EBV miR-BART17-3p对原发免疫性血小板减少症患儿Treg/Th17平衡的影响

目的探讨EBV mi R-BART17-3p影响原发免疫性血小板减少症(ITP)患儿Treg/Th17平衡的机制。方法收集ITP患儿(ITP组,20例)和健康儿童(对照组,20例)外周血并分离CD_(4)^(+)T细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法、Western blot法、酶联免疫吸附法检测EBV mi R-BART17-3p、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、叉头框蛋白P3(Fox P3)、白细胞介素17A(IL-17A)和转化生长因子-β(TGF-β)的m RNA、蛋白表达水平及含量。采用双荧光素酶报告基因实验考察EBV mi R-BART17-3p对Tim-3表达水平的影响。将15只BALB/C小鼠随机分为空白对照组、模型组、观察组,各5只。腹腔注射抗血小板抗体MWReg30以复制ITP小鼠模型,建模4 d后观察组小鼠予尾静脉注射携带EBV mi R-BART17-3p inhibitor的腺病毒载体。细胞染色并观察形态,检测外周血中TGF-β、IL-17A含量及血小板计数,采用流式细胞仪分别检测CD_(4)^(+)T细胞中Th17和Treg水平,并计算二者百分比。结果与对照组比较,ITP组患儿外周血EBV mi R-BART17-3p表达水平显著升高,Tim-3和TGF-βm RNA表达水平显著降低(P<0.05);Tim-3 m RNA表达水平与EBV mi R-BART17-3p表达水平呈显著负相关(r=-0.732,P<0.001)。Tim-3慢病毒载体p LKO.1-sh-Tim-3(sh-Tim-3)可显著降低Tim-3、Fox P3、TGF-β水平(P<0.05)。mi R-BART17-3p mimic显著升高了CD_(4)^(+)T细胞中mi R-BART17-3p的表达水平,并显著降低了Tim-3、Fox P3、TGF-βm RNA和蛋白表达水平(P<0.05);mi R-BART17-3p mimic可显著降低TGF-β含量,Tim-3+mi R-BART17-3p过表达逆转了mi R-BART17-3p mimic对TGF-β的抑制作用。动物实验结果显示,沉默EBV mi R-BART17-3p可促进Treg分化,减少脾脏和骨髓组织中的巨核细胞计数,并显著增加外周血中血小板计数。结论EBV mi R-BART17-3p可通过Fox P3/Tim-3途径调节ITP患儿Treg/Th17的免疫失衡。

术前血清sTim-3、HMGB1水平与肌层浸润性膀胱癌根治术后预后的关系

目的探讨术前血清可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(sTim-3)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与肌层浸润性膀胱癌(MIBC)根治术后预后的关系。方法选取2019年6月至2020年6月该院收治的85例MIBC患者作为MIBC组,另选取同期在该院体检的85例健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有受试者血清sTim-3、HMGB1水平;根据血清sTim-3、HMGB1水平均值将MIBC患者分为sTim-3高表达组(≥均值)和sTim-3低表达组(<均值)、HMGB1高表达组(≥均值)和HMGB1低表达组(<均值)。对比各组血清sTim-3、HMGB1水平,以及不同sTim-3、HMGB1水平与MIBC患者病理特征的关系。采用Pearson相关分析MIBC患者血清sTim-3水平与血清HMGB1水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清sTim-3、HMGB1水平MIBC患者的生存预后情况。结果MIBC组患者血清sTim-3、HMGB1水平高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MIBC组患者血清sTim-3水平与血清HMGB1水平呈正相关(r=0.405,P<0.001)。不同年龄、性别、肿瘤最大径及是否发生淋巴结转移MIBC患者的血清sTim-3、HMGB1水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而不同TNM分期、组织分级、淋巴结状态MIBC患者的血清sTim-3、HMGB1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据血清sTim-3、HMGB1水平的均值将85例MIBC患者分为sTim-3高表达组(≥3.67 ng/mL,n=44)和sTim-3低表达组(<3.67 ng/mL,n=41)、HMGB1高表达组(≥14.91 ng/mL,n=47)和HMGB1低表达组(<14.91 ng/mL,n=38)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,sTim-3低表达组患者的3年生存曲线高于sTim-3高表达组患者(Log-rankχ^(2)=6.175,P=0.013),HMGB1低表达组患者的3年生存曲线高于HMGB1高表达组患者(Log-rankχ^(2)=4.056,P=0.044)。sTim-3高表达组与sTim-3低表达组MIBC患者的3年生存率分别为52.27%、78.05%,HMGB1高表达组与HMGB1低表达组MIBC患者3年生存率分别为55.32%、76.31%。结论血清sTim-3、HMGB1在MIBC患者中呈高表达,且二者水平呈正相关,可作为评估MIBC患者预后不良的重要指标。

