胸部开放伤海水浸泡致ALI犬体内SP-A、B的变化

目的探讨胸部开放伤后海水浸泡致急性肺损伤(ALI)肺表面活性蛋白A和B(SP-A、SP-B)的表达变化及机制。方法16只健康犬锐器致开放性气胸后随机均分为实验组(S组)和对照组(C组),每组8只。S组胸腔内灌注海水(35mg/kg)制备ALI动物模型,C组不注入海水。所有犬持续观察6h。采用ELISA法检测灌注前(0h)及灌注后2、4、6h的TNF-α、IL-8,肺组织及血清中SP-A、SP-B含量的变化。于灌注后6h测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中SP-A、SP-B的含量。实验结束后处死动物,留取肺组织块匀浆测定SP-A、SP-B含量,并行肺病理组织学检查,采用免疫组化染色观察SP-B在肺内的表达情况。结果S组海水灌注后4、6h时BALF及血清中IL-8、TNF-α均显著高于C组(P<0.05)。S组BALF及肺组织匀浆中SP-A、SP-B含量明显减低,血清中SP-A(灌注后4、6h)、SP-B(灌注后6h)含量增加(P<0.05),但C组SP-A、SP-B的改变不明显。S组肺内SP-B阳性的Ⅱ型肺泡上皮细胞数量较C组明显减少,SP-B蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论胸部开放伤后海水浸泡致ALI时肺内SP-A、SP-B含量减少,可能是通过肺毛细血管渗漏增多及全身、局部炎症反应增强引起的。

新生儿呼吸窘迫综合征SP-B＋1580基因表达及遗传多态性分析

目的探讨新生儿呼吸窘迫综合征肺表面活性物质蛋白B的基因突变类型及基因型频率。方法在北京地区选择无血缘关系的汉族新生儿RDS 40例作为RDS组,汉族40例其他病例作为对照组,以胎龄与RDS组相匹配。免疫组化检测SP-B蛋白在肺部细胞的表达,Western blot检测SP-B蛋白在肺部和支气管肺泡灌洗液的表达,PCR及基因测序技术分析SP-B+1 580位点的基因突变。结果 RDS组SP-B蛋白表达阳性细胞数显著低于对照组(t=10.191,P<0.01)。RDS组中,8例肺组织和支气管肺泡灌洗液成熟SP-B蛋白表达同时减少,7例仅支气管肺泡灌洗液成熟SP-B蛋白表达减少。2组SP-B基因+1 580位点均存在纯合和杂合基因突变,RDS组占20例,12例为纯合突变(C/C),8例为杂合突变(C/T);对照组占8例,1例为纯合突变(C/C),7例为杂合突变C/T。RDS组C/C基因型频率为30.0%,C/T基因型频率为20.0%;对照组C/C基因型频率为2.5%,C/T基因型频率为1.75%。RDS组C/C基因型频率较对照组显著增高(χ2=11.114,P<0.01)。结论新生儿呼吸窘迫综合征SP-B+1 580位点存在纯合和杂合基因突变两种类型,其纯合突变(C/C)可能参与了RDS的发病。

TTF-1相关蛋白26磷酸化位点对人SP-B基因表达的影响

目的探讨甲状腺转录因子-1相关蛋白26(TAP26)对人肺表面活性蛋白-B(hSP-B)基因表达的调控机制。方法采用定点诱变PCR技术,分别突变掉TAP26的4个磷酸化位点(S48,S66,T219和T167S168),并获得TAP26的4个相应突变体;通过体外细胞共转染和荧光素酶报告基因活性值检测技术分别检测上述4个突变体对hSP-B基因启动子活性的影响。结果与野生型TAP26比较,突变体质粒TAP26(T167S168→V167A168)、TAP26(S48→A48)和TAP26(T219→V219)分别与hSP-B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值无明显差异(P>0.05);而当DNA浓度为400 ng的突变体质粒TAP26(S66→A66)与hSP-B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值则明显降低(P<0.05)。结论突变体质粒TAP26(S66→A66)不能促进hSP-B的表达,从而TAP26的S66蛋白激酶C(PKC)位点是TAP26移位到细胞核的重要部位。

