MSP法检测胰腺癌Syk基因甲基化改变的研究

目的 :探讨胰腺癌Syk基因启动子区 5’CpG岛甲基化改变的特点与临床病理特征的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果 :32例癌旁正常胰腺组织未发现有Syk基因启动子的甲基化 ,14 /32例胰腺癌组织检测到Syk基因启动子的甲基化 ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 15例胰腺癌组织中 ,有 10例Syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论 :Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一 ,Syk基因启动子的甲基化与胰腺癌的发生、转移相关。

盐酸普鲁卡因对人肝癌HepG2细胞Syk基因甲基化的影响

为探讨盐酸普鲁卡因(procaine,PCA)对人肝癌HepG2细胞Syk基因甲基化的影响,应用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测盐酸普鲁卡因处理前后HepG2细胞中Syk基因启动子的甲基化水平;采用蛋白印迹技术观察Syk蛋白表达情况。结果显示,MSP检测到人肝癌HepG2细胞中Syk基因发生甲基化,随盐酸普鲁卡因浓度升高和时间的延长Syk基因甲基化水平逐渐降低;蛋白印迹结果表明,Syk蛋白在HepG2细胞中低表达,经盐酸普鲁卡因处理可以上调Syk蛋白的表达。人肝癌HepG2细胞中Syk基因启动子区域发生甲基化可能是肝癌发病的机制之一;盐酸普鲁卡因能降低Syk基因启动子区域CpG岛甲基化,并使Syk蛋白表达上调。

盐酸普鲁卡因对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响

旨在探讨盐酸普鲁卡因(procaine,PCA)对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响。应用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测盐酸普鲁卡因处理前后HT-29细胞中Syk基因启动子的甲基化水平。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术观察HT-29细胞内Syk基因表达情况。MSP检测发现人结肠癌HT-29细胞中Syk基因存在甲基化,经盐酸普鲁卡因处理能够使Syk基因甲基化水平下降。RT-PCR和蛋白印迹分析结果显示,人结肠癌HT-29细胞经盐酸普鲁卡因处理后Syk基因表达上调。人结肠癌HT-29细胞中Syk基因启动子甲基化导致基因表达沉默,盐酸普鲁卡因能逆转Syk基因启动子区域CpG岛甲基化,使Syk基因活化并表达上调,提示盐酸普鲁卡因具有治疗结肠癌的潜在应用价值。

Syk基因甲基化和肝癌术后复发转移关系的研究

目的探讨肝癌组织Syk基因启动子甲基化改变的特点,及其与肝癌术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法检测Syk基因启动子甲基化情况,结合随访结果,探讨Syk基因启动子甲基化和肝癌术后复发转移的关系。结果在64例肝癌组织标本中,有19例检测到Syk基因启动子甲基化,发生率为29.7%;在对应癌周正常肝组织中,只有2例检测到Syk基因启动子甲基化,发生率为3.1%。癌组织Syk基因启动子甲基化发生率显著增高(P<0.005)。在19例癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,有14例术后发生癌复发转移,发生率为73.7%;在45例癌组织未检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,只有19例术后发生癌复发转移,发生率为42.2%。癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者术后复发转移发生率显著增高(P<0.05)。结论Syk基因启动子甲基化可能是肝癌发生发展过程中重要的机制之一。肝癌组织Syk基因启动子甲基化可能是预测患者术后复发转移潜在的生物标记物。

天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究

目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物。方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响。结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性。TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低。结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物。

鼻咽癌组织中 SYK 基因启动子区的甲基化分析

目的：检测鼻咽癌组织中脾酪氨酸激酶（SYK）基因启动子区的甲基化状态，探讨 SYK 基因启动子区的甲基化与鼻咽癌发生的关系。方法收集2012年2月～2014年8月间在深圳市宝安区人民医院和北京大学深圳医院就诊的鼻咽癌患者52例，慢性鼻咽黏膜炎症患者26例，鼻咽癌和慢性鼻咽黏膜炎症患者均经病理学诊断证实。应用甲基化特异性PCR 技术检测鼻咽癌和慢性鼻咽黏膜炎症组织的 SYK 基因启动子区的甲基化状态，比较鼻咽癌和慢性鼻咽黏膜炎症组织的 SYK 基因启动子区的甲基化率。结果在52例鼻咽癌组织中有11例 SYK 基因启动子区存在甲基化，甲基化率为21.2％，而在26例慢性鼻咽黏膜炎症组织中未检测到 SYK 基因启动子区的甲基化。结论鼻咽癌组织中 SYK 基因启动子区存在较低程度的甲基化，这提示 SYK 基因启动子区出现的甲基化或许与鼻咽癌的发生相关。

