离子色谱法检测75%异丙醇中阳离子

建立了一种选用高效阳离子交换色谱,抑制型电导检测的方法,分析印刷线路板提取液,即75%异丙醇中常见碱金属和碱土金属的方法。选择的色谱条件是高容量阳离子交换柱IonPacCS12A,手工配置18mmol/L甲烷磺酸,配有连续自动再生微膜抑制器的数字电导检测器进行检测。该方法具有结果准确、方法快速、操作简单、选择性好的特点。方法检出限均低于10μg/L,线性范围均超过两个数量级,线性系数r均可达到0.9998以上。标准加入回收率范围为91%～104%,连续进样重现性RSD<2.40%。

凝胶排阻色谱法测定乳酸-羟基乙酸共聚物(25:75)相对分子质量及其分布

目的建立乳酸-羟基乙酸共聚物(25:75)(PLGA)相对分子质量(Mr)及其分布的测定方法。方法采用TSK gel G3000HHR色谱柱,以四氢呋喃为流动相,流速1.0mL/min,柱温40℃,示差折光检测器。结果凝胶排阻色谱法测定PLGA Mr及其分布系数,有良好的线性、准确性及重复性。结论此法简便快速,结果准确,重复性好,可作为PLGA Mr及其分布的测定方法。

山羊胎盘小肽的分离及对小鼠抗氧化能力的影响

本文分离并初步鉴定山羊胎盘小肽,探讨各小肽对小鼠抗氧化能力的影响。采用超滤法制得山羊胎盘小肽的粗提物(Mr≤10 kDa),经Superdex-75层析分离,Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳初步鉴定,分离的各种小肽及粗提物按低中高剂量分别腹腔注射小鼠,每天1次持续1周,测小鼠血清中SOD和MDA的含量。结果表明:Superdex-75层析得到4个组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,电泳显示其分子量分别为10.139、8.166、7.447、6.761 KDa,试验小鼠血清检测显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的SOD和MDA含量与对照组没有显著差异(P(0.05),Ⅳ和粗提物能提高SOD含量和降低MDA含量,不过低剂量组与对照组没有显著差异(P(0.05),中高剂量组有显著差异(P(0.05),呈现剂量相关性,效果最明显的是粗提物,不过粗提物与Ⅳ没有显著差异(P(0.05)Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳显示,Superdex-75层析可以初步提纯山羊胎盘小肽;分离的小肽和粗提物进行动物试验,表明小肽Ⅳ和粗提物对小鼠具有抗氧化作用。

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于10kD的组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积百分比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。将手术侧样品经交联葡聚精G-75凝胶层析，得到两个洗脱峰．第一峰洗脱液有促进体外培养的背根节神经元存活及其突起生长的作用，其电泳分析显示4条主带，分子量在40～80kD之间．实验结果提示部分去传入纤维支配的脊髓后角组织含有神经营养活性物质，该物质的分子量约在40～78kD之间．

纹状体源性神经营养因子的分离纯化和生物鉴定

纹状体是中脑黑质多巴胺神经元的主要靶组织，我们先前的研究曾指出：纹状体提取液能增强体外培养的中脑黑质神经元的存活和发育。本研究是在此基础上进一步应用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、反相高效液相色谱（Ｒ－ＨＰＬＣ）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等的分析，结合生物鉴定，从纹状体提取液中分离出纯化的活性因子——纹状体源性神经营养因子。该因子的分子量为１１．５ｋＤ，等电点为９．３９，它能促进体外培养的１４ｄ龄大鼠胚胎中脑黑质神经元的存活和神经突起的生长，以及对外源性多巴胺的摄取，其作用具有量依赖性关系。

凝胶过滤及离子交换层析法纯化玉米CuZn-SOD的研究

用葡聚糖（Sephadex G-75）凝胶过滤及纤维素（DEAE-32）离子交换层析法分离纯化玉米CuZn- SOD，并对其部分理化性质进行了测定．结果表明，玉米CuZn-SOD具有与其它来源的CuZn-SOD相似的性质，即最大吸收峰为260nm，分子量为33,600道尔顿，分子中含有17种289个氨基酸残基，不含色氨酸，N-末端氨基酸为丙氨酸，1分子酶中含2个铜原子和2个锌原子；电泳分析显示，蛋白质谱带和酶活性谱带数目相同，均为两条．

心室成纤维细胞分泌心肌营养活性蛋白的分离提纯及其作用

收集FCGM,用0.2μm微孔滤膜除去细胞碎片,再经Diaflo-YM-10滤膜超滤浓缩,截留分子量大于10 KD的FCGM,行Sephadex-G75凝胶层析,得到Ⅰ、Ⅱ两个洗脱峰。经生物学鉴定,证明Ⅰ峰洗脱液具有明显的心肌营养活性。将凝胶层析Ⅰ峰洗脱液透析、浓缩,行PAK200SW高效液相色谱分析,结果得到五个不同的洗脱峰。经生物学鉴定,第Ⅰ峰具有生物活性。将已行半制备高效液相色谱分析Ⅰ峰洗脱液透析、浓缩,再行高效液相色谱分析,结果获单一峰。用该单一峰物质行SDS-PAGE电泳,以标准蛋白质作对照,可知该单一峰中含有数种物质,分子量在25-35 KD。

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

酱油曲蛋白酶的分离及催化性质研究

酱油曲提取液,经硫酸铵盐析后,用Sephadex G-75柱层析分离,测定收集液中的蛋白含量并用两种方法测定蛋白酶活力。结果显示,福林法酶活力峰出现在蛋白吸收曲线第二高峰,酶解酪蛋白显示的酶活力峰值出现在蛋白含量第三高峰的左肩。表明酱油曲含有不同分子量大小的蛋白酶,分别作用于蛋白质的不同位点,分子量较大(在20 kDa到14.3 kDa之间)的蛋白酶福林法酶活力最高,蛋白酶水解酪蛋白产生的酪氨酸较多;分子量比较小(小于14.3 kDa)的蛋白酶福林法检测酶活力不高,但分解酪蛋白产生的氨基酸态氮(ANN)含量较高,表明该蛋白酶酶解酪蛋白产生酪氨酸之外的其它氨基酸或肽类较多。