白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

龙血素B通过P38MAPK信号通路调控MC3T3-E1成骨分化和骨形成的机制

目的:探究龙血素B对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)成骨分化和骨形成的影响以及其通过P38MAPK信号通路调控成骨分化和骨形成的机制。方法:培养MC3T3-E1细胞,加入不同浓度(0、15、30、60、90、120μmol/L)龙血素B,采用CCK8法和流式细胞术(FCM)检测不同时间(24h、48h、72h)MC3T3-E1细胞增殖能力和凋亡情况,确定龙血素B促MC3T3-E1细胞成骨最佳的药物浓度及作用时间。培养MC3T3-E1细胞并分为空白组(不作干预),龙血素B组(加入龙血素B共培养),龙血素B+阻断剂组(加入龙血素B和P38抑制剂SB203580共培养),进行干预实验;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒测定各组细胞ALP活性,qRT-PCR法检测各组细胞骨桥蛋白(OPN)基因、骨钙素(OCN)基因、骨唾液蛋白(BSP)基因表达水平,茜素红染色法观察各组细胞骨形成能力。结果:龙血素B可促进MC3T3-E1细胞增殖并抑制其凋亡,效果与浓度和干预时间相关,在90μmol/L浓度下干预48h促MC3T3-E1细胞生长作用最强;干预结束后第1、3、5天,龙血素B组细胞ALP活性较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞ALP活性较龙血素B组降低(P<0.05);龙血素B组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较龙血素B组降低(P<0.05);干预结束后第21天,龙血素B组细胞钙化结节区域面积较空白组增大,龙血素B+阻断剂组细胞钙化结节区域面积较龙血素B组减小(P<0.05)。结论:龙血素B可提高MC3T3-E1细胞增殖活性,并通过激活P38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化和骨形成。

消银汤联合走罐疗法对气滞血瘀型银屑病患者p38MAPK/Th17信号通路相关细胞因子的影响

目的探讨消银汤联合走罐疗法对气滞血瘀型银屑病患者丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)/辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)信号通路相关细胞因子的影响。方法将2018年6月—2021年6月在江西省皮肤病专科医院门诊就诊的90例气滞血瘀型银屑病患者纳入研究,按随机数字表法分为观察组、对照1组和对照2组,各30例。观察组患者给予消银汤联合走罐疗法治疗,对照1组患者口服消银汤治疗,对照2组患者给予走罐疗法治疗。比较3组患者的治疗效果、不良反应及复发情况,比较3组患者治疗前后的中医证候积分、p38MAPK基因相对表达量、白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-22(Interleukin-22,IL-22)、白细胞介素-23(Interleukin-23,IL-23)、全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度。结果观察组总有效率显著高于对照1组和对照2组(P<0.05);3组治疗后红斑、鳞屑、浸润、瘙痒程度显著低于治疗前,且观察组显著低于对照1组和对照2组(P<0.05);3组治疗后p38MAPK基因相对表达量、IL-17、IL-22、IL-23显著低于治疗前,且观察组显著低于对照1组和对照2组(P<0.05);3组治疗后全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度显著低于治疗前,且观察组显著低于对照1组和对照2组(P<0.05);3组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组复发率显著低于对照1组和对照2组(P<0.05)。结论消银汤联合走罐疗法可抑制气滞血瘀型银屑病患者p38MAPK/Th17信号通路相关细胞因子的表达,减轻炎症反应,提高免疫功能,同时缓解患者症状及改善血液流变学效果较好,复发率低。

抗淋巴细胞激活基因-3和抗程序性细胞死亡因子-1的阻断导致CD8^(+)T细胞中细胞毒性和耗竭基因模块的共同表达促进抗肿瘤免疫

Relatlimab(rela,抗淋巴细胞激活基因-3)与nivolumab(nivo;抗程序性细胞死亡因子-1)联合用于治疗晚期黑色素瘤被证明是安全且有效的。该课题组设计了一项试验(NCT03743766),让晚期黑色素瘤患者接受rela、nivo或rela联合nivo,以探讨rela联合nivo的免疫机制。对这项正在进行的试验中的生物样本分析显示,rela联合nivo增强了CD8^(+)T细胞受体信号传导能力,并改变了CD8^(+)T细胞的分化,从而在保持耗竭特征下提高了细胞毒性。经过rela联合nivo治疗后,克隆扩展的CD8^(+)T细胞的效应功能上调。该研究结果发现,肿瘤内的rela联合nivo CD8^(+)T细胞特征与良好的预后相关联。此外,这一肿瘤内的rela联合nivo特征在外周血中也得到了验证,表现为CD38^(+)T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3^(+)CD8^(+)T细胞频率的升高。