不同成熟度肺脏冲击伤后肺泡灌洗液中SP-B等相关指标时间点差异与意义探讨

目的探索未成熟肺与成熟肺在重度冲击伤后同一时间点肺泡灌洗液中SP-B含量差异,伤后相关指标变化、特点及意义。方法 4周龄幼年健康新西兰白兔[幼年兔组,雌雄不拘40只,体质量(442.10±55.30)g]与24周龄成年健康新西兰白兔[成年兔组,雌雄不拘40只,体质量(2018.15±145.80)g],采用不同驱动压构建实验动物伤情一致的动物模型(驱动压:幼年兔组4.5 MPa,成年兔组4.0 MPa)。在两组伤情一致情况下分别于伤即刻(0 h),2、4、6、12、24、48、72 h检测肺泡灌洗液中SP-B浓度(ELISA法)、观测动物肺大体解剖和光镜病理、测定肺组织含水量和生理指标等。结果两组肺损伤程度较为一致(P>0.05),所有时间点幼年兔组SP-B浓度均低于成年兔组(P<0.05)。幼年兔以肺泡壁断裂和损伤居多,成年兔以肺泡及间质内出血及炎症细胞浸润多见。伤后2 h肺含水率(82.68±0.58 vs 81.06±0.34)、伤后0.5 h血氧饱和度(75.00±18.52 vs 42.20±21.84)均为幼年兔高于成年兔(P<0.05)。伤后6 h(36.92±16.01 vs 60.30±12.09)、12 h(31.42±11.30 vs 46.40±14.15)、24 h(29.48±4.76 vs 35.52±9.77)和48 h(25.70±11.66 vs 37.68±9.11)中性粒细胞百分比则为幼年兔组低于成年兔组(P<0.05)。结论冲击伤后幼年兔未成熟肺与成年兔成熟肺相比肺水肿恢复较快、炎症反应较轻;但SP-B含量较低、合成和分泌功能恢复较慢,可能导致其呼吸功能恢复较慢;从而用以指导不同成熟度肺损伤的临床救治。

结核杆菌耐热抗原对A549细胞分泌SP-B和凋亡的影响

目的探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响。方法用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组1和对照组2)和阳性对照组[脂多糖(LPS)组和姜黄素组]。运用ELISA法检测对照组1、LPS组和实验组1(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h和48 h)培养上清液中的SP-B表达量;使用实时荧光定量PCR法检测对照组1、LPS组和实验组1中基因SFTPB的相对表达量;采用流式细胞技术检测对照组2、姜黄素组和实验组2(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h)中A549细胞的凋亡率。结果刺激诱导相同时间,实验组1的SP-B表达量低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);相同浓度刺激诱导随时间的延长,实验组1中SP-B表达量降低的不显著。相同培养时间,随着Mtb-HAg浓度的增加实验组1表达SP-B的基因SFTPB的相对表达量显著低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);而在相同有效刺激浓度下,其相对表达量随作用时间变化不显著。姜黄素组和实验组2中的A549细胞凋亡率显著高于对照组2(P<0.05)。结论 Mtb-HAg对A549细胞表达SP-B的抑制作用明显,并能诱导A549细胞发生凋亡。

