柠檬百里香叶挥发油成分分析及对肝癌细胞毒性作用

目的:分析柠檬百里香叶挥发油的主要化学成分并研究其对肝癌细胞的毒性作用。方法:采用水蒸气蒸馏法从柠檬百里香叶中提取挥发油,利用GC-MS对其化学成分进行分析。共鉴定出其中32个组分,占总出峰面积的95.44%,主要成分有冰片(28.82%)、百里香酚(14.43%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇(8.26%)、1-甲基-4-(α-羟基-异丙基)环己烯(8.23%)、樟脑萜(5.1%)等。MTT法检测其对肝癌HepG2细胞的毒性作用,激光共聚焦检测对NF-κβ65表达的影响。结果:挥发油抑制肝癌HepG2细胞生长的的IC50值为0.34%浓度;NF-κβ65表达的平均荧光强度为:对照组为323.25,2-10浓度精油组为84.18,2-11浓度挥发油组为197.93,2-12浓度挥发油组261.43。结论:柠檬百里香叶挥发油对HepG2细胞有很强毒性作用,其诱导细胞凋亡机制可能与NF-κβ65表达有关。

地不容块茎中的生物碱(英文)

目的:研究地不容Stephania epigaea Lo中具有细胞毒活性的化学成分。方法:利用反复硅胶色谱柱进行分离纯化,通过理化性质和光谱数据分析鉴定化合物结构。结果:分离得到6个生物碱,分别鉴定为千金藤素(+)-cepharan-thine(1),轮环藤宁cycleanine(2),(-)-norcycleanine(3),isochondodendrine(4),delavaine(5)和runanine(6)。结论:生物碱3～6为首次从该植物中分得,1～4体外有肿瘤细胞毒活性。

电化学检测氯酚类污染物对MCF-7细胞的毒性

本文以石墨烯修饰电极(Gr-GCE)为工作电极,以人乳腺癌MCF-7细胞为模型细胞,运用线性扫描伏安法研究了MCF-7细胞的裂解液电化学行为,确定其响应来源为黄嘌呤和鸟嘌呤的电化学氧化.跟踪描述了细胞生长曲线,研究了五氯酚(PCP)、2,4,6-三氯酚(TCP)和2,4-二氯酚(DCP)对MCF-7细胞的毒性,计算得到半数抑制效应浓度(IC_(50))值分别为77.62、174.08、449.78μmol·L^(-1),并与四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法进行比较,结果表明氯酚类污染物对MCF-7细胞活性有明显抑制作用,两种方法测得细胞毒性顺序均为:PCP>TCP>DCP,且细胞电化学法更为灵敏.

环氧化合物制备丝素凝胶材料的细胞毒性研究

利用环氧化合物与丝素蛋白在冰点以下或较高温度下作用可以获得两种不同结构和性能的凝胶材料。为研究两种材料在生物医用材料方面应用的可行性,本实验测定了两种凝胶材料的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929)细胞增殖率的影响,初步探索了两种凝胶材料的细胞毒性,发现两种凝胶材料均呈现出较高的细胞相对增殖率,细胞毒性均为1级,都在可以医用的合格范围内;另外实验还对环氧化合物和戊二醛两种交联剂的细胞毒性进行了对比,发现环氧化合物的细胞毒性明显低于戊二醛,认为环氧化合物可以作为丝素蛋白材料改性的更为安全的交联剂。

放线共生放线杆菌表面相关物质对成纤维细胞L929的细胞毒性作用

目的：探讨放线共生放线杆菌表面相关物质对成纤维细胞Ｌ９２９的细胞毒性作用。方法：采用ＭＴＴ法、细胞计数法进行细胞毒性检测。结果：放线共生放线杆菌表面相关物质可明显抑制成纤维细胞Ｌ９２９的分裂、增殖，并呈明显的剂量依赖性，１００ｍｇ／Ｌ浓度组与对照组差别显著（Ｐ＜０．０５），但不致细胞死亡。结论：放线共生放线杆菌表面相关物质对Ｌ９２９细胞有明显的毒性作用，其致病机理不同于ＬＰＳ。