基于T.38的实时IP传真网关的设计与实现

介绍了实时传真在IP网上的应用模型，并详细描述了基于T.30与T.38协议关于实时传真的设计与实现，讨论了在实现中如何保证传真的质量。

IL-38对类风湿关节炎患者辅助性T细胞17转录因子的影响

目的研究类风湿关节炎(RA)患者白细胞介素-38(IL-38)的表达水平,并探讨IL-38对辅助性T细胞17(Th17)细胞转录因子(RORC、STAT3)的影响。方法收集RA患者30例,为RA组,30例体检中心的健康人群作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR检测IL-38、RORC、STAT3mRNA水平;ELISA法检测血清IL-38蛋白水平;采用t检验或Mann-Whitney秩和检验。结果(1)实时荧光定量PCR结果显示RA患者IL-38基因表达水平(2.92±1.96)显著低于正常对照组(5.79±3.55),差异有统计学意义(Z=-1.28,P<0.05);RA患者IL-38蛋白表达水平(0.44±0.03)显著低于正常对照组(0.72±0.58),差异有统计学意义(Z=-1.59,P<0.05);(2)RA患者RORC、STAT3基因表达水平(6.29±3.98)、(2.72±2.11)显著高于正常对照组(1.6±0.95)、(0.69±0.67),差异有统计学意义(Z=-1.36,P<0.05;Z=-1.24,P<0.05);且RORC、STAT3基因表达水平分别与IL-38水平呈负相关(r=-0.31,P<0.05;r=-0.25,P<0.05);(3)在体外实验中,RA患者外周血中加入IL-38后,RORC、STAT3基因表达水平(1.87±1.59)、(0.58±0.13)较RA患者(6.29±3.98)、(2.72±2.11)明显下降,差异有统计学意义(Z=-1.48,P<0.05;Z=-1.37,P<0.05)。结论在RA患者体内IL-38浓度下降,使得Th17细胞转录因子RORC、STAT3表达增加,可诱导经典JAK/STAT3信号传导通路活化,促进Th17细胞大量分化,导致关节滑膜增殖、软骨侵蚀和全身性的炎症反应,从而引发RA的发病。

慢性HBV感染者CD8^+T细胞CD95、CD38、HLA-DR表达的变化和意义

目的检测慢性HBV感染者外周血CD8^+T细胞CD95、CD38、HLA-DR表达水平,探索HBV感染过程中CD8^+T细胞活化与耗竭的相关性。方法收集未经抗病毒治疗的HBV感染者76例及健康对照者14例外周血,根据外周血HBV DNA水平分为高病毒载量组与低病毒载量组;使用流式细胞术检测HBV感染者CD8^+T细胞CD95、CD38、HLA-DR的表达以及共表达水平,同时进行相关性分析。结果与健康对照组比较,慢性HBV感染者CD8^+T细胞CD95、HLA-DR的表达、CD38和HLA-DR的共表达水平显著升高(P<0.01);CD8^+T细胞CD95与HLA-DR表达呈正相关(P<0.05)。结论慢性HBV感染过程中CD95的表达可能对外周血CD8^+T细胞的耗竭过程发挥重要作用,而HLA-DR的表达升高和CD38+HLA-DR+CD8^+T细胞频率的升高提示CD8^+T细胞仍然维持着一定的效应潜能。

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。

过表达Grx1抑制HEK293T细胞中H2O2诱导的p38MAPK信号通路

谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,经RT-PCR和Western印迹验证,细胞转染后实现了Grx1的过表达;以不同浓度H2O2为损伤因素,建立细胞氧化应激模型,检测过表达Grx1后细胞存活率,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的变化,观察过表达Grx1后细胞的抗氧化能力;用终浓度100μmol/L H2O2作用于细胞,利用Western印迹检测120 min内HEK293T细胞中p38MAPK磷酸化水平.实验结果表明,HEK293T细胞过表达Grx1后,缓解了细胞的氧化应激损伤;转染空载体组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后5min开始升高,15min达到最高值,并可维持至120min左右;而过表达Grx1组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后各时间段没有明显改变,提示Grx1通过抑制H2O2诱导的p38MAPK信号通路激活发挥其抗氧化作用.

