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超抗原SEA对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响 被引量:3
1
作者 黄杨 宋祖军 +6 位作者 张秀敏 葛伟 司少艳 胡沛臻 李侠 郝路 隋延仿 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期229-231,共3页
目的观察超抗原SEA体外对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响。方法SEA体外诱导小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞、T细胞、B细胞的增殖能力,用流式细胞术检测淋巴细胞膜表型的变化,并测定脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的水平... 目的观察超抗原SEA体外对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响。方法SEA体外诱导小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞、T细胞、B细胞的增殖能力,用流式细胞术检测淋巴细胞膜表型的变化,并测定脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的水平。结果不同浓度SEA诱导脾淋巴细胞的增殖能力不同,在1~4d内的增殖变化也不完全一样,SEA浓度为103ng/mL时,脾淋巴细胞的活化和增殖能力最强。SEA对T细胞(无APC)和B细胞的增殖无明显影响。细胞培养上清中IL-2和INF-γ的水平显著升高,IL-4和IL-10含量低。结论在APC递呈作用下,SEA能显著诱导初始CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化和增殖,促使TH0细胞向TH1细胞分化,分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子。 展开更多
关键词 超抗原 超抗原sea 淋巴细胞 活化 增殖
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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定 被引量:3
2
作者 郝淮杰 郑玉玲 +2 位作者 余多慰 马茹 姜永强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期269-272,共4页
目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hip... 目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。 展开更多
关键词 单链二硫键稳定抗体 产量 超抗原 sea(D227A) 稳定性
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超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定 被引量:5
3
作者 宋宏萍 隋延仿 +3 位作者 叶菁 李增山 陈广生 张秀敏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期357-360,共4页
目的 构建SEA(D2 2 7A)基因的原核表达载体 ,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法 采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使SEA基因第 6 80位碱基由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7... 目的 构建SEA(D2 2 7A)基因的原核表达载体 ,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法 采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使SEA基因第 6 80位碱基由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由天冬氨酸 (GAT)突变为丙氨酸 (GCT) ,构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌DH5α中原核表达 ,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定。结果 构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致 ;成功地构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,通过IPTG诱导、GSTrapFF柱分离纯化及凝血酶切除GST后 ,得到Mr 为 2 70 0 0的目的蛋白。淋巴细胞增殖实验显示 ,10 0ng mL重组SEA(D2 2 7A)可明显刺激淋巴细胞增殖。结论 成功地构建了SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,所得重组SEA(D2 2 7A)能够刺激淋巴细胞增殖 ,但作用与野生型SEA相比较温和。该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 点突变
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超抗原SEA对外周血T细胞的活化作用 被引量:8
4
作者 许桂莲 朱锡华 杨劲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期85-87,104,共4页