壳聚糖缓释膜的制备及性能研究

目的探索壳聚糖膜的制备及该膜的缓释、降解性能,并研究该膜对成骨细胞的毒性作用。方法以溶胀度为评价指标,设计正交实验,确定制备壳聚糖膜的最佳参数。检测该膜对牛血清白蛋白的释放率及膜在溶菌酶作用下的降解率。使用噻唑蓝(MTT)法检测该膜对成骨细胞的毒性。结果当稀醋酸浓度为1%、壳聚糖浓度为2mg/mL、三聚磷酸钠浓度为6%、交联时间为1h时,膜的溶胀度最小。该膜8d时释放率达33.13%,4周内可降解36.73%。该膜对胎鼠成骨细胞的毒性作用为0级或1级。结论用最佳参数制备的膜具有良好的缓释能力、可降解性,对胎鼠成骨细胞无毒性。

不同细胞因子诱导脐血来源的CIK、NK细胞对K562细胞杀伤活性的研究

目的:了解不同细胞因子组合扩增的脐血CIK、NK细胞对人K562细胞株的杀伤活性的差异性。方法:通过SCF、FLT3L、IL2、IL7及IL15等细胞因子的不同组合扩增的脐血CIK、NK细胞,分为3组,A组(SCF+IL2+IL7+IL15)、B组(SCF+FLT3L+IL2+IL7+IL15)和C组(IL2+IL7+IL15,对照组);通过MTT法检测各组CIK、NK细胞在不同效靶比下对K562的杀伤率,计算各组的总杀伤单位。结果:经过21天培养A组体系中CIK+NK细胞的比例平均超过60%,B组CIK+NK细胞的比例平均超过70%,而C组约为50%;各组扩增的CBCIKNK细胞同组间在效靶比20∶1时对K562的杀伤率均显著高于10∶1(P<0.01)。在不同效靶比下A组CIKNK细胞对K562的杀伤率显著高于B和C组(P<0.01);C组CIKNK细胞对K562的杀伤率稍高于B组,但两组间对K562的杀伤率无显著性差异。A组总杀伤单位显著高于C组,与B组无显著差异。结论:不同细胞因子组合扩增的脐血CIK、NK细胞对人K562细胞株的杀伤活性有差异,考虑到对效应细胞的扩增效果,B组为具有最佳杀伤活性的脐血CIK、NK细胞培养体系,其中的SCF、FLT3L对CIKNK细胞诱导有协同效果。

IL-10_(23-57)-PE40可溶表达、纯化及其细胞活性

以IL-10的功能短肽(35肽,即IL10第23至57氨基酸残基)为导向部分与PE40(绿脓杆菌外毒素除去受体结合区后的剩余部分)融合分别置入pet20b(+)和pet28a(+)构建重组毒素IL102357PE40的两种表达质粒,其中置于pet20b(+)的重组毒素在BL21(DE3)pLysS中以周质分泌可溶形式表达,置于pet28a(+)的重组毒素在Rosettablue(DE3)中以高效胞质可溶形式表达;依次通过硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析、铜离子亲和层析纯化周质分泌成份,得90%重组毒素纯品;细胞活性实验表明,该重组毒素只对单核巨噬细胞有杀伤作用;细胞ELISA显示,该重组毒素对单核巨噬细胞的杀伤作用(IC50为13.9pmolL)符合绿脓杆菌外毒素的作用机理.

GSK-3β抑制剂对U251胶质瘤细胞的增殖抑制

目的探讨GSK-3β抑制剂(LiCl)对人脑胶质瘤U251细胞株增殖作用,为下一步治疗脑胶质瘤提供临床治疗靶点。方法应用MTT法,HE染色法以及免疫组化方法来观察LiCL对人胶质细胞瘤株U-251增值的抑制作用、量效关系。结果LiCL对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其药物作用时间为24、48h的IC50分别为138.98mg/ml、53.15mg/ml,且呈良好的量效关系,抑制作用与浓度呈正相关。结论LiCL是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。