Syk基因甲基化在肝癌中的研究进展及展望

脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)是一种造血细胞特异性的信号分子,被认为是一种候选抑癌基因。DNA甲基化是肿瘤发生发展过程中较常见的表观遗传学改变,它与肿瘤的关系己成为肿瘤发病机制研究中的热点。本文综述了Syk基因甲基化的研究现状和它在肝癌中的表达情况及其与肿瘤发生、发展、转移的关系。

胃癌术后复发转移与抑癌基因Syk启动子甲基化的研究

目的研究胃癌组织中Syk基因启动子甲基化与术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR法检测胃癌组织及癌旁正常胃组织的Syk基因启动子甲基化状态。结果在70例胃癌组织中,Syk基因启动子甲基化发生率为45.7%(32/70);在癌旁正常组织发生率分别为0(0/70);在胃癌组织中,Syk基因甲基化发生率明显高于癌旁正常组织(P<0.001)。检测到Syk基因启动子甲基化的32例病例中,有21例病例术后发生复发转移,发生率为65.6%(21/32);在未检测到Syk基因启动子甲基化的38例病例中,仅有7例病例术后发生复发转移,发生率为18.4%(7/38)(P<0.001)。结论 (1)Syk基因启动子甲基化与胃癌术后复发转移密切相关。(2)胃癌组织中Syk基因启动子甲基化的检测有助于胃癌术后复发转移的早期诊断及预后评估。

Syk与肿瘤侵袭和转移关系的研究进展

蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基的激酶,能催化多种底物蛋白的酪氨酸残基磷酸化,在细胞生长、增殖及分化中具有重要作用。迄今发现的90余种PTKs具有癌基因功能,而Syk是目前发现的惟一具有抑癌作用的PTKs。近年来研究发现,Syk的表达与肿瘤的侵袭及转移密切相关。

北京地区汉族女性人群SYK基因启动子区-803A>T(rs290987)单核苷酸多态性与乳腺癌易感性分析

目的探讨脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)基因启动子区-803A>T(rs290987)单核苷酸多态与汉族女性人群乳腺癌的相关性。方法采用病例-对照研究,以聚合酶链反应(PCR)联合DNA直接测序法检测57例乳腺癌患者和60例与之年龄相匹配的健康对照者syk基因启动子区-803位点的基因型及等位基因频率。采用ELISA方法定量检测受试者血清SYK水平。结果 -803A>T多态T等位基因频率在乳腺癌组明显高于对照组(χ~2=5.348,P=0.021)。与AA基因型相比(TA+TT)基因型可显著增加乳腺癌发病风险,OR值为2.87,95%CI=1.27~6.49。乳腺癌组血清SYK水平显著低于对照组(F=33.278,P<0.01)。结论北京地区汉族女性人群SYK基因-803位点基因型TA和TT是乳腺癌发病的危险因素。

胃癌组织中Syk基因甲基化状态及临床意义

目的探讨胃腺癌患者肿瘤组织、癌旁组织中Syk基因的甲基化状态与临床病理特征及预后的关系。方法应用Real—time甲基化特异性聚合酶联反应技术（MSP）检测92例胃腺癌患者肿瘤组织、配对的癌旁组织中Syk基因的甲基化状态，并分析其与临床病理因素及预后之间的关系。选取40例年龄对应的健康志愿者及48例非萎缩性胃炎患者胃镜获取的组织DNA作对照。结果胃腺癌患者肿瘤组织中检测到Syk基因甲基化有33．7％（31／92），明显高于癌旁组织54％（5／92）。健康对照者和胃炎患者均无Syk基因甲基化。Syk基因甲基化与肿瘤大小、生长方式、分化程度、是否有静脉或淋巴管侵犯、TNM分期有关（17〈005）。结论胃腺癌患者Syk基因甲基化与肿瘤的生物学行为有关，提示肿瘤进展，预后不佳。

B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区甲基化及5-aza-CDR对细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区5′CpG甲基化情况及甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-az-a-CDR)对淋巴瘤细胞的作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测人B淋巴瘤细胞株Raji和Ramos中Syk mRNA的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子区甲基化情况;采用MTT法检测5-aza-CDR对细胞增殖作用的影响,应用DNA凝胶电泳、流式细胞技术和电镜分析5-aza-CDR对B淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和超微结构的影响。结果:Raji细胞Syk基因呈阳性表达,Ramos细胞未检测出Syk mRNA表达。Raji和Ramos细胞中均未检测到Syk基因启动子区的甲基化状态。5-aza-CDR可明显抑制Raji和Ramos细胞增殖,P<0.05;并存在明显的量效和时效依赖关系。5-aza-CDR可诱导Raji和Ramos细胞凋亡,P<0.05。DNA凝胶电泳检测结果显示明显的"DNAladder",并且有明显的细胞凋亡超微结构变化。然而,5-aza-CDR对Raji和Ramos细胞周期未见明显影响。结论:在Raji和Ramos细胞中,Syk基因沉默可能与甲基化无关;5-aza-CDR能明显抑制B淋巴瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期无明显影响。