目的研究超抗原 SEA对外周血 T淋巴细胞的活化作用。方法用 SEA刺激人外周血 T淋巴细胞 ,观察细胞的 DNA合成、形态、IL - 2的产生、细胞表型以及凋亡情况。结果 SEA对 T淋巴细胞的促增殖作用在浓度为 10 0 ng/m L最强 ,在第 2、3d达高... 目的研究超抗原 SEA对外周血 T淋巴细胞的活化作用。方法用 SEA刺激人外周血 T淋巴细胞 ,观察细胞的 DNA合成、形态、IL - 2的产生、细胞表型以及凋亡情况。结果 SEA对 T淋巴细胞的促增殖作用在浓度为 10 0 ng/m L最强 ,在第 2、3d达高峰 ;首次或多次刺激不改变 T淋巴细胞的 CD4+ CD8+ 表型 ;首次刺激 2 4h内未见明显凋亡 ;但再次刺激 2 4h内即有明显凋亡 ;加入 rh IL - 2 2 d凋亡现象消失。结论超抗原 SEA对 T淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、作用时间有关 ,并且SEA首次或多次刺激对 CD4+ T淋巴细胞和 CD8+ 展开更多
关键词 sea 超抗原 T淋巴细胞 活化作用
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超抗原SEA诱导T细胞失能体外实验模型的建立 被引量:3
5
作者 许桂莲 朱锡华 杨劲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期305-307,311,共4页
目的建立超抗原诱导 T细胞失能的体外实验模型。方法 SEA刺激人外周血淋巴细胞 ,再加入外源性的 r IL-2维持 ,建立短期 SEA反应性 T细胞系 ;进行 Ficoll- Hypaque密度梯度离心获取经 SEA多次刺激过 SEA反应性 T细胞 ;加入处理过的 PBMC... 目的建立超抗原诱导 T细胞失能的体外实验模型。方法 SEA刺激人外周血淋巴细胞 ,再加入外源性的 r IL-2维持 ,建立短期 SEA反应性 T细胞系 ;进行 Ficoll- Hypaque密度梯度离心获取经 SEA多次刺激过 SEA反应性 T细胞 ;加入处理过的 PBMC作 APCs,建立超抗原 SEA诱导 T细胞的活化组和失能组。结果 SEA和 r IL - 2共同作用可得到静息 SEA反应性 T细胞系 ;SEA反复刺激使 T细胞处于一低反应状态 ,与活化组相比 ,其 DNA合成能力明显下降 ,IL - 2分泌显著减少 ,静息一段时间后 ,其增殖能力慢慢恢复。结论超抗原 SEA多次刺激诱导 SEA反应性 T细胞处于失能状态。 展开更多
关键词 sea 超抗原 T淋巴细胞 失能 体外实验
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点突变SEA(D227A)的基因构建、原核表达与鉴定 被引量:1
6
作者 叶菁 隋延仿 +3 位作者 陈广生 李增山 张秀敏 曹云新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期521-524,共4页
目的 :进行点突变的SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体的构建 ,并进行表达、分离纯化与鉴定。方法 :采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使得到的SEA基因 75 2位碱基突变由A突变为C ,致使SEA成熟蛋... 目的 :进行点突变的SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体的构建 ,并进行表达、分离纯化与鉴定。方法 :采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使得到的SEA基因 75 2位碱基突变由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由D(GAT)突变为A(GCT) ,构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中进行原核表达 ,再通过Westernblot进行鉴定。结果 :构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致。成功地构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,通过IPTG诱导得到分子量约为 32kD的蛋白 ,Westernblot显示其能够与抗SEA的单克隆抗体特异性结合 ,最后采用Ni2 + NTA柱进行分离纯化。结论 :成功地构建SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 点突变
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超抗原SEA对两种小鼠脾脏淋巴细胞的不同活化作用的探讨
7
作者 余德厚 陆洪光 +3 位作者 程波 吴承龙 汪宇 牟霞 《贵州医药》 CAS 2006年第4期295-299,共5页
目的研究超抗原SEA(葡萄球菌肠毒素A)对C57BL/6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋巴细胞的不同活化作用。方法淋巴细胞转化实验采用MTT法;细胞因子IL-2检测采用酶联免疫吸附测定法(双抗夹心法)。结果超抗原SEA对C57BL/6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋... 目的研究超抗原SEA(葡萄球菌肠毒素A)对C57BL/6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋巴细胞的不同活化作用。方法淋巴细胞转化实验采用MTT法;细胞因子IL-2检测采用酶联免疫吸附测定法(双抗夹心法)。结果超抗原SEA对C57BL/6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋巴细胞均有明显的促增殖作用,但对C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞活化作用强于对昆明种小鼠。结论超抗原SEA对体外小鼠脾脏淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、刺激时间及小鼠的种类有关。 展开更多