CTLA-4基因-1722位点多态性与重症肌无力的相关性研究

目的研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)基因上游启动子区域-1722位点多态性与重症肌无力(MG)患者的相关性及其与患者临床表型之间的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片断长度多态性(RFLP)方法,对166例MG患者和233名健康对照者CTLA-4基因启动子区域-1722位点进行多态性检测。结果与健康对照组相比,MG患者中CTLA-4基因-1722位点CC基因型频率明显增高(P<0.01),C等位基因明显高于健康对照组(P<0.01)。患者不同性别、合并胸腺瘤否、临床分型、发病年龄等不同组之间分型差异无统计学意义。结论 CTLA-4基因-1722位点CC基因型与MG明显相关,有必要对CTLA-4基因位点多态性进行进一步研究。

Tca8113细胞exosomes的制备、鉴定及体外抗瘤作用观察

目的:探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为口腔肿瘤的免疫治疗寻找新方法。方法:采用超速离心及差异密度梯度离心等方法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,透射电镜观察其超微结构,Westernblot分析其表面蛋白成分,最后通过与树突状细胞(dendritic cells,DC)及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)等介导的细胞毒性实验来观察exosomes体外抗肿瘤效应。结果:从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原MAGE蛋白。体外抗瘤实验表明:负载exosomes的DC诱导的CTL对Tca8113细胞的杀伤率明显高于未负载exosomes的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,有显著性差异(P<0.01)。结论:舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,exosomes携带各种与肿瘤免疫相关的蛋白,负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔肿瘤的免疫治疗开拓了新的途径。

QLFATINSTL(93-102aa)是隐球菌抗原MP98 CTL优势表位

目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93-102aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3 QLFATINSTL(93-102aa)是抗原MP98上HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。

甘肃猫儿眼多糖对SMMC-7721细胞毒性机制研究

给予人SMM C-7721细胞甘肃猫儿眼多糖(浓度为10.0、1.0和0.1μg/mL)48 h,用四唑盐(MTT)法、台盼蓝拒染法和流式细胞仪进行检测.结果表明,甘肃猫儿眼多糖对人SMM C-7721细胞增殖的抑制率分别为72%、47%、31%;活细胞数为12.7%、28.6%、68.9%;细胞调亡率为26.4%、18.2%、16.3%.结果显示,甘肃猫儿眼多糖具有明显的细胞毒性和抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的功能,其机制与破坏细胞膜结构,损伤线粒体和DNA,抑制细胞分裂有关.

一种新来源天然冰片对CHL细胞的细胞毒性及染色体畸变作用研究

应用MTT法检测不同浓度的天然冰片对中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞的细胞毒性,并考察了天然冰片对CHL细胞的染色体畸变效应。发现MTT还原量、生成甲臢的光密度(OD)值与天然冰片之间存在剂量关系,24 h的50%细胞生长抑制浓度(IC50)为207.86μg·mL-1。染色体畸变试验剂量为200,100,50,25,12.5μg·mL-1,于加药(+/-S9mix)后24 h收获细胞,制备染色体。各剂量组的染色体畸变率<5%;空白及溶剂对照组的染色体畸变率均在正常范围内;而阳性对照剂诱发的染色体细胞畸变率>20%;各剂量组与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果表明:天然冰片无诱发CHL细胞染色体畸变作用。

采用流式细胞仪评价Adper Prompt自酸蚀粘结剂对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的:采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)法观察Adper Prompt(AP)自酸蚀粘结剂对人牙龈成纤维细胞(humangingival fibroblasts,HGFs)的细胞毒性。方法:HGFs在不同浓度AP稀释液(1.00、0.50、0.25μl/L)中培养HGFs至4 d及7 d后,采用流式细胞仪测定其不同增殖周期时相的DNA百分含量和凋亡率,计算细胞增殖指数(CPI)。结果:加入AP稀释液后1.00μl/L组中二倍体细胞4 d和7 d后的凋亡峰较明显,其余各实验组凋亡率极低。4 d后1.00μl/L组流式细胞仪结果可见非整倍体细胞增殖峰。4 d和7 d后,和对照组相比,0.25μl/L组和0.50μl/L组的G2/M期的DNA百分含量明显增高(P<0.05);4 d后1.00μl/L组S期的DNA百分含量明显增高(P<0.05)。同一浓度组7 d后的CPI低于4 d后的。结论:AP自酸蚀粘结剂在体外对人牙龈成纤维细胞有一定程度的细胞毒性,提示在临床应注意保护牙龈等软组织。

