催乳素处理的乳腺癌T-47D细胞lncRNA和mRNA表达谱差异分析

目的:观察催乳素处理引起乳腺癌T-47D细胞中长链非编码RNA(lncRNA)和mRNA表达谱的变化。方法:利用转录组测序技术检测催乳素处理前后乳腺癌T-47D细胞中lncRNA和mRNA的表达谱;通过数据库KEGG、GO富集对有差异表达且具有统计学意义的mRNA进行通路分析,得到mRNA参与的生物学途径;运用荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对部分差异表达的lncRNA(lnc-AK4-2、XLOC_075541、XLOC_093371、XLOC_081110、XLOC_047068、XLOC_006637、XLOC_064063、XLOC_086865、XLOC_099517、XLOC_106798、lnc-ZNF639-1)进行验证,并利用生物信息学方法预测其靶基因,通过数据库KEGG、GO富集对差异lncRNA的靶基因进行通路分析。结果:分析得到3564个差异lncRNA和477个差异mRNA(差异倍数>2,P<0.05),差异表达的mRNA主要富集在134条不同的信号通路,其中包括催乳素/催乳素受体信号通路相关的MAPK信号通路、p53信号通路和JAK-STAT信号通路;选取的11条lncRNA的变化趋势(XLOC_093371、XLOC_006637、XLOC_064063、XLOC_086865、lnc-ZNF639-1表达上调,lncAK4-2、XLOC_075541、XLOC_081110、XLOC_047068、XLOC_099517、XLOC_106798表达下调)经q RT-PCR技术得到验证;lncRNA靶基因富集的信号通路同样包括MAPK信号通路。结论:催乳素处理前后T-47D细胞中lncRNA的表达存在明显差异,为进一步研究与乳腺癌发病机制相关的关键lncRNA分子提供了基础,并为寻找乳腺癌潜在的诊疗方法提供理论支持。

制首乌含药血清对人乳腺癌T-47D细胞增殖及ER表达的影响

目的:研究制首乌含药血清对人乳腺癌T-47D细胞增殖及雌激素受体(ER)表达的影响,探讨其植物雌激素(PE)样作用。方法:将性未成熟SD大鼠随机分为空白组,戊酸雌二醇(Ev)组(阳性对照,0.12 mg/kg),制首乌低、高剂量组(0.75、3 g/kg,以生药量计)以及制首乌低、高剂量+Ev联用组(剂量同各药单用组),每组10只。空白组大鼠灌胃等体积水,各给药组大鼠灌胃相应药物,早晚各1次,连续4 d。末次给药2 h后采血,制备空白血清和含药血清。将T-47D细胞随机分为空白组,Ev组,制首乌低、高剂量组以及制首乌低、高剂量+Ev联用组,分置于含20%空白或相应含药血清的培养基中培养,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖率(PR),采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应法检测ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,各给药组细胞的PR[各给药组(24 h),除制首乌高剂量+Ev联用组外的其余各给药组(48、72 h)]均显著升高;且制首乌高剂量组(72 h)显著高于Ev组,制首乌低剂量组+Ev联用组(72 h)显著高于同剂量制首乌单用组,而制首乌高剂量+Ev联用组(72 h)显著低于同剂量制首乌单用组(P<0.05或P<0.01)。Ev组、制首乌高剂量组和制首乌低剂量+Ev联用组细胞中ER-α蛋白,各给药组细胞中ER-αmRNA和ER-β蛋白以及Ev组、制首乌低剂量组和制首乌+Ev联用组细胞中ER-βmRNA的相对表达量均显著升高;Ev组细胞中ER-α蛋白及其mRNA的相对表达量均显著高于制首乌单用和联用组;Ev组细胞中ER-β蛋白及其mRNA的相对表达量均显著低于制首乌低剂量+Ev联用组,但ER-βmRNA的相对表达量显著高于制首乌单用组和制首乌高剂量+Ev联用组;制首乌低剂量+Ev联用组细胞中ER-α、ER-β蛋白及其mRNA以及制首乌高剂量+Ev联用组细胞中ER-βmRNA的相对表达量均显著高于同剂量制首乌单用组,而制首乌高剂量+Ev联用组细胞中ER-α蛋白及其mRNA相对表达量均显著低于同剂量制首乌单用组(P<0.05或P<0.01)。结论:制首乌含药血清可促进人乳腺癌T-47D细胞的增殖,并可通过促进ER-α和ER-β蛋白及其mRNA的表达来发挥PE样作用。但上述作用弱于雌激素,且两者联合可能会拮抗雌激素的作用。

