和(98.52±2.31)%.结论所建立的方法可准确快速地进行定性、定量检测,可用于该制剂的质量控制.

补肾益智颗粒的质量标准研究

目的建立补肾益智颗粒的质量标准研究。方法采用薄层色谱法对补肾益智颗粒中的蛇床子、女贞子和制何首乌进行定性鉴定,采用高效液相色谱法对其中蛇床子素和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行测定。对于蛇床子素,高效液相色谱系统是由Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水(65∶35)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm。对于葡萄糖苷,高效液相色谱系统包括C18(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(30:70)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm。结果补肾益智颗粒的蛇床子、女贞子和制何首乌供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;蛇床子素在0.09～1.35μg范围内与峰面积积峰值线性关系良好(r=0.999 9)。2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)在0.84～3.15μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)。平均回收率分别为100.52%和99.75%。结论建立的质控方法简便,快速,准确,回收率高,重现性好,可用于补肾益智颗粒的质量控制。

HPLC法同时测定制首乌无糖颗粒中大黄素、大黄素甲醚的含量

目的建立制首乌无糖颗粒中大黄素、大黄素甲醚的含量测定方法。方法采用Agilent 5TC-C18(150×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(80:20),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温25℃。结果大黄素和大黄素甲醚分别在0.08~0.8μg(r1=0.999 8)、0.04~0.4μg(r2=0.999 7)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.04%、99.58%,RSD分别为0.77%,0.71%。3批样品中大黄素的含量分别为0.159 mg/g、0.161 mg/g、0.170 mg/g,大黄素甲醚的含量分别为0.055 mg/g、0.064 mg/g、0.072 mg/g。结论本方法准确、专属性好、重复性好,可作为制首乌无糖颗粒质量控制方法之一。

补正续骨泡腾颗粒质量标准研究

目的:建立补正续骨泡腾颗粒的质量标准。方法:采用显微鉴别法对方中鹿茸进行显微定性鉴别,采用薄层色谱法对方中制何首乌、合欢花、骨碎补进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定续断中川续断皂苷Ⅵ含量。结果:薄层色谱斑点清晰,阴性液无干扰,显微特征明显,川续断皂苷Ⅵ在3.465~20.79μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.8%。结论:该方法准确,专属性强,重复性好,可以作为控制补正续骨泡腾颗粒质量的方法。

脑康冲剂质量标准的研究

对脑康冲剂的质量标准及处方中的黄芪、何首乌、枳壳、白芍进行了薄层鉴别，对方中主药黄芪中黄芪甲甙的含量进行了薄层扫描测定，方法简便，结果可靠。

补肝益肾颗粒质量标准研究

目的建立补肝益肾颗粒质量标准。方法采用TLC法对方中淫羊藿、白芍及制何首乌进行定性鉴别;HPLC法同时对淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ进行定量测定,使用phenomenex Luna Omega Polar C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-水梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:25℃,检测波长:212 nm,进样量:10μL。结果薄层色谱鉴别斑点清晰,专属性强,无干扰;淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ分别在0.3184~10.1900μg、0.1422~4.5500μg范围内,进样量与峰面积线性关系良好(r 1=0.9999,r 2=0.9999),平均加样回收率分别为99.82%、100.70%,RSD值为1.09%、0.88%(n=9)。结论本法简便、准确、重复性好,可为补肝益肾颗粒的质量控制提供实验依据。

制何首乌配方颗粒需氧菌总数测定的不确定度评定

目的:对制何首乌配方颗粒中需氧菌总数测定的不确定度进行评定。方法:采用《中国药典》2020年版四部非无菌产品微生物限度检查法测定制何首乌配方颗粒中的需氧菌总数,通过建立数学模型,识别不确定度来源,对不确定度来源进行分析,量化每一个分量,合成测定结果的相对标准不确定度及扩展不确定度。结果:扩展不确定度为U=0.0826 log10(cfu/g),结果对数值取值区间为(2.4426±0.0826)log10(cfu/g),取反对数取值区间则为(230,340)cfu/g,k=2。结论:电子天平引入的不确定度贡献较小,供试液制备和稀释液加样、重复性实验引入的不确定度贡献较大。