关键词 超抗原 葡萄球菌肠毒素A 淋巴细胞转化
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超抗原分子SEA在肝癌细胞的表达和HLA-Ⅰ分子递呈
8
作者 李增山 隋延仿 +2 位作者 姜永强 雷祚荣 尚继栋 《陕西肿瘤医学》 2001年第1期3-5,13,共4页
目的 将超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxinA ,SEA)分子转入肝癌细胞以增强其免疫原性 ,开辟肝癌免疫排斥的新途径。方法 从产SEA标准菌株中获得SEA基因全长片段 ,构建SEA逆转录真核表达载体 ,通过病毒包装和滴度测定 ... 目的 将超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxinA ,SEA)分子转入肝癌细胞以增强其免疫原性 ,开辟肝癌免疫排斥的新途径。方法 从产SEA标准菌株中获得SEA基因全长片段 ,构建SEA逆转录真核表达载体 ,通过病毒包装和滴度测定 ,最后转导肝癌细胞 ,并进行T细胞杀伤实验 ,同时利用抗体阻断的方法研究递呈途径。结果 成功的获得了表达SEA人肝癌细胞株HHCSEA。结果显示微量表达的SEA蛋白即可引发高效的免疫活性。将细胞表面的HLA I分子利用抗体阻断后 ,杀伤活性明显降低。结论 肝癌细胞表达的SEA分子具有较高的免疫激活能力 ,且有可能主要通过HLA Ⅰ分子递呈。 展开更多
关键词 肝细胞癌 超抗原 细胞毒 葡萄球菌肠毒素A 免疫排斥反应
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Anti-tumor Effect and Mechanism of SEA-Fab’ Coupled Protein on Gastric Tumor
9
作者 舒晓刚 王国斌 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2005年第5期549-551,共3页
Summary: The anti-tumor effect and mechanism of SEA-Fab' coupled protein on gastric tumor was studied. The target cell Walke-256 was treated with SEA-Fab' synthesized chemically or SEA respectively for 24 h, 36 h o... Summary: The anti-tumor effect and mechanism of SEA-Fab' coupled protein on gastric tumor was studied. The target cell Walke-256 was treated with SEA-Fab' synthesized chemically or SEA respectively for 24 h, 36 h or 72 h. PBMC+Walke-256 cells served as controls. The apoptotic index of SEA-Fab' against effector cells was detected. In the mouse gastric cancer models (n=60), SEA-Fab', SEA and normal saline was injected in experimental group, SEA group and control group respectively. The occurrence and weight of tumor was observed. The results showed that the apoptotic index was significantly higher in the SEA-Fab' (34.6 -68.9%) and SEA group (15.5-31.9%) than in PBMC+Walker-256 group (5.5%-12.8%) with the difference being significant (P〈0.01). And there was significant difference between SEA-Fab' group and SEA group (P〈0.01). The tumor weight in SEA-Fab', SEA and control groups was 3.6±0.53 g, 0. 78±0. 26 g and 0.49±0. 17 g respectively with the difference being statistically significant between the SEA-Fab' group, SEA group and the control group (P〈0.01). In the SEA-Fab's and SEA groups, there were CD4^+ T and CD8^+ T cell infiltrates, but in the cotnrol group, no or few T lymphocytes were seen in the mouse tumor tissue. It was concluded that SEA-Fab' was more effective to activate T lymphocytes to kill the tumor cells than SEA used alone. It was feasibility by using the monoclonal antibody as carrier to perform the targeted Immunotherapy of gatric tumor. 展开更多
关键词 superantigen sea-Fab' gastric tumor APOPTOSIS anti-tumor effect
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SEA在抗癌药物中的应用及其研究进展