支气管肺发育不良患儿肺表面活性蛋白-B内含子4基因多态性

目的了解支气管肺发育不良（bronchopulmonarydysplasia，BPD）患儿肺表面活性蛋白-B（surfactantproteinB，SPB）内含子4基因多态性的改变。方法对2008年7月至2011年7月在华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护病房收治的45例BPD患儿（BPD组）采用聚合酶链反应技术、琼脂糖凝胶电泳分离以及克隆测序法行SP—B内含子4片段长度多态性检测，并以无肺部疾病的99例患儿为对照（对照组），分析其等位基因[野生等位基因、变异等位基因（插入等位基因和缺失等位基因）]频率和基因型[野生型、变异型（插入型和缺失型）]频率在2组间的差异。研究结果采用两样本均数t检验或X2检验进行统计学分析。结果BPD组与对照组野生等位基因频率分别为83．3％（75／90）和91．9％（18e／198），变异等位基因频率分别为16．7％（15／90，其中插入等位基因8例，缺失等位基因7例）和8．1％（16／198，其中插入等位基因8例，缺失等位基因8例），2组比较差异有统计学意义（x2=4．75，P=0．029）。BPD组基因型频率野生型为71．1％（32例），变异型为28．9％（13例，其中插入型7例，缺失型6例），对照组野生型为85．8％（85例），变异型为14．1％（共14例，插入型6例，缺失型8例），2组比较，差异有统计学意义（x2=4．42，P=0．036）。结论BPD患儿SP—B内含子4基因变异发生率高，提示SP—B内含子4变异可能与BPD遗传易感性相关。

产前应用地塞米松和盐酸氨溴索对早产鼠肺组织表面活性蛋白-B mRNA和甲状腺转录因子-1表达的影响

目的：探讨地塞米松与盐酸氨溴索对早产鼠肺组织中表面活性蛋白（surfactant protein，SP）-B mRNA及甲状腺转录因子（thyroid transcription factor，TTF）-1表达的影响及其作用机制。方法采用清洁级Sprague-Dawley大鼠，16只孕鼠随机分为4组，每组4只：地塞米松2剂组（分别于妊娠第17和18天肌内注射地塞米松0.2 mg/kg）、地塞米松1剂组（妊娠第18天肌内注射地塞米松0.2 mg/kg）、盐酸氨溴索组（分别于妊娠第16、17和18天腹腔注射盐酸氨溴索100 mg/kg）、对照组（分别于妊娠第16、17和18天腹腔注射生理盐水）。4组孕鼠均于妊娠第19天剖宫产取出胎鼠制成早产鼠模型，每组早产鼠中随机选择20只作为研究对象。计算肺重与体重的比值，光镜下观察肺形态发育，并计算肺泡腔表面积与肺泡间隔表面积的比值。采用免疫组织化学检测TTF-1蛋白表达。采用逆转录聚合酶链反应技术检测SP-B mRNA表达。统计学方法采用单因素方差分析、Student-Newman-Keuls法、Pearson积差相关分析。结果（1）地塞米松2剂组、地塞米松1剂组、盐酸氨溴索组和对照组肺重与体重的比值分别为（6.5±0.6）、（7.9±0.8）、（9.5±0.8）与（9.5±0.9） mg/g，4组间比较差异有统计学意义（F=67.69，P〈0.01）；地塞米松2剂组和1剂组均低于对照组（q值分别为17.143和9.143，P值均〈0.01）及盐酸氨溴索组（q值分别为17.143和9.143，P值均〈0.01）；地塞米松2剂组低于1剂组（q=8.000，P〈0.01）。（2）地塞米松2剂组、地塞米松1剂组、盐酸氨溴索组和对照组肺泡腔表面积与肺泡间隔表面积的比值分别为2.19±0.15、1.70±0.18、1.67±0.13与1.08±0.12，4组间比较差异有统计学意义（F=190.85，P〈0.01）；地塞米松2剂组、地塞米松1剂组和盐酸氨溴索组均高于对照组（q值分别为33.639、18.788和17.879，P值均〈0.01）；地塞米松2剂组高于1剂组（q=14.848，P〈0.01）。（3）地塞米松2剂组、地塞米松1剂组、盐酸氨溴索组和对照组肺组织TTF-1蛋白表达分别为0.311±0.018、0.224±0.019、0.196±0.013与0.191±0.018，4组间比较差异有统计学意义（F=211.69，P〈0.01）；地塞米松2剂组和1剂组均高于对照组（q值分别为30.000和8.250，P值均〈0.01）和盐酸氨溴索组（q值分别为28.750和7.000，P〈0.01）。地塞米松2剂组高于地塞米松1剂组（q=21.750，P〈0.01）。（4）地塞米松2剂组、地塞米松1剂组、盐酸氨溴索组和对照组肺组织SP-B mRNA表达分别为1.25±0.13、1.15±0.12、1.10±0.10与1.01±0.12，4组间比较差异有统计学意义（F=14.48，P〈0.01）；地塞米松2剂组、地塞米松1剂组和盐酸氨溴索组均高于对照组（q值分别为9.231、5.385和3.462，P值均〈0.01）；地塞米松2剂组高于盐酸氨溴索组（q=5.769，P〈0.01）和地塞米松1剂组（q=3.846， P〈0.01）。（5）地塞米松2剂组、地塞米松1剂组、对照组的TTF-1表达和SP-B mRNA表达呈正相关（r值分别为0.512、0.597、0.449，P值均〈0.05）。结论盐酸氨溴索具有促进肺组织发育成熟的作用，且对肺重与体重的比值无明显影响，有可能替代糖皮质激素用于预防新生儿呼吸窘迫综合征。

