苏钟猪脂蛋白脂肪酶的组织表达谱及其生物信息学分析

为进一步了解猪LPL基因的结构和功能,本研究以苏钟猪为试验对象,利用实时荧光定量PCR方法,分析该基因在苏钟猪5种不同组织(心脏、肝脏、肾脏、皮下脂肪和背最长肌)中RNA水平的表达谱信息;对苏钟猪LPL基因的CDS区域进行了克隆测序,并用生物信息学方法分析了苏钟猪LPL蛋白水平的结构和功能。结果表明:LPL基因在各组织中的mRNA表达丰度为:皮下脂肪>心脏>肾脏>背最长肌>肝脏,其中皮下脂肪的表达量显著高于其他组织(P<0.01),且公猪背最长肌中的表达量显著高于母猪(P<0.01),公猪与母猪间的眼肌面积和瘦肉率性状均差异显著(P<0.05)。猪LPL基因编码含479个氨基酸的蛋白,理论等电点为4.99,具有疏水性,存在信号肽,是分泌型蛋白,与牛、绵羊、家猫等的亲缘关系较近。LPL对苏钟猪的皮下脂肪、心脏、肾脏、肌肉等组织的脂肪沉积有重要影响,可成为苏钟猪肉质改良育种中的重要候选基因。

发酵床不同垫料对猪生长、组织器官及血液相关指标的影响

为了探讨发酵床不同垫料对猪生长、组织器官及血液相关指标的影响,选择90头体质状况良好和体质量相近的60日龄苏钟猪(阉割)作为试验动物,随机分为3组:木屑发酵床组、酒糟发酵床组、传统水冲圈饲养组(对照),试验期90 d。结果显示:1)木屑发酵床组、酒糟发酵床组猪试验末体质量、总增质量、平均日增质量和心脏质量均显著高于对照(P<0.05)。2)育肥前期(试验第45 d)酒糟发酵床组猪血清中总蛋白质浓度显著高于木屑发酵床组和传统水冲圈饲养组;育肥后期(试验第90 d),酒糟发酵床组猪血清中总蛋白质浓度显著高于木屑组(P<0.05)。3)育肥前期,酒糟发酵床组猪血清中生长激素(GH)和三碘甲腺原氨酸(T3)均显著高于对照(P<0.05),木屑发酵床组和酒糟发酵床组猪血清中乙酰胆碱(Ach)浓度均显著高于对照(P<0.05),酒糟发酵床组血清5-羟色胺(5-HT)浓度显著高于木屑发酵床组(P<0.05)。表明,发酵床养殖(酒糟发酵床组和木屑发酵床组)可显著提高猪的生长性能,有利于猪心脏发育;另外,发酵床养殖可促进激素(T3)、情绪物质(Ach和5-HT)的分泌,增强猪免疫机能。

苏钟猪FTO基因的mRNA表达、克隆测序及其生物信息学分析

脂肪肥胖相关基因(FTO)在控制食欲和能量消耗方面具有重要作用。为进一步了解猪FTO基因的结构和功能,以苏钟猪为试验对象,利用RT-PCR方法,分析该基因在苏钟猪5种不同组织(肺脏、肝脏、心脏、背膘和背最长肌)RNA水平的表达谱信息;对苏钟猪FTO基因的编码序列(CDS)进行了克隆测序,并用生物信息学方法分析了苏钟猪FTO蛋白的结构和不同物种间的同源性。结果表明,FTO基因在苏钟猪各组织中的mRNA表达丰度表现为:背膘>心脏>肺脏>肝脏>背最长肌,其中背膘中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。苏钟猪FTO的CDS区发现了8个SNPs,分别为G52A、C523T、G628A、A655G、A810G、A886G、G1002A和A1344G。苏钟猪FTO基因编码一个含505个氨基酸的蛋白,理论等电点为5.23,具有亲水性,不存在信号肽,是非分泌型蛋白,与牛、绵羊、狗等物种的亲缘关系最近。FTO的mRNA表达对苏钟猪的皮下脂肪、心脏、肌肉等组织的脂肪沉积有一定影响,其编码序列中丰富的SNPs可成为苏钟猪肉质改良育种中的重要分子标记。