CTLA-4基因启动子区-1661和-318位点多态性与胃癌的关系

背景:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)是一种免疫调节分子,可通过降低T细胞活性,抑制机体的抗肿瘤免疫反应。目的:探讨CTLA-4基因启动子区-1661和-318位点多态性与胃癌的关系。方法:121例无血缘关系的胃癌患者和236名正常对照者纳入研究,分别采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和扩增不应突变系统(ARMS)-PCR检测CTLA-4基因启动子区-1661和-318位点多态性。结果:胃癌组-1661位点AA基因型和A等位基因频率显著低于正常对照组(73.6%对83.9%,P=0.024;85.1%对91.1%,P=0.022);而-318位点CC基因型和C等位基因频率与正常对照组相比无明显差异。管状腺癌患者CTLA-4基因启动子区-1661位点AA基因型和-318位点CC基因型频率显著低于正常对照组(64.1%对83.9%,P=0.001;76.6%对87.3%,P=0.047)。结论:CTLA-4基因启动子区-1661位点基因多态性与胃癌呈显著负相关,-1661和-318位点多态性与管状腺癌呈显著负相关。

应用四唑盐比色法对义齿软衬材料的细胞毒性评价

四唑盐比色法(MTT assay)是通过比色测定细胞数量和活性的新方法.其敏感性与细胞计数法、同位素标记法相似.本文采用该法检测了三种义齿软衬材料(可见光固化、室温固化及热固化义齿软衬材料)对细胞的毒性作用.结果表明,3种材料的50%浓度浸渍液的细胞毒性程度为1～0级,100%浓度浸渍液的细胞毒性程度为2～0级,显示出较低的细胞毒性.

有机锗蒽醌酰胺和有机锗萘酚酯倍半氧化物的合成及对体外培养癌细胞的抑制作用(英文)

目的合成更强抗癌活性的有机锗化合物,研究分子结构和抗癌活性之间的关系。方法首先合成了4种含蒽醌酰胺和萘酯基团的新型有机锗化合物,用IR,1HNMR和元素分析研究它们的结构。用MTT方法研究化合物对人白血病癌细胞(K562)的抑制作用。结果4种化合物对K562的IC50分别为11.2,16.3,4.8,9.3μmol/L。而参照物2-氨基蒽醌和1-萘酚的IC50分别为771和282μmol/L,Ge-132对体外培养细胞几乎没有抑制作用。结论对Ge-132进行结构修饰,合成的新型有机锗化合物具有抑制体外培养癌细胞增殖的作用。

牙科合金材料有效细胞毒性定量分析计算法

本文介绍一种牙科合金材料细胞毒性定量分析计算方法.其基础工作是先用MTT试验法测定出牙科合金材料组成中常用9种金属离子的50%细胞致死量、再用ICP分析法(电感偶合等离子体分析法)测定有关合金材料浸渍液中各种基本金属元素的含量.然后按照本文所引出的公式计算这些合金材料的有效细胞毒性.按此方法计算出了19种合金材料浸渍液的细胞毒性,与它们通过MTT试验法直接测到的细胞毒性进行比较,证明了该方法的有效性.

免疫检查点抑制剂在乳腺癌免疫治疗中的研究进展

免疫逃逸是肿瘤细胞通过多种机制逃避机体免疫系统的识别和攻击,从而得以在体内生存和增殖的现象,免疫检查点蛋白表达的失调是乳腺癌实现免疫逃逸的主要机制。细胞毒性T淋巴细胞抗原4和程序性细胞死亡蛋白1/程序性细胞死亡蛋白配体1是乳腺癌重要的免疫检查点。免疫检查点抑制剂通过阻断免疫检查点相关通路,可解除这种抑制作用,重新活化免疫细胞,帮助其清除癌细胞,恢复机体抵抗肿瘤免疫反应的能力。目前,免疫检查点抑制剂在乳腺癌免疫治疗的临床应用中取得了重大进展,有望成为乳腺癌的新型治疗手段。