食管鳞癌组织中TIM-3、FOXA2表达与其临床病理特征及预后的关系研究

目的探讨食管鳞癌组织中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)、叉头框蛋白A2(FOXA2)表达与其临床病理特征及预后的关系。方法选取87例食管鳞癌患者(食管鳞癌组)、50例慢性食管炎患者(对照组)为研究对象。分别比较食管鳞癌组与对照组、不同临床病理特征食管鳞癌患者及不同预后食管鳞癌患者TIM-3、FOXA2表达;采用Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析,应用Cox比例风险回归模型分析TIM-3、FOXA2表达与食管鳞癌预后的关系。结果食管鳞癌组TIM-3阳性表达率高于对照组,FOXA2阳性表达率低于对照组(P<0.05);不同TNM分期、有无淋巴结转移及不同浸润深度的食管鳞癌患者TIM-3、FOXA2表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);食管鳞癌组随访期间生存68例,死亡19例,死亡患者TIM-3阳性表达率高于生存患者,FOXA2阳性表达率低于生存患者(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线显示,TIM-3、FOXA2阴性表达患者总生存率较阳性表达患者高(P<0.05);Cox单因素回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、TIM-3、FOXA2是影响食管鳞癌患者预后的危险因素(P<0.05);Cox多因素分析显示,TNM分期、淋巴结转移、TIM-3、FOXA2是影响食管鳞癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中存在TIM-3、FOXA2表达异常,且与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及预后密切相关。

GATA-3小干扰RNA载体对变应性鼻炎小鼠外周血单个核细胞中辅助性T细胞亚群功能的体内调节机制

目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导的GATA-3小干扰RNA载体(si-GATA-3)对变应性鼻炎(AR)小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中辅助性T细胞1(T-helper 1,Th1)和Th2功能的调节作用。方法 构建si-GATA-3,用卵清蛋白构建BALB/c AR模型,si-GATA-3组、si-NC组(无目标基因小干扰RNA的空白对照组)分别用si-GATA-3和si-NC腹腔注射干预AR小鼠,AR组和正常对照组用等量的生理盐水干预。干预结束抽取其外周血,分离PBMCs和血浆。分别用荧光定量PCR和Western blot技术检测PBMCs中GATA-3和T-bet mRNA及其相应蛋白的表达量;用ELISA技术检测血浆中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果 si-GATA-3滴度为5×10^(8)TU/ml。成功制备BALB/C小鼠AR模型。si-GATA-3能明显改善AR小鼠的症状。si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA表达明显低于AR组和si-NC组(P<0.01),AR组和si-NC组明显高于正常对照组(P<0.01)。PBMCs中GATA-3蛋白和血浆中IL-4的表达量与GATA-3 mRNA表达相似。si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达均明显高于AR组和si-NC组(P<0.01),AR组和si-NC组二者均明显低于对照组(P<0.01)。si-GATA-3组血浆中IFN-γ的表达量高于正常对照组(P<0.05);AR组与si-NC组中IFN-γ的表达量均明显高于正常对照组和si-GATA-3组(P<0.01)。结论 si-GATA-3能有效改善AR小鼠症状,下调AR小鼠PBMCs中Th2细胞中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,同时上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,纠正Th2/Th1的免疫失衡。

T盒转录因子3和5基因多态性与指长比的关联性

目的:分析T盒转录因子3/5(TBX3/TBX5)基因5个位点(rs2242442、rs1061651、rs8853、rs11067101、rs6489956)多态性与指长比(2D∶4D)间的关联性。方法:采用体质测量法和多重PCR检测法,分析799名宁夏汉族大学生双手2D∶4D及TBX3和TBX5基因位点多态性的分布特征及其间的关系。结果:宁夏大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性;TBX3和TBX5基因5个位点基因型、等位基因频率在不同性别间的差异均无统计学意义;不论男性还是女性,5个SNPs位点多态性与2D∶4D均无显著关联。结论:宁夏汉族大学生群体2D∶4D存在显著性别差异,尚未发现TBX3和TBX5基因位点多态性与2D∶4D的形成有关。