10
作者 王雪 贾宇 +1 位作者 樊春媛 郎晓磊 《河北化工》 2012年第8期9-10,38,共3页
超抗原是一种强大的T细胞激活剂,金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)是由葡萄球菌产生的一种外毒素,为目前研究最广泛的一种超抗原,也是唯一进入癌症治疗临床试验的超抗原。介绍了SEA在抗癌药物中的应用及其研究进展。
关键词 sea 超抗原 免疫 癌细胞
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葡萄球菌肠毒素A体内诱导小鼠T细胞增殖的实验研究 被引量:7
11
作者 黄杨 尹文 +5 位作者 张秀敏 司少艳 葛伟 胡沛臻 李侠 隋延仿 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第1期28-31,共4页
目的:观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)体内对小鼠脾T淋巴细胞增殖的作用规律。方法:采用SEA不同的注射方式和注射剂量,对小鼠脾T淋巴细胞进行体内单次诱导,用流式细胞术检测CD3的表达和测定胞内、外IL-2水平。结... 目的:观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)体内对小鼠脾T淋巴细胞增殖的作用规律。方法:采用SEA不同的注射方式和注射剂量,对小鼠脾T淋巴细胞进行体内单次诱导,用流式细胞术检测CD3的表达和测定胞内、外IL-2水平。结果:四种注射方式均能刺激体内T细胞的增殖,但静脉和腹腔注射对T细胞的影响最显著。根据对T细胞刺激程度和效力维持时间,选择腹腔注射为最佳注射途径。SEA剂量在5-15μg范围内均能促进CD3表达显著上升,最佳剂量为10μg。SEA体内注射后能诱导IL-2的大量合成和释放,促进T细胞的增殖。结论:体内SEA刺激对T细胞具有强大的促增殖作用,并且受SEA注射途径和剂量的影响。 展开更多
关键词 超抗原 sea T淋巴细胞 增殖
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金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆 被引量:2
12
作者 时成波 吕安国 +3 位作者 吴文芳 杨立泉 冯家勋 柏学亮 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期7-8,16,共3页
利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约 80 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pUC19 T载体上并转化E .coliDH5α菌株。重组质粒的测序结果表明 ,克隆到了sea基因 ,它含有 774bp的阅读框架 (包括N端 72bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献... 利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约 80 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pUC19 T载体上并转化E .coliDH5α菌株。重组质粒的测序结果表明 ,克隆到了sea基因 ,它含有 774bp的阅读框架 (包括N端 72bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献报道完全一致。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因克隆 sea 超抗原
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超抗原诱导T淋巴细胞增殖和无能的体外研究 被引量:1
13
作者 黄杨 张秀敏 +4 位作者 司少艳 葛伟 胡沛臻 李侠 隋延仿 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第4期466-468,共3页
目的:研究超抗原SEA在诱导T细胞增殖和无能产生中的规律和作用。方法:SEA在体外对小鼠脾淋巴细胞进行单次和多次诱导,测定其增殖能力,CD4、CD8、CD69变化和胞内、外IL-2的表达。并测定无能T细胞对加大SEA剂量和外源性IL-2的应答反应。结... 目的:研究超抗原SEA在诱导T细胞增殖和无能产生中的规律和作用。方法:SEA在体外对小鼠脾淋巴细胞进行单次和多次诱导,测定其增殖能力,CD4、CD8、CD69变化和胞内、外IL-2的表达。并测定无能T细胞对加大SEA剂量和外源性IL-2的应答反应。结果:1×SEA组,SEA显著促进T细胞活化和增殖,胞内胞外IL-2均快速增加。2×SEA组,SEA能诱导T细胞继续增殖,但增殖指数的绝对值和胞内胞外的IL-2明显下降。3×SEA组,细胞无增殖,胞内胞外几乎测不到IL-2。并且加大SEA剂量不能改变细胞的无能状态,外源性IL-2只能部分逆转T细胞无能。结论:SEA对初始CD4+T细胞和CD8+T细胞均能诱导活化和增殖,但受浓度限制;SEA三次刺激T细胞诱导无能细胞形成;T细胞无反应性不受SEA剂量限制,T细胞受抗原刺激不能产生IL-2不是无能状态产生的唯一原因。 展开更多
关键词 超抗原 sea 免疫耐受 无能
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超抗原葡萄球菌肠毒素A在体外激活淋巴细胞抗成骨肉瘤的作用 被引量:1
14
作者 刘明 范清宇 +1 位作者 郝新保 何大为 《第四军医大学学报》 1999年第12期1062-1064,共3页