二苯乙烯苷对人乳腺癌T-47D细胞增殖及其雌激素受体表达的影响

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对人乳腺癌T-47D细胞增殖及其雌激素受体(ER)表达的影响,探讨其雌激素样作用及可能机制。方法:以ER阳性人乳腺癌T-47细胞为对象,以β-雌二醇(β-E(2,)1×10^-8mol/L)为阳性对照,采用CKK-8法检测不同浓度TSG(1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4mol/L)作用24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算增殖率;分别采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链式反应法检测经低、中、高浓度TSG(1×10^-8、1×10^-6、1×10^-4mol/L)作用48 h后细胞中ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表达情况。结果:经不同浓度TSG作用24、48、72 h后,各给药组各时间点(除β-E2组48 h外)的细胞增殖率均较空白组显著升高,且TSG 1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L组显著高于β-E2组(P<0.05或P<0.01)。经低、中、高浓度TSG作用48 h后,各给药组细胞中ER-α、ER-β蛋白及其m RNA的表达量均较空白组显著升高(P<0.05或P<0.01);且TSG低浓度组ER-β蛋白的表达量,各浓度组细胞中ER-αmRNA以及低、高浓度组ER-βm RNA的表达量均显著高于β-E2组(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG可诱导T-47D细胞的体外增殖,并可通过促进ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表达来发挥雌激素样作用;这种作用在一定浓度下强于β-E2。

七叶皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和T-47D增殖的影响

以人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T-47D为研究对象,通过MTT方法,检测不同浓度七叶皂苷(0、5、10、15、20、25、30、35、40、45μmol/L),对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T-47D体外增殖的影响。结果表明:不同浓度七叶皂苷处理MDA-MB-231细胞,发现七叶皂苷对MDA-MB-231肿瘤细胞没有明显的抑制作用。七叶皂苷可明显抑制人乳腺癌T-47D细胞的生长,并且呈现明显的剂量和时间依赖性,表明七叶皂苷对乳腺癌T-47D细胞具有抑制作用。

山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖、迁移的影响。方法:利用细胞培养技术对人乳腺癌T-47D细胞进行培养;利用MTT法比较不同浓度山慈菇水煎剂组和对照组对T-47D细胞生长增殖情况的影响;利用细胞划痕实验,检测不同浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞迁移的影响。结果:不同浓度的山慈菇水煎剂(50 g·L^(-1)、100 g·L^(-1)、200 g·L^(-1),400 g·L^(-1)、600 g·L^(-1)、800 g·L^(-1))对T-47D细胞的生长抑制率分别为-0.60%、-17.10%、-0.60%、65.08%、81.15%、82.80%,400~800 g·L^(-1)质量浓度山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D细胞的增殖有明显抑制作用;划痕实验结果显示200 g·L^(-1)、300g·L^(-1)山慈菇水煎剂作用24h和48h后,与对照组比较,乳腺癌T-47D细胞的划痕距离较大,划痕未见明显愈合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞生长增殖具有抑制作用,低浓度(<200 g·L^(-1))的山慈菇水煎剂对T-47D细胞的生长增殖无影响,即无细胞毒性;高浓度(>200 g·L^(-1))的山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D的增殖有明显的抑制作用;一定浓度的山慈菇水煎剂可以抑制T-47D细胞的迁移运动。

白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌T-47D细胞株生长的抑制作用

目的:观察白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌细胞T-47D生长的影响。方法:采用平皿克隆形成实验、软琼脂集落形成实验和BrdUrd(溴脱氧尿苷)掺入实验,观察不同浓度的白花蛇舌草醇提取物(1.0μg/mL,3.0μg/mL,10μg/mL,30μg/mL,100μg/mL)对T-47D细胞锚定依赖性生长和软琼脂集落形成能力及核酸合成的抑制作用。结果:①随着白花蛇舌草醇提取物浓度的升高,对T-47D细胞的生长呈现明显抑制作用;②白花蛇舌草醇提取物可呈浓度依赖性抑制对数生长期T-47D细胞核酸合成。结论:白花蛇舌草醇提取物可能通过影响肿瘤细胞核酸合成而抑制T-47D细胞生长。