苏钟猪和太湖猪的线粒体D环部分序列比较分析

测定了以太湖猪为母本的杂交一代苏钟猪21个个体线粒体D环序列442 bp,结合已报道的中国太湖猪两个类群(梅山猪和二花脸)的线粒体DNA控制区(D-loop)序列进行分析,结果表明:苏钟猪和太湖猪的聚类主要有两类,部分苏钟猪和大多数梅山猪分布在类群Ⅰ;少数梅山猪、苏钟猪和二花脸聚为类群Ⅱ。梅山猪在几支上都有分布,可能与梅山猪有大中小类型之分有关。这一结果与根据形态差异把太湖猪分成不同的类群相一致。

瘦素受体对苏钟猪脂肪沉积调控的影响

[目的]研究瘦素受体(leptin receptor,LEPR)的mRNA表达和编码序列单核苷酸多态性(c SNPs)对猪脂肪沉积性状的影响。[方法]本文旨在利用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法和免疫印迹方法检测了该基因在高脂猪和低脂猪背最长肌、背膘、心、肝和肾共5种组织样中的mRNA和蛋白表达量,利用直接测序方法检测了LEPR第18外显子c SNPs,并对LEPR表达量、编码序列单核苷酸多态位点与苏钟猪脂肪沉积相关性状进行了关联分析。[结果]RT-q PCR结果表明:LEPR mRNA在这5种组织中均有表达,且差异显著(P<0.05),其中背膘组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),其次为背最长肌中的表达量,高脂猪的mRNA表达量显著高于低脂猪(P<0.05)。Western blot结果表明,LEPR蛋白在背膘和背最长肌中显著表达,且高脂猪的蛋白表达量显著高于低脂猪(P<0.05),说明猪脂肪沉积量越高,LEPR mRNA和蛋白表达量越高。PCR-sequencing结果表明,在LEPR c DNA的c.2841C>T位点处,T等位基因为脂肪沉积的优势等位基因。[结论]LEPR的表达对苏钟猪脂肪沉积调控有显著影响,其c.2841C>T位点可作为苏钟猪脂肪沉积肉质性状改良育种的分子标记。

发酵床不同垫料对肥育猪生长性能及脂肪代谢指标的影响

为了探讨发酵床不同垫料对肥育猪生产性能及脂肪代谢相关指标的影响。选择120头体况良好、体重相近(31.4±0.38kg)60日龄苏钟猪(阉割)作为试验动物,随机分为4组:对照组I(传统水冲圈饲养,自由采食)、对照组II(传统水冲圈饲养,顿饲)、酒糟发酵床组(垫料基质为酒糟,简称酒糟组)、菌糠发酵床组(垫料基质为菌糠,简称菌糠组),试验期90 d。结果表明:1酒糟组、菌糠组总增重、平均日增重均显著高于对照组(I、II)(P<0.05);酒糟组末重显著高于对照组(I、II)(P<0.05);料重比以菌糠组、酒糟组最低,但无显著差异(P>0.05)。2血液脂肪代谢指标,酒糟组、菌糠组血清乳酸脱氢酶(LDH)、尿素氮(BUN)浓度显著低于对照组(I、II)(P<0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HLDC)浓度菌糠组显著高于对照组II;葡萄糖(GLU)去甲肾上腺素(NE)浓度发酵床组低于对照组,其中酒糟组NE显著低于对照组I,菌糠组GLU显著低于对照组(I,II)(P<0.05);谷氨酰转移酶(r GT)发酵床组高于对照组,酒糟组显著高于对照组II(P<0.05);甘油三酯(TG)浓度酒糟组和菌糠组有降低的趋势。3肝脏方面,脂蛋白脂酶(LPL)、脂肪酶(LPS)、肝酯酶(HL)、脂肪合成酶(FAS)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、碱式磷酸酶(AKP)均无显著差异(P>0.05)。结论:本试验条件下,发酵床养殖(酒糟组、酒糟组)可显著提高猪的生产性能,发酵床养殖(酒糟组、酒糟组)显著提高血清高密度脂蛋白胆固醇、谷氨酰转移酶的浓度,降低了乳酸脱氢酶、去甲肾上腺素、甘油三酯的浓度。由此可见,发酵床养殖对育肥猪血清及肝脏相关脂肪代谢指标没有显著影响,但可以提高猪的生产性能及健康水平。