噪声对胎鼠肺SP-B mRNA的影响

目的:探讨噪声对胎鼠肺SP-B mRNA的影响。方法:Wistar孕鼠随机分为90dB组、75dB组和正常组,实验组孕鼠每日接受噪声刺激2h。孕7、14、19、21天采孕鼠血,RIA法测血清皮质酮水平;取孕19、21天胎鼠称重后取肺脏,RT-PCR法测胎肺SP-B mRNA表达水平。结果:随着噪声强度的增加、作用时间的延长,实验组孕鼠的血清皮质酮水平逐渐增加,胎鼠体重逐渐下降,胎肺SP-B mRNA表达水平逐渐下降,各组间比较差别有统计学意义。结论:大鼠孕期噪声暴露后,机体产生的皮质酮水平升高,可以导致胎鼠宫内发育迟缓(IUGR),胎肺发育不成熟,上述不良影响程度与噪声呈强度-效应、时间-效应关系,与机体产生的皮质酮呈浓度-效应关系。

内蒙古地区蒙汉族早产儿支气管肺发育不良与SP-B内含子4基因多态性的相关性研究

目的探讨肺表面活性蛋白B(surfactant proteins-B,SP-B)内含子4基因多态性与早产儿支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的相关性。方法选取2016年1月至2019年1月内蒙古医科大学附属医院新生儿科诊断为BPD的早产儿为病例组,同期同民族非BPD早产儿为对照组,进行前瞻性研究,采用聚合酶链反应扩增基因分析技术分析SP-B内含子4基因型及等位基因分布情况。结果共纳入BPD患儿74例,其中蒙古族30例,汉族44例;对照组134例,其中蒙古族56例,汉族78例。不论蒙古族或汉族患儿,SP-B内含子4基因均可检出野生型和变异型(包括插入型及缺失型)2种基因型。蒙古族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率与对照组相比[36.7%(11/30)比19.6%(11/56),21.7%(13/60)比12.5%(14/112)]差异无统计学意义(P>0.05);汉族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率均高于对照组[31.8%(14/44)比12.8%(10/78),20.5%(18/88)比7.1%(11/156)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论SP-B内含子4基因变异可能与内蒙古地区汉族BPD患儿遗传易感性相关。

血管内皮生长因子及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白B和转化生长因子-β1表达的影响及意义