针刺对穴“迎香-合谷”对变应性鼻炎大鼠Th1、Th2细胞因子及转录因子T-bet/GATA-3的影响

目的:探讨“迎香-合谷”对穴对过敏性鼻炎大鼠Th1、Th2相关细胞因子及转录因子T-bet、GATA-3的影响。方法:大鼠随机分成空白组、模型组、对穴组3组。建立卵清蛋白(OVA)AR大鼠模型,观察大鼠一般情况并进行行为学评分,造模成功后第2天开始对对穴组行针刺干预,1次/d,20 min/次,共10 d。干预结束后观察大鼠一般行为、行为学评分及鼻黏膜组织形态学改变,鼻腔灌洗液涂片染色后镜检计数嗜酸性粒细胞(EOS),ELISA检测大鼠血清总IgE、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-5含量,Western blot法和免疫组化法(IHC)检测大鼠鼻黏膜组织特异性转录因子T-bet、GATA-3蛋白水平和阳性蛋白的表达情况。结果:造模后,除空白组外,模型组、对穴组大鼠行为学观察评分均大于5分,提示造模成功。针刺对穴“迎香-合谷”干预后,对穴组、西药组大鼠行为学评分较模型组明显下降(P<0.05)。镜检示模型组鼻黏膜结构明显破坏,纤毛排列不连续,参差不齐,局部充血肿胀,上皮细胞大量脱落坏死,杯状细胞增生,有明显炎症细胞浸润。对穴组鼻黏膜病理程度较模型组明显减轻。与模型组比较,经对穴针刺干预后大鼠血清中的IFN-γ、IL-2、IL-12明显升高(P<0.05),而IgE、IL-4、IL-5、IL-6明显降低(P<0.05),鼻黏膜GATA-3蛋白及阳性表达明显降低,T-bet明显升高(P<0.05)。结论:针刺对穴“迎香-合谷”能有效改善AR大鼠鼻部敏感症状、达到控制鼻部炎症的目的,其机制可能是针刺对穴干预后上调了T-bet的表达,降低GATA-3水平,并促进Th1型细胞因子的生成,抑制Th2细胞的合成与分泌,从而使Th1、Th2恢复免疫平衡状态。

血清TBX3、CA15-3及CEA联合检测对乳腺癌的诊断价值

目的探讨血清TBX3、CA15-3及CEA联合检测在乳腺癌诊断中的临床价值。方法收集140例乳腺癌患者血清标本作为实验组,78例良性乳腺疾病患者血清标本作为良性对照组,100例健康女性血清标本作为正常对照组。血清TBX3含量采用ELISA法检测,血清CA15-3和CEA表达水平用化学发光法检测。所有数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果100例健康女性血清TBX3含量为1.72(1.12～2.49)ng/ml,按百分位数法(P95)确定其正常人群上限界值为5.50ng/ml。与良性对照组相比,乳腺癌组血清TBX3、CA15-3和CEA含量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。以临床分期为参照指标,TBX3、CA15-3及CEA在Ⅳ期乳腺癌患者血清中的表达水平明显高于其他各期患者(P<0.05)。血清TBX3、CA15-3和CEA对全组乳腺癌的敏感度分别为48.57%、36.43%和31.43%,特异性分别为91.03%、98.72%和100.00%,准确度分别为68.33%、58.72%和55.96%。血清TBX3、CA15-3和CEA联合检测对乳腺癌的敏感度为60.00%,特异性为89.74%,准确度为70.64%。在64例复发或转移性乳腺癌中,血清TBX3、CA15-3和CEA的敏感度分别为64.06%、68.75%、62.50%,而三者联合检测的敏感度则高达79.69%。联合检测与单项指标检测相比,诊断敏感度明显提高(P<0.05)。结论血清TBX3、CA15-3和CEA联合检测能提高乳腺癌的诊断敏感度,对乳腺癌的临床诊断、病期判断以及监测复发或转移方面均有重要价值。