发酵床饲养方式对猪情绪因子及抗抑郁因子P11基因mRNA表达的影响

【目的】本文探讨了饲养模式对猪血清情绪相关物质(5-羟色胺5-HT、β-内啡肽β-EP、皮质酮Cortisol等)及抗抑郁因子P11基因mRNA表达的影响。【方法】试验选择60头体况良好、体重相近(28.4±0.30)kg 60日龄苏钟猪(阉割,公母各半)作为试验动物,随机分为2组:发酵床饲养组(垫料基质为菌糠)、水泥地面饲养组,每组3个重复,每个重复10头,试验期90 d(育肥前期、后期)。试验第45、90天采集血液测定血液情绪物质,90 d屠宰取下丘脑组织,用于p11蛋白RT-PCR检测。【结果】(1)唾液中,发酵床饲养组5-HT、Cortisol浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),β-EP、乙酰胆碱(Ach)浓度则无显著差异(P>0.05)。(2)血清指标方面,育肥前期(试验第45天)发酵床饲养组猪血清β-EP、Cortisol、锌(Zn)浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),5-HT、Ach浓度有提高的趋势(P=0.065,P=0.062),镁(Mg)浓度则无显著差异(P>0.05);育肥后期(试验第90天),发酵床饲养组猪血清β-EP、cortisol、5-HT浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),Ach浓度与前期结果相反,则显著低于水泥地面饲养组(P<0.05),Zn、Mg浓度则无显著差异(P>0.05)。(3)RT-PCR检测结果显示,发酵床饲养组下丘脑P11蛋白基因mRNA相对表达量高于水泥地面饲养组,且有提高趋势(P=0.062)。【结论】发酵床模式可以显著提高猪机体的情绪物质的分泌,促进脑分泌抗抑郁P11蛋白,减少生理应激,趋于愉悦状态,改善动物福利,促进健康。

苏钟猪TLR4多态性及编码区C1027A功能分析

【目的】研究苏钟猪TLR4的多态性及其编码区第1 027 bp处突变对TLR4蛋白功能的影响。【方法】采用PCR-SSCP的方法检测TLR4在苏钟猪中的多态性并利用real-time PCR方法检测不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后,TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β表达量的变化情况,探讨该处突变对TLR4识别LPS的影响。【结果】①共检测到3个突变:G962A、C1027A、G960A,其中前两个为有义突变,且C1027A突变可引起编码氨基酸性质的改变;②LPS能快速诱导猪肺泡巨噬细胞中TLR4及促炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平上调且TLR4编码区C1027A不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophages,PAMs)对LPS的敏感性及反应强度存在显著性差异。【结论】苏钟猪TLR4编码区的序列相对保守、多态含量较低,群体遗传变异程度较小。TLR4编码区C1027A突变能影响TLR4识别LPS的能力,等位基因C为苏钟猪抗革兰阴性菌感染的优势基因。

苏钟猪ACE2基因克隆及其遗传进化分析

为了克隆苏钟猪的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,根据GenBank发表的ACE2基因序列,设计合成1对引物,从苏钟猪心脏提取总RNA,对ACE2基因进行RT-PCR扩增并测序,然后利用DNAstar软件对序列进行比对分析。产物经琼脂糖电泳分析,呈现1条约641 bp的条带,回收纯化后对扩增的猪心肌ACE2 mRNA进行了测序和比较分析。扩增的猪ACE2核苷酸序列与GenBank中已登录的2只猪ACE2核苷酸序列同源性分别为98.6%和99.2%。同时,利用DNAstar将其与人、牛、大鼠和小鼠等物种相应序列进行比较,结果表明苏钟猪ACE2基因与牛同源性最高,达到87.5%;与人的同源性为82.5%,与斑马鱼的同源性最低,仅为52.3%。对由苏钟猪ACE2基因核苷酸序列推导的氨基酸序列进行同源性比较也得到了同样的结果。

四个微卫星标记在苏钟猪中的多态性分析

微卫星标记是近年来发展起来的一种检测基因DNA多态性的新型DNA标记,因其数量多、分布广、多态性丰富及检测方便等优点而倍受推崇。本文利用四个微卫星标记分析其在苏钟猪中的遗传多样性。结果表明,四个微卫星座位在苏钟猪中均存在较高的遗传多样性,基因杂合度为0.596 2 ～ 0.882 3;多态信息含量为 0.514 6 ～ 0.870 9;有效等位基因数为 2.476 8 ～ 8.493 5。以上结果表明,本研究采用的四个微卫星标记可以作为苏钟猪的遗传多样性的标记辅助选择。