帕博西尼联合他莫昔芬对乳腺癌细胞T-47D的作用研究

目的 探讨帕博西尼联合他莫昔芬对人乳腺癌细胞的影响及其相关作用机制。方法 将乳腺癌细胞T-47D随机分为对照组、帕博西尼组、他莫昔芬组、联合用药组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot检测细胞凋亡和周期相关蛋白表达,ELISA测定免疫抑制细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)、程序性死亡配体1(PD-L1)水平。结果 联合用药组细胞抑制率明显高于单药组和对照组,具有协同作用。与对照组和单药组比较,联合用药组细胞凋亡更加明显,阻滞细胞于G1/S期,Bcl-2、cyclin D1、p-Rb蛋白表达降低及Bax、cleaved-caspase3蛋白表达升高,TGF-β1、IL-10、PD-L1水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 帕博西尼联合他莫昔芬可能通过阻滞T-47D细胞周期于G1/S期、促进细胞凋亡、下调免疫抑制细胞因子发挥协同抗肿瘤作用。

miR-4727-5p通过调控EPS8L3表达抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移

目的 探讨微小RNA-4727-5p(miR-4727-5p)靶向表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3,EPS8L3)抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的分子作用机制。方法 选取2019年2月至2021年9月在南通大学附属肿瘤医院(南通市肿瘤医院)乳腺外科手术切除的38例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,以及乳腺癌细胞系MB-MDA-468、SKBR3、MCF-7、T-47D及正常乳腺上皮细胞MCF-10A,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测乳腺癌组织和细胞系中miR-4727-5p的表达。将重组质粒miR-4727-5p或空载质粒转染至T-47D细胞,分别命名为miR-4727-5p组和对照组(Ctrl组)。用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕愈合试验分别分析T-47D细胞的增殖和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4727-5p与EPS8L3 mRNA非翻译区的靶向关系。qRT-PCR和Western blot检测EPS8L3基因和EGFR信号通路蛋白p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1的表达。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织miR-4727-5p表达显著降低(P<0.01)。与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系中miR-4727-5p表达显著降低(P<0.05)。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组T-47D细胞增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,EPS8L3是miR-4727-5p的靶基因。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组EPS8L3基因表达水平明显降低(P<0.01),p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1蛋白表达水平明显降低。结论 miR-4727-5p通过靶向抑制EPS8L3基因表达,干扰EGFR信号通路转导,从而抑制乳腺癌T-47D细胞的增殖和迁移能力。

蛋白4.1家族在不同乳腺癌细胞株中的表达与定位

背景与目的:目前,已在多种人类肿瘤中发现蛋白4.1家族成员表达异常。本研究旨在通过检测蛋白4.1家族成员(4.1R/B/G/N)在3株转移能力不同的人乳腺癌细胞株MCF-7、T-47D和MDA-MB-231中的表达和定位,探讨蛋白4.1家族成员与乳腺癌细胞转移能力之间的关系。方法:采用Westernblot检测蛋白4.1家族成员在MCF-7、T-47D和MDA-MB-231细胞中的表达;免疫荧光标记对蛋白4.1家族成员在3株细胞中的表达进行定位。结果:4.1R/B/G在3种细胞系中均有表达,在T-47D细胞中的表达量均明显高于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.05);但在高转移性的MDA-MB-231细胞中它们的表达水平转而下降。4.1N在T-47D细胞中的表达量明显低于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.01),而在MDA-MB-231细胞中的表达则几乎检测不到,提示4.1N表达下调或缺失与乳腺癌细胞转移能力密切相关。4.1R/B/G/N在MCF-7和T-47D细胞中均主要定位于细胞膜及胞间连接处,同时4.1B在细胞核中也有表达;而在高转移的MDA-MB-231细胞中蛋白4.1家族成员均定位于细胞质中,提示蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变可能是乳腺癌细胞转移过程中的重要事件。结论:4.1N表达缺失和蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变与乳腺癌细胞MDA-MB-231的高转移性密切相关。