探讨超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)对成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞的增殖及杀伤活性的调节作用.方法:分离成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞,体外分别经PHA,SEA和SEA加IL-2刺激后,‘H-TdR参入法检测淋巴细胞的增殖水平,MTT间接比色法... 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)对成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞的增殖及杀伤活性的调节作用.方法:分离成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞,体外分别经PHA,SEA和SEA加IL-2刺激后,‘H-TdR参入法检测淋巴细胞的增殖水平,MTT间接比色法检测活化的淋巴细胞对人成骨肉瘤细胞(SOSP-96o7)的杀伤活性.结果:淋巴细胞经SEA刺激24h后增殖和杀伤活性明显增强且呈剂量依赖性(P<oO5),增殖活性在第4天达高峰,杀伤活性在第3天达高峰,然后明显下降.但事先加入IL-2可避免这一现象,同时IL-2和SEA对淋巴细胞的杀伤活性具有协同作用.结论:SEA辅以IL-2能高效激活成骨肉瘤患者淋巴细胞的功能,有望成为成骨肉瘤免疫治疗的辅助药物. 展开更多
关键词 超抗原 葡萄球菌 肠毒素A 成骨肉瘤
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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对T淋巴细胞分化的作用 被引量:4
15
作者 邓晓芳 曾波航 +5 位作者 胡伟民 陈静琦 黄慧 孙建聪 彭燕 李冰 《广州医学院学报》 2006年第3期6-8,共3页
目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(stapylococoal enterotoxin A,SEA)对T淋巴细胞亚群Tc/Th细胞增殖的不同影响。方法:以SEA刺激脐带血单个核细胞(CBMCs),以3H-TdR掺入法及ELISA法检测Tc/Th细胞对SEA刺激的反应。结果:经SEA刺激后,... 目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(stapylococoal enterotoxin A,SEA)对T淋巴细胞亚群Tc/Th细胞增殖的不同影响。方法:以SEA刺激脐带血单个核细胞(CBMCs),以3H-TdR掺入法及ELISA法检测Tc/Th细胞对SEA刺激的反应。结果:经SEA刺激后,CBMCs中的Tc0/Th0增殖并向Ⅰ型或Ⅱ型分化。在较低浓度SEA刺激时,CBMCs分泌IL-10的比例高于γ-IFN;而经较高浓度SEA刺激后,CBMC分泌γ-IFN的比例高于IL-10。结论:SEA在较低浓度刺激时,诱导T淋巴细胞向Tc1/Th1的分化;而较高浓度时,在促进T细胞增殖的同时,可以诱导T细胞向Tc2/Th2的分化。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素A 超抗原 T淋巴细胞 细胞分化 胎儿脐带血 体外实验
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葡萄球菌肠毒素A诱导小鼠体内T细胞无能过程中CD28/CTLA-4的变化
16
作者 黄杨 尹文 +5 位作者 张秀敏 司少艳 葛伟 胡沛臻 李侠 隋延仿 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期844-846,共3页
目的在葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导小鼠体内T细胞无能的过程中,观察CD28和CTLA-4的变化规律及相互关系。方法单次(1×SEA组,n=4)或多次(2×SEA组,n=4;3×SEA组,n=4)向小鼠腹腔注射SEA,每次注射间隔3d,分别于末次注射后的第1、... 目的在葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导小鼠体内T细胞无能的过程中,观察CD28和CTLA-4的变化规律及相互关系。方法单次(1×SEA组,n=4)或多次(2×SEA组,n=4;3×SEA组,n=4)向小鼠腹腔注射SEA,每次注射间隔3d,分别于末次注射后的第1、3、7、14天,将小鼠处死,制备小鼠脾淋巴细胞。通过流式细胞仪检测细胞膜表达CD28和CTLA-4、细胞内表达CTLA-4和IL-2的阳性率。结果1×SEA组,细胞膜CD28和细胞内IL-2的表达显著上升;而CTLA-4在细胞内和细胞膜表面的表达均降低且无明显变化;2×SEA组CD28和IL-2的表达稍有上升;CTLA-4在细胞内和细胞膜表面的表达均明显增加,胞内CTLA-4的增加尤为显著。3×SEA组,细胞膜CD28、细胞膜和细胞内CTLA-4的表达呈下降趋势,细胞内IL-2在第7天已经检测不到。结论SEA初次诱导小鼠脾淋巴细胞时,能显著促进T细胞的活化;经SEA多次(3次)刺激可诱导T细胞的无反应性。在无能的形成过程中,IL-2产生减少与CD28表达下调可能有着密切联系;CTLA-4的表达上调有利于无能的诱导,但可能不参与无能的维持。 展开更多
关键词 超抗原 葡萄球菌肠毒素A(sea) CD28 CTLA-4 无能
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葡萄球菌肠毒素A的细胞增殖诱导能力
17
作者 王颖 赵铁华 +1 位作者 邓淑华 宋鸿儒 《承德医学院学报》 2000年第3期27-29,共3页
目的 :观察葡萄球菌肠毒素 A的细胞增殖诱导能力及其抗肿瘤作用。方法 :MTT微量酶反应比色法。结果 :纯化 SEA在 1 0 - 12 ~ 1 0 - 5g/ml浓度范围对体外培养的 BALB/C鼠脾细胞表现了细胞增殖诱导能力 ,并呈剂量依赖关系 ,其中 1 0 - 7... 目的 :观察葡萄球菌肠毒素 A的细胞增殖诱导能力及其抗肿瘤作用。方法 :MTT微量酶反应比色法。结果 :纯化 SEA在 1 0 - 12 ~ 1 0 - 5g/ml浓度范围对体外培养的 BALB/C鼠脾细胞表现了细胞增殖诱导能力 ,并呈剂量依赖关系 ,其中 1 0 - 7~ 1 0 - 5g/ml SEA的作用强于最适量 (2 5μg/ml) PHA。在 E/T为 5~ 2 0∶ 1条件下 ,1 0 - 5g/ml SEA活化 48小时的 BALB/C鼠脾细胞对 Yac- 1细胞的杀伤活性高于 NK细胞 ,但 SEA未能增强 BALB/C鼠脾细胞对 B16细胞的杀伤活性。结论 :葡萄球菌肠毒素 A具有较强的细胞增殖诱导能力 。 展开更多