Syk基因转染对人结肠癌细胞系影响的实验研究

目的构建Syk基因逆转录病毒载体,并观察其对人结肠癌细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR扩增出Syk基因的部分cDNA片段,将其插入到逆转录病毒载体pLNCX上,构建成Syk基因的表达载体,并经酶切鉴定和测序确认。将Syk基因表达载体经脂质体介导转染人结肠腺癌细胞系LoVo,筛选出Syk基因稳定表达的细胞株,通过Southern blot检测Syk基因的整合;RT-PCR及DNA测序法检测Syk基因的转录;通过Western blot检测转染细胞Syk基因的表达;二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果 Syk基因已整合入细胞并获稳定表达,并显著抑制人结肠腺癌细胞LoVo的增殖。结论 Syk基因逆转录病毒载体通过外源Syk基因mRNA水平的表达,从而抑制人结肠腺癌细胞的生长。

SYK基因激活对人胃癌SGC7901细胞株VEGF表达的影响

目的利用去甲基化酶5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-CDR)对脾酪氨酸激酶(Syk)基因激活的作用,观察Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而研究Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响。方法检测用5-aza-CDR处理后的人胃癌SGC7901细胞株的生长情况、SYK基因的表达水平及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平,与未接触5-aza-CDR的对照组进行对比。结果经5-aza-CDR处理过的人胃癌SGC-7901细胞株的生长明显受抑;该细胞株SYK基因的表达水平较对照组明显升高,血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平较对照组明显减弱(P<0.05)。结论 Syk基因的表达能够抑制人胃癌SGC-7901细胞株生长,抑制该细胞株VEGF的表达。血管内皮生长因子(VEGF)的表达抑制可能是SYK基因的激活,从而抑制该细胞株的生长和转移的机制之一。

子宫内膜癌中Syk基因的表达及其甲基化分析

目的探讨Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达及其启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法采用RT-PCR方法检测52例子宫内膜癌及癌周组织、30例子宫内膜不典型增生、28例复杂型増生、30例单纯型增生和40例正常内膜组织中Syk mRNA的表达情况,同时采用MSP方法检测其基因启动子甲基化情况。结果在子宫内膜癌组、癌周组织、不典型增生组、复杂和单纯型增生及正常子宫内膜组中Syk基因表达依次增高,Syk基因甲基化程度依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syk基因表达水平及其基因启动子甲基化程度在复杂型增生、单纯型增生及正常子宫内膜间的差异无显著性(P>0.05);子宫内膜癌中Syk基因的阳性表达及甲基化程度与癌症的临床分期(χ2=4.65,P<0.01;χ2=4.33,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=10.68,P<0.01;χ2=5.86,P<0.05)、肌层浸润深度(χ2=5.82,P<0.05;χ2=3.90,P<0.05)相关,而与内膜癌组织学分级无明显相关性(χ2=0.03,P>0.05;χ2=0.94,P>0.05)。Syk基因启动子甲基化与Syk基因表达缺失明显相关(P<0.05)。结论 Syk基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌发生发展有关。

脾源性酪氨酸激酶基因启动子甲基化与髓母细胞瘤细胞侵袭转移的关系

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)抑制脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因启动子的甲基化后对髓母细胞瘤Daoy细胞侵袭转移能力的影响。方法:用甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR处理体外培养的髓母细胞瘤Daoy细胞,通过甲基化特异性PCR(MSP)、Real time-PCR、Western blot及Transwell实验方法分别检测不同浓度5-aza-CdR处理后髓母细胞瘤Daoy细胞中脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因启动子区甲基化、mRNA表达、蛋白表达及细胞穿膜数的变化。结果:髓母细胞瘤Daoy细胞中Syk基因启动子存在过甲基化,与对照组比较,经不同浓度5-aza-CdR处理后,其Syk基因启动子区甲基化受到不同程度抑制,Syk mRNA的表达量最高上调(3.40±0.24)倍(P<0.01);Syk蛋白的表达量最高上调(3.23±0.19)倍(P<0.01);细胞侵袭及转移能力降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论:髓母细胞瘤Daoy细胞中Syk基因启动子甲基化导致其表达下调,可能是髓母细胞瘤发生转移的机制之一;而甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR可抑制其启动子区的甲基化,使Syk的表达水平上调,抑制肿瘤细胞侵袭及转移能力。