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞（type Ⅱ alveolar epithelial cell，AECⅡ）表面活性蛋白-B（surfactant protein B，SPB）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）表达的影响及意义。方法原代培养早产鼠AECⅡ，采用实时荧光定量聚合酶链反应技术（real—time quantitative polymerase chain reaction，real-time PCR）、免疫细胞化学染色等方法，观察不同剂量的VEGF（25ng／ml组、50ng／ml组和100ng／ml组）和不同剂量的地塞米松（25nmol／ml组、50nmol／ml组、100nmol／ml组、200nmol／ml组）对AECⅡSP—BmRNA及TGF-β1 mRNA表达的影响。同时设一对照组。采用方差分析或q检验进行统计学分析。结果与对照组相比，25ng／ml VEGF组及25nmol／ml、50nmol／ml、100nmol／ml和200nmol／ml地塞米松各组SP-B mRNA表达水平明显上升（13．500±3．172、3．547±0．690、5．219±0．782、3．493±0．335和3．981±1．133与1．001±0．059，q分别为-5．286、-4．943、-7．228、-9．906、-3．525，P均〈0．05）。25ng／mlVEGF组及50、100、200nmol／ml地塞米松组TGFq]ImRNA表达明显下降（0．451±0．078、0．579±0．019、0．422±0．020和0．769±0．025与1．019±0．226，q分别为4．110、3．356、4．551、1．901，P均〈0．05），其他各组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫细胞化学结果显示，25ng／mlVEGF组及50、100、200nmol／ml地塞米松组AEC11染色阳性率分别为23％、26％、22％和29％；对照组AECⅡ染色阳性率为80％。结论VEGF及地塞米松均有促进SP—B表达的作用，TGF-β1可能对SP—B的表达有负调控作用，VEGF和地塞米松可能是通过调控与TGF-β1有关的调控通路发挥促进SP—B表达的作用。

妊娠期糖尿病大鼠的胎鼠肺结构和肺表面活性蛋白B、C及其调控因子表达

目的 通过对GDM大鼠胎鼠的肺组织结构及肺表面活性蛋白（surfactant proteins,SP）-B、SP-C、甲状腺转录因子（thyroid transcription factor,TTF）-1、多形性腺瘤样因子（pleiomorphic adenoma gene like,PLAGL）-2蛋白表达水平进行研究,探讨GDM大鼠胎鼠肺发育障碍的机制. 方法 清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠构建孕鼠GDM模型,共20只造模成功,对照组为20只正常孕鼠.于妊娠第21天检测孕鼠随机血糖,并行剖宫取胎术,胎鼠计数并称重.透射电子显微镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构.每组随机取60只胎鼠,取肺组织制作360张石蜡切片,随机取100张不连续切片,光镜下观察肺组织形态结构;随机取另外100张不连续切片,免疫组织化学法检测SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白定位及表达.每组取9只胎鼠,蛋白质印迹技术检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-l和PLAGL-2蛋白水平.每组取27只胎鼠,荧光实时定量聚合酶链反应检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的mRNA水平.采用独立样本t检验进行统计学分析. 结果 GDM组孕鼠平均随机血糖值高于对照组[（26.8±2.8）与（4.9±0.5）mmol/L,t=-34.05,P=0.00].GDM组胎鼠平均体重高于对照组[（5.6±0.6）与（5.2±0.5）g,t=-1.97,P=o.03].GDM组与对照组肺泡个数分别为（10.1±1.6）与（12.1±1.3）个,肺泡面积分别为（986.9±5.5）与（1 257.3±5.0） μm2,GDM组均低于对照组（t值分别为9.84和27.53）;肺泡间隔分别为（11.5±6.2）与（9.9±4.3）μm,GDM组高于对照组（t=-2.17）,差异均有统计学意义（P值均＜ 0.05）.透射电镜下,可见GDM组肺泡Ⅱ型上皮细胞表面微绒毛粗短、减少,板层小体数量减少.胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2蛋白均沿胞浆呈颗粒状分布,GDM组4种蛋白表达的平均吸光度分别为1.15±0.12、1.23±0.06、0.87±0.21与1.21±0.18,对照组分别为1.22±0.05、1.31±0.14、1.12±0.09与1.33±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为2.40、2.35、4.89和2.77,P值均＜0.01）.GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白水平分别为0.57±0.09、0.45±0.03、1.50±0.04和1.11±0.04,对照组分别为0.81±0.03、0.66±0.04、1.69±0.05和1.46±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为11.77、11.09、8.80和13.37,P值均＜0.01）.GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2mRNA水平分别为0.60±0.04、0.79±0.04、0.81±0.03和0.79±0.05,对照组分别为1.06±0.19、1.03±0.24、1.03±0.18和1.02±0.19,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为6.80、2.98、3.54和3.54,P值均＜0.01）. 结论 GDM大鼠的胎鼠肺组织中SP-B和SP-C蛋白水平均明显下降,可能由于TTF-1和/或PLAGL-2基因表达下调所致;SP-B和SP-C蛋白减少与胎肺结构的病理变化有密切关联.