四个微卫星标记在苏钟猪中的多态性分析

微卫星标记是近年来发展起来的一种检测基因DNA多态性的新型DNA标记,因其数量多、分布广、多态性丰富及检测方便等优点而倍受推崇。本文利用四个微卫星标记分析其在苏钟猪中的遗传多样性。结果表明,四个微卫星座位在苏钟猪中均存在较高的遗传多样性,基因杂合度为0.5962～0.8823;多态信息含量为0.5146～0.8709;有效等位基因数为2.4768～8.4935。以上结果表明,本研究采用的四个微卫星标记可以作为苏钟猪的遗传多样性的标记辅助选择。

瘦肉型母系猪苏钟系繁殖性能的观测

对瘦肉型猪“苏钟 系”繁殖性能进行观测。结果表明 ,总产仔数 :初产猪 11.3 0± 2 .0 5头、二胎猪11.93± 2 .52头 ;妊娠期 :初产猪 113 .4 1± 1.55d、二胎猪 112 .3 8± 2 .16d;发情周期 :初产猪 19.70± 1.59d,经产猪 2 0 .58± 1.16d;乳头数 :种公猪 14 .90± 1.14枚、种母猪 14 .14± 1.0 9枚、仔猪 14 .97± 1.72枚。苏钟 系具有较好的繁殖性能 ,是生产商品杂优猪的理想瘦肉型母系猪。

瘦素受体表达量在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用

瘦素受体(leptin receptor,LEPR)在机体的体质量平衡、造血、生殖、血管生成和免疫过程中发挥着重要作用。为进一步了解LEPR基因在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用机制,本研究利用Real-time PCR方法和Western-blot方法分析该基因在12头苏钟猪中5个脂肪易沉积组织(心脏、肝脏、肾脏、背膘和眼肌)RNA和蛋白水平的表达谱信息。结果表明:LEPR的mRNA在这5种组织中均有表达,其在各组织中的mRNA表达丰度表现为:背膘>眼肌>心脏>肝脏>肾脏,其中在背膘的表达量极显著高于其他几种组织(P<0.01);LEPR蛋白在这5种组织中也均有表达,其中在心脏中的表达量最高,显著高于其他组织(P<0.01),且在公猪组织的表达量显著高于母猪组织(P<0.05);另外,LEPR第18外显子在苏钟猪群中检测到3个高突变率的SNPs。LEPR对苏钟猪的背膘、肌肉、心脏、肾脏、肝脏等组织的脂肪沉积有重要影响,是苏钟猪肉质改良育种中潜在的重要候选基因。

不同发酵床垫料对苏钟猪生产性能及肉品质的影响

探讨不同发酵床垫料对肥育猪生产性能及肉品质的影响。选择60头60日龄苏钟猪作为试验动物,随机分为4组：对照组（水泥地面饲养）、木屑发酵床组（垫料基质为木屑）、酒糟发酵床组（垫料基质为50%酒糟＋50%木屑）、菌糠发酵床组（垫料基质为50%菌糠＋50%木屑）,试验期100 d。结果显示：木屑组、菌糠组生产性能显著优于对照组（P〈0. 05）,酒糟组生产性能极显著优于对照组（P〈0. 01）;同时,酒糟组生产性能显著优于木屑、菌糠组（P〈0. 05）。各处理组猪肉肉色、pH值、蒸煮损失、滴水损失、剪切力、水分等常规肉质指标均无显著差异（P〉0. 05）;酒糟组、菌糠组猪肉肌内蛋白含量显著高于对照组（P〈0. 05）;发酵床处理组肌内脂肪均高于对照组,但差异不显著（P〉0. 05）;各处理组氨基酸、必需氨基酸、主要鲜味氨基酸含量均无显著差异（P〉0. 05）;脂肪酸方面,酒糟组猪肉硬脂酸含量最低;发酵床处理组猪肉亚油酸含量均显著高于对照组（P〈0. 05）,其中酒糟组亚油酸含量最高;同时,酒糟组猪肉二十碳四烯酸（ARA）、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）含量最高,显著高于其他处理组（P〈0. 05）;菌糠组猪肉二十碳一烯酸含量显著高于其它处理组（P〈0. 05）;酒糟组猪肉饱和脂肪酸（SFA）含量最低,显著低于对照组（P〈0. 05）;发酵床处理组猪肉不饱和脂肪酸（UFA）、多不饱和脂肪酸（PUFA）、人体必需脂肪酸含量均高于对照组,其中酒糟组和菌糠组不饱和脂肪酸（UFA）含量显著高于对照组（P〈0. 05）,酒糟组猪肉多不饱和脂肪酸（PUFA）、人体必需脂肪酸含量显著高于其它处理组（P〈0. 05）;（5）菌糠组猪肉锌（Zn）含量最高,显著高于酒糟组（P〈0. 01）和对照组（P〈0. 05）,其它重金属元素各组间无显著差异（P〉0. 05）;对照组猪肝脏铅（Pb）含量显著高于木屑组和酒糟组（P〈0. 05）,铬（Cr）含量显著高于发酵床饲养组（P〈0. 05）;菌糠组猪肝脏锌（Zn）含量最高,显著高于木屑组（P〈0. 05）;猪肝脏中其它重金属元素各组间无显著差异（P〉0. 05）;各处理组猪肉、肝脏中重金属元素含量均满足国家相关食品中限量标准的要求。上述研究结果表明,以酒糟、菌糠为垫料的发酵床饲养环境可提高猪的生长性能和猪肉品质;并且,发酵床饲养方式不会造成重金属在猪肉中的沉积。