慢性阻塞性肺疾病的炎症反应与Foxp3、T-bet、GATA3表达失衡有关

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、T-bet、GATA连接蛋白3(GATA3)的变化。方法将30只大鼠随机分为对照组、模型组,每组15只。模型组大鼠采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入方法建立COPD模型。模型复制成功第28天,采用ELISA检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)白介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,流式细胞术检测外周血Treg表达,分别采用逆转录PCR及Western blot法检测肺组织Foxp3、T-bet、GATA3mRNA和蛋白表达。结果模型组大鼠肺泡腔及肺间质内大量炎性细胞浸润,肺组织结构破坏。与对照组比较,模型组大鼠血清IFN-γ表达升高(P<0.01),IL-4、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg降低(P<0.05);模型组Foxp3、GATA-3mRNA、蛋白表达降低,T-bet mRNA和蛋白升高(P<0.01)。相关性分析显示,T-bet、GATA-3、Foxp3基因和蛋白表达与IL-4、IFN-γ分泌相关(P<0.05)。结论 COPD炎症反应与T-bet、GATA-3、Foxp3表达失衡有一定关系。

Foxp3在Graves病患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:研究Graves病患者外周血叉头/翼状螺旋转录因子(Foxp3)的表达,探讨其在Graves病免疫发病机制中的作用。方法:取32例Graves病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMC),经细胞表面及胞内双重染色后通过流式细胞术(FCM)测定Foxp3的表达,同时采用电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定血清甲状腺激素、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)的水平。结果:GD组治疗前外周血Foxp3阳性率显著低于正常对照组(P<0.01),且与同时测定的FT3、FT4呈显著负相关(P<0.01);治疗后,随着甲状腺功能的逐渐改善Foxp3水平虽仍低于正常对照(P<0.05)但较治疗前明显升高(P<0.05)。结论:GD患者体内存在Foxp3的表达异常,Foxp3可能参与了GD的发病,而高甲状腺素血症与Foxp3调节性T细胞两者之间有一定关联。

乳腺癌患者血清中TBX3的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨乳腺癌患者血清中TBX3的表达水平,探讨其与临床病理特征的关系。方法采用ELISA法检测142例乳腺癌患者、70例乳腺良性疾病患者和80例健康女性血清中TBX3的表达水平,并比较3者之间的差异,分析血清TBX3与乳腺癌患者年龄、月经状态、组织学分级、腋窝淋巴结及远处脏器转移、TNM分期以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)、细胞核增殖抗原(Ki-67)之间的相关性。结果 142例乳腺癌患者血清TBX3水平为2.13(1.01-6.15)ng/ml,显著高于健康对照组[1.60(0.99-2.18)ng/ml]及良性对照组[1.58(0.71-3.18)ng/ml],差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。血清TBX3表达水平与乳腺癌患者年龄、月经无关,但随着乳腺癌组织学级别增加、TNM分期进展、出现腋窝淋巴结及远处脏器转移而显著升高。此外,ER阳性及Her-2过表达者血清TBX3表达水平较ER阴性及Her-2低表达者明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Ki-67≥14%者与Ki-67<14%者、PR阳性者与PR阴性者之间血清TBX3表达水平的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论血清TBX3在乳腺癌患者血清中高表达,且与乳腺癌组织学分级、TNM分期、腋窝淋巴结及远处脏器转移、ER及Her-2密切相关,提示血清TBX3可能可以作为乳腺癌临床诊断、预后判断及随访监测的分子标记物。

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。

镁对哮喘患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4+CD25+T细胞的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+T细胞的纯度为75.2%～93.8%。(2)CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%,两者没有显著差异(P>0.05)。(3)镁(10 mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+T细胞凋亡率增加(P<0.05),但对Foxp3的表达无影响(P>0.05)。结论:镁促进CD4+CD25+T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。

叉头样转录因子3与胃癌的研究进展

叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)过去被认为是调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的关键转录因子,近来发现其在胃癌细胞中也有表达,这可能是一种新的肿瘤免疫逃逸机制。胃癌患者外周血及微环境中Foxp3蛋白及mRNA的高表达可能涉及到多种信号通路,具有重要的基因调控作用并最终使肿瘤逃逸机体的免疫杀伤,干预其表达可能成为一种有效的免疫治疗手段。