新生儿呼吸窘迫综合征患儿肺表面活性物质蛋白B表达的研究

目的探讨肺表面活性物质蛋白B（SP—B）缺陷是否为新生儿呼吸窘迫综合征（RDS）发病的影响因素。方法选择无血缘关系的30例RDS死亡新生儿为RDS组，其中〈34周、34～36周及≥37周每组各纳入10例；选择无血缘关系的30例其他疾病死亡新生儿为对照组，胎龄与RDS组以1：1相匹配分成3个亚组（P〉0．05）。所有研究对象均在死后半小时内取肺组织浸入4％多聚甲醛固定，石蜡包埋后5μm连续切片，采用免疫组织化学技术检测各组患儿SP—B在肺部的表达；计算两组SP—B缺陷的频率。结果SP—B位于细胞胞浆中，部分分泌至气道及肺泡表面，着色深浅不一、范围不同，随组别、胎龄、疾病严重程度而变化；RDS组肺部SP—B蛋白未随胎龄增加而增加，对照组除2例26周患儿SP—B明显低于同组同胎龄外，肺部SP—B蛋白随胎龄增加而增加。RDS组SP—B阳性表达细胞明显低于对照组（t=10．205，P〈0．001），RDS组SP—B缺陷13例，缺陷频率43．3％，对照组SP—B缺陷2例，缺陷频率6．7％，RDS组高于对照组（x^2=60．00，P〈0．001）。结论SP-B缺陷参与了新生儿RDS的发病。

内蒙古西部地区汉族新生儿呼吸窘迫综合征与SP—BT131I位点基因多态性的相关性研究

目的探讨肺表面活性物质蛋白B（SP=B）T131I位点基因多态性及其与新生JLn3z吸窘迫综合征（RDS）易感性的关系。方法选择2009年9月至2016年2月内蒙古医科大学附属医院儿科收治、居住在内蒙古西部地区的RDS汉族早产儿为RDS组，同期选择未发生RDS且排除感染的汉族早产儿为对照组，RDS组与对照组纳入比例为1：1。采用聚合酶链反应（PCR）基因分析技术检测SP．BT131I位点的基因型、等位基因分布。结果共纳入内蒙古西部地区汉族早产儿282例，RDS组和对照组各141例。纳入的早产儿SP．BT131I位点可检出CC、CT、TT3种基因型，RDS组3种基因型频率分别为62．4％、27．7％、9．9％，C等位基因频率为76．2％，T等位基因频率为23．8％。对照组3种基因型分别为50．4％、35．5％、14．2％，C等位基因频率为68．1％，T等位基因频率为31．9％。两组基因型频率差异无统计学意义（P〉0．05），RDS组C等位基因频率明显高于对照组（P〈0．05）。结论SP．BT131I位点C等位基因多态性可能与内蒙古西部地区汉族早产儿患RDS有关。