壮骨止痛冲剂质量标准的初步研究

目的 :建立壮骨止痛冲剂的质量标准。方法 :采用薄层色谱法 (TL C)对本制剂中元胡进行鉴别 ,采用系数倍率法对本制剂中何首乌游离总蒽醌进行含量测定。结果 :元胡采用相应的前处理方法和层析条件 ,供试品溶液与对照药材溶液在相应位置上有相同斑点。含量测定在线性范围内 r=0 .9996 ,回收率为 96 .0 %,RSD =3.9%。结论 :TL C法可用于壮骨止痛冲剂中元胡的鉴别 ,系数倍率法可用于壮骨止痛冲剂中何首乌游离总蒽醌的含量测定 ,方法准确、灵敏 ,专属性好。

何首乌不同炮制品抗氧化作用的研究

通过溴代苯致小鼠肝中毒实验,观察何首乌3种炮制品的抗氧化作用。方法:将小鼠按性别和体重随机分为12组,每组10只。各组动物每日按剂量灌胃给药一次,空白对照及模型组给予蒸馏水20mL/kg,连续14d。末次灌胃后30min,除空白对照组外,各组动物均按10mL/kg的剂量灌胃给予0.3mol/L的溴代苯油溶液。20h后处死,取肝加试剂制成匀浆液,按试剂盒方法测定肝组织中的SOD及MDA含量。结果:何首乌三样品按小鼠1、2、5g/kg三个不同剂量连续灌胃14d,对溴代苯诱发的小鼠肝损伤有不同程度的保护作用,可使肝组织中的SOD明显增加,5g剂量组的SOD含量为分别为何首乌生品(1.20±0.19)**U/mg,制何首乌为(1.08±0.13)**U/mg,制何首乌颗粒为(0.95±0.15)*U/mg;MDA明显下降,5g时MDA含量为:何首乌生品(121.11±17.92)**nmol/g,制何首乌为(139.72±20.37)**nmol/g,制何首乌颗粒为(142.56±22.60)*nmol/g(与模型组相比:*P<0.05,**P<0.01),表明三种炮制品均有抗氧化作用。结论:何首乌同等剂量下,生、熟品作用相当,颗粒剂作用稍弱。因此何首乌炮制时只要消除泻下作用即可,尽可能留其有效成分,增强其抗衰老作用。

首乌及其复方对平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的：观察首乌、洁脉冲剂及其组分对平滑肌细胞体外药敏效应。方法：从“复方－单味药－活性成分”对比分析入手，采用ＭＴＴ法测定首乌、洁脉冲剂、大黄素及大黄酸对平滑肌细胞增殖抑制作用。结果：首乌、洁脉冲剂与大黄素的有效剂量范围为其血药浓度的２５～１２５倍；大黄酸有效剂量范围为其血药浓度的１２．５～７５倍。洁脉冲剂、大黄素对平滑肌细胞增殖抑制率分别为２１．５４％～９６．８９％，２４．６％～９４．５８％；而首乌、大黄酸效果较差，抑制率分别为１６．５６％～８６．５７％，１４．３８％～８５．６４％。并且随作用时间延长、药物浓度的增加抑制率都有一定的提高。结论：本研究为首乌、洁泳冲剂、大黄素及大黄酸的医学应用提供了理论依据，为中药复方药效学研究提供了一种可借鉴的方法。

乌鳖颗粒定性定量方法研究

目的:建立乌鳖颗粒的定性定量方法。方法:采用薄层色谱法对处方中的制何首乌、白术、续断和枸杞子进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和川续断皂苷Ⅵ含量。HPLC色谱条件:采用Hedera ODS-3 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长212 nm,柱温30℃;结果:薄层色谱鉴别方法专属性强,阴性对照无干扰;含量测定结果表明,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.04462～0.4462μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率为97.33%(RSD=1.3%,n=6);川续断皂苷Ⅵ进样量在0.6636～6.636μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率为100.3%(RSD=2.7%,n=6)。结论:本方法简便、准确,重复性好,可用于乌鳖颗粒的质量控制。

何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱及化学成分归属

目的:建立何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱,并对其主要的共有峰进行成分归属,为配方颗粒的快速质量评价提供方法。方法:采用超高效液相色谱法,以Agilent Eclipse Plus C_(18) RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.4 m L·min^(-1),柱温30℃,同时采用飞行时间质谱法对指纹图谱中的主要化学成分进行归属。结果:建立了何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱,确定了12个共有峰,并对其中5个共有峰进行了指认,各何首乌配方颗粒样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均>0.9。结论:该方法简单、准确、快速、重复性好,能有效地对何首乌配方颗粒的质量进行快速评价。