骨髓中CD4^+CD25^(high)Foxp3^+调节性T细胞与儿童急性B淋巴细胞白血病的相关性研究

目的通过检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及CD4+细胞中调节性T细胞(Treg)比例,探讨Treg与儿童B-ALL发生及预后的关系。方法用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测10名正常儿童、35例初发B-ALL患儿及68例临床缓解患儿骨髓中Foxp3mRNA水平;用流式细胞术检测上述骨髓标本中CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨髓中细胞因子白细胞介素10(IL-10)的表达情况。结果骨髓中Foxp3 mRNA表达水平在B-ALL初发患儿组是对照组的4.44倍,微小残留病(MRD)阳性组是阴性组的2.39倍;B-ALL初发患儿骨髓中Treg占CD4+T淋巴细胞的比例[中位数(M)=12.77%]较对照组(M=8.09%)增高,差异具有统计学意义(P<0.01);MRD阳性组Treg比例(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.30%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后MRD阳性组骨髓中IL-10水平[(24.69±11.73)pg/mL]显著高于MRD持续阴性组[(9.19±5.82)pg/mL,P<0.05]。结论 B-ALL初发和MRD阳性患儿骨髓中Foxp3 mRNA水平和Treg比例显著增高,且骨髓中IL-10水平与Treg的比例变化趋势相一致。Treg可作为评价B-ALL患儿预后和复发的指标,Treg可能是通过分泌抑制性细胞因子IL-10而发挥其抑制作用。

抑制miR-133b通过靶向FOXP3对PD大鼠调节性T淋巴细胞、炎性反应和神经元凋亡的影响

目的探究抑制微小RNA(microRNA,miR)-133b通过靶向叉头盒蛋白3(forkhead box protein 3,FOXP3)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的影响。方法32只PD模型大鼠随机分为PD组和PD+miR-133b antagomir组(n=16),健康大鼠16只作为对照组。尾静脉注射miR-133b antagomir(300µg)来抑制miR-133b的水平。检测和比较各组大鼠神经功能、黑质损伤、细胞凋亡、炎性反应、Treg细胞水平、miR-133b、FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;通过双荧光素酶报告验证miR-133b和FOXP3的靶向关系。结果PD组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR133b水平显著高于对照组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05)。PD+miR-133b antagomir组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR-133b水平显著低于PD组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著高于PD组(P<0.05)。miR-133b可与FOXP3靶向结合,提高miR-133b的水平显著抑制FOXP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论抑制miR-133b的水平会促进FOXP3蛋白的表达量,恢复PD大鼠模型中Treg水平,抑制黑质组织的炎性反应,缓解细胞凋亡,保护神经功能。

乳腺癌CD4^+ CD25^(high) Foxp^(3+)调节性T细胞数量和分布及Foxp3mRNA表达与肿瘤分期的相关性研究

目的研究乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3mRNA的表达变化与国际抗癌联盟(UICC)乳腺癌的TNM分期的关系。方法用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析40名健康对照者及40例乳腺癌患者(临床TNM分期T1期9例、T2期10例、T3期12例、T4期9例)外周血、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量及分布情况。实时荧光定量PCR技术检测TregFoxp3mRNA表达水平。结果乳腺癌患者外周血CD4+CD25high Foxp3+Treg占CD4T细胞的百分比为(8.91±3.06)%,高于正常健康对照组(5.84±2.63)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者TIL、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(P均<0.01)。乳腺癌组织TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度(MFI)显著高于外周血(P<0.05)。T1、T2、T3、T4期乳腺癌患者Treg比例分别为(5.81±1.89)%、(6.52±2.15)%、(9.65±3.14)%、(11.86±2.43)%。乳腺癌患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01)。相关分析显示,Treg数量与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.7 576,P<0.01);Foxp3基因mRNA表达水平与乳腺癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.6 129,P<0.05)。结论乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关。乳腺癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3mRNA的表达强度均有所不同,提示这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25high Foxp3+Treg将来可作为乳腺癌患者病情进展的重要判断指标之一。

转录因子FOXP3在肿瘤免疫中的作用

叉头样转录因子(FOXP3)是脊椎动物叉头样转录因子家族中的一员,通过调控Treg细胞的发育、分化和成熟,发挥其免疫抑制作用。在肿瘤学的研究领域中,FOXP3+Treg细胞在肿瘤免疫逃逸机制中发挥了相当重要的作用。本文就FOXP3在各类肿瘤中的表达、肿瘤免疫中的作用机制以及免疫治疗中的作用作一综述。