肺表面活性物质蛋白B mRNA表达与新生儿呼吸窘迫综合征关联性研究

目的探讨肺表面活性物质蛋白B(SP-B)mRNA缺陷是否参与新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)发病。方法选择无血缘关系的60例NRDS死亡患儿作为RDS组,其中≤32周组、32～36+6周组及≥37周组每组各纳入10例;选择无血缘关系的60例其他疾病新生儿死亡患儿作为对照组,胎龄与RDS组以1:1相匹配分成3亚组(P>0.05)。所有研究对象在死后半小时内取肺组织,然后将肺组织浸入4%多聚甲醛固定,石蜡包埋后5μm连续切片,采用原位杂交技术检测各组患儿SP-B mRNA在肺部的表达;计算两组SP-B mRNA缺陷的频率。结果 SP-B mRNA位于细胞胞浆中,随组别、胎龄、疾病严重性而变化;RDS组中,肺部SP-B mRNA表达阳性细胞数未随胎龄增加而增加,而对照组肺部SP-BmRNA表达阳性细胞数随胎龄增加而增加(F=50.124,P<0.001)。RDS组SP-B mRNA阳性表达细胞明显低于对照组(t=7.812,P<0.001)。NRDS组SP-B缺陷35例,缺陷频率58.3%,对照组SP-B缺陷8例,缺陷频率13.3%,RDS组高于对照组(χ2=26.421,P<0.001)。结论 SP-B mRNA缺陷参与了RDS的发病。

新生儿呼吸窘迫综合征肺组织中维甲酸受体-α、Janus激酶-1、信号转导和转录活化因子-3的表达及意义

目的探讨维甲酸受体-α（retinoic acid receptor α，RARα）、Janus激酶-1（Janus kinase 1，JAK1）、信号转导和转录活化因子-3（signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）在新生儿呼吸窘迫综合征（neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）发病中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测20例NRDS死亡病例及19例非NRDS死亡病例肺泡上皮细胞中肺表面活性蛋白-B（surfactant protein B，SP-B）、RARα、JAK1、STAT3的表达，并分析其与SP-B之间的相关关系。结果NRDS组肺组织SP-B、JAK1和STAT3的表达分别为0．2486士0．0572，0．2434±0．0454，0．3544士0．0670，均较对照组减弱（P均〈O．05）。RARα在NRDS组中多表达于细胞质（14／20），在对照组中多表达于细胞核（10／19），差异有统计学意义（X^2=6．384，P〈0．05）。SP-B的表达在RARα细胞核表达组为0．3279士0．0923，较RARα细胞质表达组（O．2629士0．0541）和RARα阴性表达组（O．2113士0．0287）增强（P均〈O．05）。RARα与SP-B的表达呈正相关（r=0．487，P〈0．01）；JAK1和STAT3与SP-B表达均无明显相关性（r分别为0．233和0．133，P均〉0．05）。结论SP-B表达可能受RARα表达的影响，且与RARα的分布关系密切，RARα从细胞核向细胞质的转位可能与NRDS的发生有关，而JAK1及STAT3也可能参与其中。

