标准曲线法与自动阈值法对TREC检测结果稳定性的影响

为评价实时荧光PCR法检测T细胞受体剪切环(TREC)时,标准曲线法或自动阈值法对不同操作批次重复检测结果稳定性的影响,采用同一批次TREC检测试剂盒重复检测标准质粒中内参基因与靶标TREC的Ct值,同时重复检测一组TREC低值样本的Ct值;分别采用标准曲线法和自动阈值法对检测结果进行分析,比较两种分析方法得到结果(Ct值)的稳定性。对标准质粒和TREC低值样本的检测结果表明,两种分析方法得到的Ct值与两个靶标的标称浓度(log10)均呈线性相关,R^(2)为1.00。两种方法获得标准质粒中内参基因Ct平均值,标准曲线法较自动阈值法平均低1.26,标准质粒中TREC基因Ct平均值,前者较后者平均低0.96。对TREC低值样本重复检测结果表明,同一样本标准曲线法获得的两种靶标Ct值的变异系数(CV)和极差均低于自动阈值法。表明在以实时荧光PCR法检测TREC靶标从而进行重症联合免疫缺陷(SCID)的筛查时,标准曲线法的分析结果稳定性优于自动阈值法。

重度苯中毒患者T细胞受体Vβ亚家族TRECs的分析

目的检测重度苯中毒患者外周血23个TCRVβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增。结果在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P<0.05)。在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P<0.05)。结论本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况。苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况。

外周血T细胞受体删除环(TRECs)定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展

骨髓移植成功的关键在于移植后免疫系统的重建状况,特别是T细胞数量及功能的重建。T细胞受体删除环(TRECs)作为胸腺近期输出naive T细胞含量的标志,在细胞中十分稳定,可作为评价胸腺近期的输出功能及T细胞免疫重建状况的指标。鉴于TRECs对评价骨髓移植术后免疫重建状况具有重要现实意义,该文就TRECs的定量检测及其在评价骨髓移植后免疫重建状况中的应用概况及进展进行综述。

抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群的胸腺近期输出功能初步探讨

目的观察抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测其胸腺近期输出功能。方法利用实时荧光定量PCR方法检测30例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群及22例正常人PBMCs中TRECs含量。结果抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群中TRECs含量为(5.67±1.55)cop ies/103PBMCs,与正常人TRECs水平(6.11±2.11)cop ies/103PB-MCs无差异(P>0.05)。结论抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群TRECs水平情况显示其胸腺近期输出功能与正常人比较无差异。

不同接苯时间苯中毒患者胸腺近期输出功能变化

为分析职业性苯中毒工人外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的含量,了解苯中毒工人胸腺近期输出功能变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR)和TaqMan方法检测苯中毒和健康人外周血单个核细胞中TRECs的含量。结果显示,TRECs含量苯中毒观察对象2·97±1·31、轻度苯中毒1·73±1·11、中度苯中毒2·28±1·44、重度苯中毒1·91±1·95,各组患者每1000个外周血单个核细胞中TRECs含量均明显低于健康组7·39±6·83(P<0·05),轻度和重度苯中毒组TRECs含量显著低于苯中毒观察对象组(P<0·05)。重度苯中毒组接苯时间>3的工人TRECs含量显著低于接苯时间≤3年者,苯中毒观察对象组接苯时间>5年的工人TRECs含量显著低于≤5年者(P<0·05)。提示苯中毒患者胸腺近期输出功能低下。

急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能状态的研究

目的研究急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能,评价白血病化疗后T细胞免疫状态。方法通过real-time PCR检测56例急、慢白血病患者化疗后外周血T细胞受体重排删除环(TREC)含量,同时检测50例正常健康人TREC水平以确定正常值范围。结果正常人TREC含量为3351.06±3711.12拷贝/105细胞,并且正常人TREC含量与年龄呈负相关。37例急性白血病患者化疗后TREC含量为307.87±433.26拷贝/105细胞;19例慢性粒细胞性白血病患者化疗后TREC含量为314.23±868.63拷贝/105细胞。结论正常人外周血TREC含量与年龄呈相关。急、慢性白血病患者化疗后TREC含量均远远低于正常人水平(P<0.001),但两组患者之间无明显差异(P>0.05)。急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能低下,T细胞免疫缺陷。

2例异基因造血干细胞移植后的植入状态监测及近期胸腺功能重建

目的监测异基因造血干细胞移植后的植入状态,评价移植后的近期胸腺功能重建。方法对1例接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)半相合亲缘供者与1例HLA全相合非亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的白血病患者,收集供者和受者术前、受者移植后1个多月、受者移植后4个多月的EDTA抗凝静脉血,同时采集10例正常健康志愿者的EDTA抗凝静脉血作为正常对照。采用STR-PCR技术检测20个常染色体STR基因座及1个性别基因座的基因型。采用实时荧光定量PCR方法检测受者不同时期和10例正常健康志愿者的T细胞受体DNA重排删除环(TREC)水平。结果 2例造血干细胞移植病例监测在移植后1个多月及4个多月均完全表现为供者源型。造血干细胞移植后1个多月及4个多月,半相合供者的白细胞及血小板恢复晚于HLA全相合供者。2例病人移植前TREC相对定量略低于年龄相近的正常对照组,移植后1个多月及4个多月TREC水平明显升高,其中HLA全相合移植病人TREC相对定量高于HLA半相合移植病人。结论移植后1个多月及4个多月供者造血干细胞在受者体内完全植活。全相合造血干细胞移植后造血及免疫重建快于半相合造血干细胞移植。

不同T细胞亚群T细胞受体删除环含量的评价

目的评价脓毒症等疾病对胸腺输出功能的影响,建立T细胞受体删除环(TREC)的检测方法。方法构建TREC质粒标准品,应用实时定量PCR法绘制标准曲线。选择不同年龄健康人的血液样本,提取其外周血单个核细胞(PBMCs),通过流式细胞术分选出不同亚群的T细胞,检测TREC含量(拷贝/Tcell)。结果 10例健康人血液PBMCs分选的不同T细胞亚群均检出TREC。CD4^+CD45RA^+及CD8^+CD45RA^+初始T细胞亚群中TREC平均含量均高于相应CD45RO^+记忆T细胞亚群的含量,差异具有统计学意义(P<0.05),且均随着年龄增长呈逐步下降趋势。结论建立实时定量PCR检测TREC的方法,用于评价胸腺T细胞的输出。