关键词 sea 超抗原 肿瘤 免疫治疗
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双调控溶瘤腺病毒介导超抗原SEA基因靶向膀胱肿瘤表达 被引量:5
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作者 胡建鹏 郝林 +5 位作者 张培影 范涛 董秉政 贺厚光 贡震 韩从辉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1131-1133,共3页
目的 构建携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外实验观察SEA基因的表达及其刺激淋巴细胞对肿瘤的杀伤功能.方法 构建一种由端粒酶(hTERT)和缺氧反应元件(HIF)双重启动的携带SEA的选择性增殖腺病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR... 目的 构建携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外实验观察SEA基因的表达及其刺激淋巴细胞对肿瘤的杀伤功能.方法 构建一种由端粒酶(hTERT)和缺氧反应元件(HIF)双重启动的携带SEA的选择性增殖腺病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SEA在肿瘤细胞内mRNA表达,免疫荧光定位SEA表达于肿瘤细胞,Western blot测定蛋白表达,显微镜下动态观测淋巴细胞与肿瘤细胞共培养.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4分泌.结果 琼脂糖电泳252 bp处可见清晰条带;免疫荧光及Western blot用考马斯亮蓝染色显示在27 kDa附近可见蛋白清晰表达;淋巴细胞与肿瘤细胞共培养12、24、48 h实验组肿瘤细胞明显少于对照组,ELISA检测IL-4分泌量实验组均高于对照组(t=2.585 P<0.05).结论 携带SEA基因的选择性腺病毒成功构建并表达目的基因,证明对肿瘤细胞的杀伤作用. 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 溶瘤腺病毒 超抗原sea
原文传递
装载超抗原SEA基因的由前列腺特异性抗原和端粒酶逆转录酶启动子双调控靶向前列腺癌的溶瘤腺病毒载体的构建 被引量:3
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作者 韩从辉 郝林 +5 位作者 胡建鹏 王涛 贡震 贺厚光 董秉政 张培影 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期330-332,共3页
目的构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA)基因的由前列腺特异性抗原(PSA)启动子及端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子双调控的特异性增殖溶瘤腺病毒SG504-SEA。方法从前列腺癌组织基因组DNA中获得522bp大小的PSA启动子序列,将PSA... 目的构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA)基因的由前列腺特异性抗原(PSA)启动子及端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子双调控的特异性增殖溶瘤腺病毒SG504-SEA。方法从前列腺癌组织基因组DNA中获得522bp大小的PSA启动子序列,将PSA启动子克隆到由hTERT启动子调控的特异性增殖溶瘤腺病毒载体SG502中,得到靶向前列腺癌细胞的双调控溶瘤腺病毒载体SG504。将已构建好的含有771bp大小SEA基因片段的病毒骨架质粒PPE3-ccdb—SEA与SGSIM用Lipofectamine 2000共转染至293细胞。共转染后9—14d出现病毒空斑,经过3次病毒空斑纯化,经鉴定正确的腺病毒命名为SG504-SEA,即携带SEA基因的双调控靶向前列腺癌的特异性溶瘤腺病毒。结果经聚合酶链反应(PCR)及酶切鉴定,SEA基因成功克隆到病毒载体中,可以表达SEA基因,且病毒滴度为2.0×10^10pfu/ml。结论成功构建表达超抗原SEA基因的双调控选择增殖型溶瘤腺病毒SG504-SEA。 展开更多
关键词 前列腺癌 前列腺特异性抗原 端粒酶逆转录酶 超抗原sea 溶瘤腺病毒
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CTLA-4与超抗原对SEA诱导T细胞无能的关联研究 被引量:1
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作者 许桂莲 朱锡华 +1 位作者 杨劲 黄云辉 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期319-321,共3页
在建立超抗原SEA诱导T细胞无能的体外模型基础上 ,观察了无能T细胞受SEA刺激时共刺激分子CD2 8和CTLA 4的表达。结果发现 ,与活化组相比 ,在SEA加入后的不同时相点无能T细胞上CD2 8的表达都是正常的 ,而CTLA 4分子在SEA加入的第 60小时... 在建立超抗原SEA诱导T细胞无能的体外模型基础上 ,观察了无能T细胞受SEA刺激时共刺激分子CD2 8和CTLA 4的表达。结果发现 ,与活化组相比 ,在SEA加入后的不同时相点无能T细胞上CD2 8的表达都是正常的 ,而CTLA 4分子在SEA加入的第 60小时细胞表面有高水平的表达。这些结果表明 ,超抗原SEA诱导的这种无能状态与CTLA 展开更多
关键词 共刺激分子 CD28 CTLA-4 无能 超抗原sea
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