不同饲养方式及发酵床垫料环境对猪生产性能、血液生化指标及肠道消化酶活性的影响

探讨不同饲养方式及发酵床垫料环境对猪生产性能、血液生化指标及肠道消化酶活性的影响。将75头60日龄苏钟猪随机分为5组:对照组Ⅰ(水泥地饲养,自由采食)、对照组Ⅱ(水泥地饲养,顿饲)、木屑发酵床组(垫料基质为木屑,简称木屑组,自由采食)、酒糟发酵床组(垫料基质为50%酒糟+50%木屑,简称酒糟组,自由采食)、菌糠发酵床组(垫料基质为50%菌糠+50%木屑,简称菌糠组,自由采食),试验期100 d。(1)酒糟组、木屑组和菌糠组各项生产性能都显著优于对照组(P<0.01、P<0.05),料重比酒糟组<菌糠组<木屑组<对照组Ⅱ<对照组Ⅰ。(2)育肥中期,酒糟组血清总蛋白含量最高;酒糟组和菌糠组、木屑组血清白蛋白含量都显著高于对照组;菌糠组和酒糟组、木屑组血清球蛋白含量都显著低于对照组(P<0.01、P<0.05)。酒糟组猪血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著高于其他各组(P<0.05);木屑组、菌糠组、对照组Ⅱ血清碱性磷酸酶活性显著高于酒糟组(P<0.05)和对照组Ⅰ(P<0.01)。菌糠组、木屑组猪血清葡萄糖最高,显著高于对照组Ⅰ(P<0.01)和对照组Ⅱ(P<0.05),对照组Ⅱ血清葡萄糖也显著高于对照组Ⅰ(P<0.05);酒糟组血清胆固醇含量最高,显著高于对照组Ⅰ(P<0.01)和对照组Ⅱ(P<0.05),菌糠组次之,显著高于对照组Ⅰ(P<0.05);对照组猪血清甘油三酯含量显著高于发酵床各组(P<0.01)。(3)育肥后期,各组猪血清总蛋白、球蛋白含量,谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性无显著差异(P>0.05);酒糟组血清白蛋白含量最高,显著高于对照组Ⅱ和木屑组(P<0.05);发酵床处理组谷草转氨酶活性极显著低于对照组(P<0.01);菌糠组猪血清葡萄糖水平最高,显著高于对照组Ⅰ(P<0.01)和木屑组(P<0.05),酒糟组、对照组Ⅱ血糖浓度次之,显著高于对照组Ⅰ(P<0.05);对照组Ⅱ猪血清甘油三酯含量最高,极显著高于其他各组(P<0.01)。(4)发酵床处理组猪十二指肠胰蛋白酶、脂肪酶活性显著高于对照组(P<0.05),其中,活性高低依次为菌糠组>酒糟组>木屑组>对照组Ⅱ>对照组Ⅰ。采取发酵床饲养方式,特别是酒糟、菌糠替代木屑作为垫料的发酵床环境,较传统水泥地面和木屑发酵床饲养环境更有利于猪的健康生长。