p38 MAPK信号通路在B7H1-Ig融合蛋白诱导Tr1细胞分化中的作用

目的探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在B7H1-Ig诱导Ⅰ型调节性T细胞(Tr1)分化过程中的作用。方法以预包被而固相化的小鼠B7H1-Ig融合蛋白加抗CD3单克隆抗体(单抗)刺激新鲜分离的C57BL/6小鼠初始CD4+CD62L+T细胞,诱导其向Tr1细胞分化。Western blotting检测MAPK信号通路(ERK1/2、p38 MAPK、JNK)的活化状况。在B7H1-Ig开始刺激时分别加入ERK1/2、p38和JNK通路特异性抑制剂PD98059、SB203580和SP600125,分别采用ELISA法、混合淋巴细胞反应(MLR)、流式细胞术和Western blotting分析检测抑制MAPK信号对B7H1-Ig刺激的CD4+T细胞产生的细胞因子分泌格局、功能及Foxp3表达的影响。结果 B7H1-Ig联合抗CD3单抗激活并诱导一群IL-10+IFN-γ+IL-5+IL-4low/-IL-2low/-Foxp3-Tr1细胞,通过分泌抑制性细胞因子IL-10发挥免疫抑制功能。Western blotting检测结果显示B7H1-Ig可激活CD4+T细胞中的p38 MAPK信号通路,对ERK1/2和JNK信号通路无明显影响。抑制p38 MAPK活性,可使B7H1-Ig诱导的CD4+T细胞IL-10和IL-5的分泌减少、免疫抑制功能减弱,促进B7H1-Ig刺激的CD4+T细胞向CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)分化。结论 p38 MAPK信号通路的活化或抑制是参与调控由B7H1-Ig诱导的Tr1细胞分化及其与CD4+CD25+Foxp3+Treg之间相互转化的重要分子机制。

AIDS患者高效抗逆转录病毒联合治疗后外周血CD_8^+CD_(38)^+T细胞与病毒载量同步变化

目的 了解艾滋病 (AIDS)患者高效抗逆转录病毒联合治疗 (HAART)前后外周血CD+ 3 8抗原在CD+ 8T淋巴细胞上的表达情况。方法 应用流式细胞仪采用双色荧光抗体检测技术检测CD+ 8CD+ 3 8T细胞 ;用罗式核酸扩增荧光定量聚合酶链反应 (PCR)法检测血浆病毒载量 (VL)。结果 HAART后 2周内CD+ 8CD+ 3 8T细胞数与VL开始同步下降 ,12周后 83%AIDS患者的VL降至 <5 0 0拷贝 /ml,同时CD+ 8CD+ 3 8T细胞计数与治疗前相比非常明显地降低 (P <0 0 0 1)。而且 6 3%的AIDS患者在血浆VL低于检测水平时 ,其CD+ 8CD+ 3 8T细胞数仍继续下降 (与VL开始达到检测水平以下时相比 ,P <0 0 0 1)。结论 AIDS患者在HAART开始后 ,CD+ 8CD+ 3 8T细胞数与VL快速下降 ,在 2 4周左右降至正常水平 ;并且CD+ 8CD+ 3 8T细胞数在VL达到检测不到时仍继续下降 ,提示在血浆VL低于检测水平时 ,CD+ 8CD+ 3 8T细胞数能够作为判断病毒是否复制的标记。