肺表面活性物质蛋白B基因多态性与维吾尔族新生儿呼吸窘迫综合征易感性的相关性研究

目的探讨肺表面活性物质蛋白B(surfactant protein-B,SP-B)1580位点(rs1130866)基因多态性与维吾尔族新生儿呼吸窘迫综合征(respiratory distress syndrome,RDS)易感性的关系。方法选择2019年6月至2020年5月喀什地区第一人民医院新生儿科收治的维吾尔族早产儿进行前瞻性研究,根据是否诊断RDS分为RDS组和对照组,采用聚合酶链-限制性片段长度多态性分析技术检测SP-B 1580位点的基因型、等位基因分布,并将维吾尔族RDS早产儿SP-B 1580位点的基因型频率、等位基因频率与蒙古族及不同地区的汉族新生儿进行比较。结果共纳入160例患儿,RDS组及对照组各80例,两组均可检出3种基因型,即TT、TC及CC型。RDS组3种基因型频率分别为18.8%、53.8%和27.4%,T等位基因频率为45.6%,C等位基因频率为54.4%;对照组3种基因型频率分别为22.5%、52.5%和25.0%,T等位基因频率为48.8%,C等位基因频率为51.3%。两组患儿基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。维吾尔族SP-B 1580位点CC基因型频率与蒙古族及汉族比较差异均有统计学意义(P<0.05),而C等位基因频率与蒙古族比较差异无统计学意义(P>0.05),与汉族比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论新疆喀什地区维吾尔族SP-B 1580位点(rs1130866)基因多态性与早产儿RDS无相关性,不同民族SP-B 1580位点基因多态性存在差异。

20例汉族新生儿呼吸窘迫综合征肺表面活性物质蛋白遗传缺陷的研究

目的探讨汉族群体新生儿呼吸窘迫综合征发病的遗传机制，为进一步开展基因治疗NRDS提供科学实验依据。方法选择彼此无关的汉族NRDS20例作为NRDS组，选择彼此无关的汉族20例其他病例作为对照组，年龄与NRDS组相匹配，这些患儿可患有先心病、支气管肺发育不良、持续肺动脉高压。所有研究对象在临床确诊或住院后取血样本，NRDS组和对照组在患者死后30min内取肺组织。采用免疫组化技术检测SP—B在肺部的表达，PCR技术分析筛选SP-B基因Intron 4的遗传缺陷变异体。结果20例NRDS患儿中，26周2例、34周1例、42周2例SP-B蛋白在肺部的表达明显较同胎龄对照组少；而对照组随着胎龄的增加，SP-B在肺部的表达增加，但在NRDS组却无这种规律可寻，进一步对这5例进行基因分析发现，2例42周的NRDS患儿SP—B基因Intron 4 121ins2遗传缺陷变异体。临床资料表明，42周胎龄的NRDS患儿病情重。结论SP—B减少参与了NRDS的发病，汉族群体NRDS存在SP-B基因intron 4 121ins2遗传缺陷变异体，进一步在国内研究SP-B遗传缺陷变异体可望为疾病基因组样本库积累资料。

不同机械通气方式对外源性肺表面活性物质治疗大鼠呼吸机相关性肺损伤效果的影响

目的 探讨不同机械通气方式对外源性肺表面活性物质（PS）治疗大鼠呼吸机相关性肺损伤（VILI）效果的影响.方法 雄性Wistar大鼠42只,体重310～356 g,随机分为6组（n=7）：CVT6组、SVT6组、CVT10组、SVT10组、CVT14组和SVT14组.VT分别为6、10、14 ml/kg,通气频率分别为75、45、32次/min.采用高气道压机械通气（HPV,气道峰压为40 cm H20,PEEP为0）制备大鼠VILI模型.于HPv前（T0,基础值）及通气15～25 min,在呼气末经气道注入4 ml/kg空气,测定气道压力,计算胸肺顺应性,当其降至基础值50%时,PEEP升高至7.5 cm H2O.吸除气道内水肿液后,SVT6组、SVT10组和SVT14组给予PS 100 mg/kg,CVT6组、CVT10组和CVT14组给予等容量空气,并按不同VT和通气频率行机械通气.于T0、HPV后5 min（T1）、给予PS后15、30、60、90及120 min（T2-6）时测定MAP,采集股动脉血样行血气分析,于T1,6时收集气道内水肿液,于T6时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果.结果 相同机械通气方式下,给予Ps后大鼠呼吸机相关性肺损伤较对照组减轻;不同机械通气方式下,SVT10组大鼠呼吸机相关性肺损伤较其余组均减轻.SVT10组肺组织病理损伤较其余组减轻.结论 采用VT10 ml/kg、通气频率45次/min行机械通气时PS治疗大鼠VILI的效果较好.