食管鳞癌组织中脾酪氨酸激酶及p53基因的表达及临床病理意义

目的研究食管鳞状上皮细胞癌(简称食管鳞癌)组织中脾酪氨酸激酶(Syk)及p53基因的表达及二者的关系,并探讨其与食管鳞癌发生及发展的相关性。方法用快捷免疫组化法及RT-PCR法检测食管鳞癌组织及其对应癌旁组织中Syk蛋白及mRNA的表达,同时检测p53蛋白及mRNA的表达,分析食管鳞癌中上述2个基因表达变化的相关性,并观察其临床病理意义。结果食管鳞癌组织Syk蛋白及mRNA的表达显著低于癌旁组织(P<0.05);食管鳞癌组织p53蛋白及mRNA的表达显著高于癌旁非肿瘤组织(P<0.05);Syk蛋白表达与p53蛋白(突变型)表达呈负相关(rs=-0.604,P<0.05);Syk蛋白表达与食管鳞癌TNM分期、淋巴结转移情况相关(P<0.05),与肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 Syk在食管鳞癌中表达减弱及缺失与其发生和转移倾向相关;Syk可能是食管鳞癌的肿瘤抑制基因,其作用可能是p53(野生型)依赖性的。

结肠癌术后复发转移与抑癌基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨结肠癌组织中,Syk、P16基因启动子甲基化与术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测结肠癌组织及癌旁正常结肠组织的Syk、P16基因启动子甲基化状态,探讨结肠癌术后转移复发与Syk、P16基因启动子甲基化的关系。结果在60例结肠癌组织中,Syk、P16基因启动子甲基化发生率分别为38.3%(23/60)、42.0%(25/60);在癌旁正常组织发生率分别为0(0/60)、18.3%(11/60);在结肠癌组织中,Syk、P16基因甲基化发生率明显高于癌旁正常组织(P<0.005)。在癌组织中检测到Syk启动子甲基化的23例中,有8例术后癌复发转移,发生率为34.8%(8/23)。而在癌组织中检测到P16基因甲基化的25例中,有11例术后发生复发转移,发生率为44.0%(11/25)。结论 (1)Syk、P16基因启动子甲基化与结肠癌术后复发转移密切相关。(2)结肠癌组织中Syk、P16基因启动子甲基化的检测有助于结肠癌术后复发转移的早期诊断及预后评估。

全长型脾酪氨酸激酶基因转染对人喉鳞癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨全长型脾酪氨酸激酶[full-length spleen tylosine kinase,SYK(L)]基因转染对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为SYK(L)重组质粒转染组、阴性对照质粒转染组和生理盐水组,分别向瘤体内注射SYK(L)重组质粒p IRES2-EGFP-SYK(L)及脂质体混合物、阴性对照质粒p IRES2-EGFP及脂质体混合物和生理盐水,观察肿瘤生长情况。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time fluorescence polymerase chain reaction,Q-RT-PCR)、Western blot法检测各组瘤体内的SYK(L)mRNA及蛋白表达水平。结果 SYK(L)重组质粒转染组的肿瘤平均体积为367.61±81.23mm3,明显小于阴性对照质粒转染组900.20±131.41mm3及生理盐水组930.71±143.73mm3,差异有统计学意义(F=99.91,P<0.01);Q-RT-PCR结果显示SYK(L)重组质粒转染组瘤体内mRNA相对表达量为2.268±0.075,明显高于阴性对照质粒转染组(1.212±0.025)及生理盐水组(1.175±0.031)(F=102.01,P<0.01);Western blot法检测结果显示SYK(L)重组质粒转染组瘤体内相对蛋白含量(0.834±0.021)明显高于阴性对照质粒转染组(0.243±0.041)和生理盐水组(0.301±0.039),差异有统计学意义(F=104.13,P<0.01)。结论全长型脾酪氨酸激酶基因转染对人喉鳞癌裸鼠移植瘤有明显的生长抑制作用,有望成为基因治疗喉癌的新靶点及途径。

结直肠癌侵袭性与脾酪氨酸激酶基因Syk启动子甲基化的关系

目的 探讨脾酪氨酸激酶 (Syk)基因启动子甲基化与结直肠癌侵袭转移之间的关系。方法 采用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测Syk基因在 12 0例结直肠癌肿瘤组织、癌旁正常组织中的甲基化和表达情况。 结果 12 0例结直肠癌患者中 ,48例未检测到SykmRNA的表达 ,而癌旁正常组织均有表达。癌旁正常组织未检测到Syk基因启动子甲基化 ,3 7例肿瘤组织发生Syk基因启动子甲基化(3 0 .8% ) ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 0 0 5 )。在淋巴结转移的 5 6例中 ,2 4例发生Syk基因启动子甲基化 ,而无淋巴结转移的 64例中 ,13例发生甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化发生率显著高于无淋巴结转移组 (P =0 .0 0 8)。发生甲基化的肿瘤组织中 ,均无SykmRNA的表达。结论 结直肠癌中 ,SYK基因启动子过甲基化导致其mRNA的失表达 ,从而引起结直肠癌的侵袭性增强 ,它可能是结直肠癌发生侵袭转移的又一种机制。