转录因子Tbx3在小鼠胚胎第二生心区的表达规律

目的探讨转录因子Tbx3在小鼠胚胎第二生心区(SHF)的时空表达模式,为其对SHF的调节作用提供形态学依据。方法 40只胚龄9~15 d小鼠胚胎心脏连续石蜡切片,用抗胰岛素基因增强子结合蛋白1(ISL-1)抗体、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)抗体、抗心肌肌球蛋白轻链Ⅱa(MLC2a)抗体、小鼠抗增殖细胞核抗体(PCNA)、抗Tbx3抗体进行免疫组织化学和免疫荧光双标染色。结果胚龄9 d,咽腹侧内胚层增厚,且表达Tbx3与SHF标记物ISL-1。胚龄10~12 d,咽腹侧间充质出现ISL-1阳性细胞并逐渐增多,部分细胞共表达Tbx3。动脉囊壁、心包腔背侧壁以及流出道远端壁也可见ISL-1表达,Tbx3在这些部位均呈阴性。心背侧间充质突(DMP)内可见ISL-1、Tbx3散在表达。胚龄13~15 d,DMP逐渐心肌化,同时可见Tbx3阳性细胞分布。结论 Tbx3在SHF的表达集中在咽腹侧间充质,可能参与调节SHF前体细胞的存在与增殖;但在后第二生心区(p SHF)的作用与在动脉端的SHF可能不同。

黄芩苷对泛发性脓疱型银屑病患者机体Th1/Th2失衡及T-bet/GAGA-3表达的影响

目的分析黄芩苷对泛发性脓疱型银屑病(GPP)患者机体Th1/Th2失衡、T盒子转录因子(T-bet)/GATA结合蛋白3(GAGA-3)表达的影响。方法(1)获取36例GPP患者的外周血标本以分离外周血单个核细胞(PBMC),用含0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL黄芩苷干预48 h后,检测PBMC活力以筛选适宜的药物干预浓度。(2)随机选取6例GPP患者的PBMC,加入适宜浓度的黄芩苷溶液处理细胞,以0μg/mL黄芩苷干预的细胞作为阴性对照组。干预48 h后,检测Th1和Th2比例,Th1相关细胞因子[白细胞介素(IL)-2、γ-干扰素、肿瘤坏死因子β(TNF-β)]和Th2相关细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13)表达水平,以及T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达水平。结果(1)与其他浓度黄芩苷相比,300μg/mL、400μg/mL黄芩苷干预后的PBMC存活率降低(P<0.05),故选取200μg/mL作为最适宜干预浓度。(2)与阴性对照组比较,200μg/mL黄芩苷组的Th1比例以及IL-2、γ-干扰素、TNF-β、T-bet mRNA表达水平降低,而Th2比例以及IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、GATA-3 mRNA表达水平升高(均P<0.05)。结论黄芩苷能抑制Th1转录因子T-bet的表达,下调Th1细胞水平,并增强Th2转录因子GATA-3的表达,上调Th2细胞水平,从而促进Th1细胞向Th2漂移。

布氏杆菌感染者血清Tim-3/HMGB1与相关细胞因子的变化

目的分析T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域3(Tim-3)/高迁移率族蛋白1(HMGB1)在布氏杆菌感染者中的表达及其与相关细胞因子水平的关系。方法选取2017年10月—2018年10月于新疆维吾尔自治区人民医院感染科住院的布氏杆菌感染者32例为布病组,于同期医院体检正常者30例为健康对照组,分别测定2组血清Tim-3、HMGB1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、干细胞因子(SCF)水平,同时计数外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β(TGF-β)的斑点形成细胞数(SFC)。结果布病组Tim-3、HMGB1、TNF-α、IL-1β及SCF水平均高于健康对照组[(13.54±2.02)ng/ml vs.(7.43±1.76)ng/ml,(25.84±6.82)ng/ml vs.(13.23±4.75)ng/ml,(74.54±22.66)pg/ml vs.(37.43±10.38)pg/ml,(205.84±84.82)pg/ml vs.(83.23±25.63)pg/ml,(225.25±76.72)pg/ml vs.(103.43±66.67)pg/ml,t=12.662、8.394、8.196、7.595、6.667,P均<0.01]。布病组中采用布氏杆菌重组蛋白抗原(BCSP31)为实验刺激孔TGF-β的SFC明显多于对照组(t/P=28.590/<0.001),而2组中阴性与阳性对照孔TGF-β的SFC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论布氏杆菌病患者血清Tim-3/HMGB1水平均增加,且在布氏杆菌抗原刺激后形成TGF-β的SFC明显增加。