p38 MAPK对冲击波促进T淋巴细胞增殖和分泌IL-2的作用

目的：研究有丝分裂原激活蛋白激酶p38（p38MAPK）对冲击波促进激活的T淋巴细胞增殖及分泌IL-2的作用。方法：预先用p38MAPK抑制剂（SB203580,20μmol·L^-1）分别与人外周血单个核细胞（PBMC）和Jurkat T细胞共同培养,同时设立不含SB203580的阴性对照组,再用冲击波和PHA或抗-CD3/抗-CD28抗体的亚刺激量作用,检测T淋巴细胞增殖和分泌IL-2的变化。采用免疫印迹法,用抗-p38MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK（Thr180/Tyr182）抗体,测定冲击波作用后Jurkat T细胞上的p38MAPK的表达及磷酸化。结果：与未用冲击波作用组比较,被PHA激活的PBMC细胞,在能量密度为（0.180±0.015）mJ·mm^-2的冲击波作用100、150、200、250、300、330和360次时,细胞对3H-TdR掺入量明显增高（P〈0.01）。加入SB203580的PHA激活的PBMC细胞,在上述同样强度的冲击波作用时,细胞对3H-TdR掺入量低于没有加入SB203580对照组（P〈0.01）。与未受冲击波作用组比较,被CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在上述同样强度的冲击波作用时,细胞上清液中的IL-2活性明显增高（P〈0.01）。加入SB203580的CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在该强度的冲击波作用时,细胞上清液中的IL-2水平低于比未加入SB203580的对照组（P〈0.01）。50-250次的（0.180±0.015）mJ·mm^2的低能冲击波可使Jurkat T细胞的p38MAPK磷酸化,p38MAPK的磷酸化程度随着冲击波作用次数的增加而增加。结论：SB203580可抑制低能冲击波对激活的T淋巴细胞的增殖及分泌IL-2作用;低能冲击波通过激活T淋巴细胞内的p38MAPK,促进激活的T淋巴细胞增殖及分泌IL-2。

冲击波通过ATP释放、P2受体及激活p38MAPK激酶促进T细胞增殖和分泌白细胞介素2(英文)

背景:以往研究发现,冲击波可通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK),增强CD3和CD28激活的T细胞增殖和分泌白细胞介素2。目的:观察细胞内的ATP向外释放,是否为冲击波增强T细胞功能的潜在机制。设计:以细胞为观察对象,分组对照重复测量观察。单位:吉林大学第一医院骨科研究室。材料:KDE-2001体外冲击波碎石机(北京中科建安医疗技术公司制造)。MAPKp38抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,Camarillo,CA);检测磷酸化的p38MAPK试剂盒(Cell Signaling Tehchmology,Inc.U.S.A.);P2受体抑制剂:suramin50mg(BIOMOL ResearchLaboratories Inc,PA),用1.7492mL的IMDM培养基将50mg的suramin配成0.02mol/L的溶液。ATP酶:apyrase200U(Sigma,U.S.A.);P2X7受体阻滞剂:KN-62(BioSource Inc.,Camarillo,CA);p38MAPK抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,USA*542Flynn Roas,Camarillo,CA);检测ATP的生物荧光试剂盒/ATP BioluminescenceAssay Kit CLSⅡ(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)。方法:实验于2005-01/2006-12在吉林大学第一医院骨科研究室完成。①采用体外冲击波碎石机(工作电压7kV、电容0.3μF时,冲击波正相压强23MPa,能量密度0.18mJ/mm2)作用于T细胞,冲击波作用50￣400次。②用特异性的ATP试剂盒检测低能冲击波是否引起T细胞(人外周血单个核细胞和Jurkat T细胞)分泌ATP。③设无拮抗剂和抑制剂的阴性对照组。用人外周血单个核细胞检测低能冲击波对激活的T淋巴细胞增殖的影响,用Jurkat细胞检测低能冲击波对T淋巴细胞分泌白细胞介素2的影响,用抗-p38MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体通过免疫印迹法测定Jurkat T细胞上的p38MAPK的表达及磷酸化。主要观察指标:T细胞外的ATP含量、细胞悬液中的白细胞介素2的含量、细胞的增殖和细胞p38MAPK的磷酸化程度。结果:①冲击波作用100,150,200,250,300,360和400次时较无冲击波作用时细胞外的ATP的含量明显增加(P<0.01),并且ATP的增加含量和冲击波的作用次数有依从关系。②加入apyrase,KN-62,suramin的植物血凝素激活的外周血单个核细胞细胞或CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在能量密度为0.18mJ/mm2的冲击波作用100,150,200,250,300,330次时,细胞对3H-TdR掺入量比没有加入apyrase、KN-62或suramin的阴性对照组低(P<0.01),细胞上清液中的的细胞介素-2的活性含量表现为明显增高(P<0.01)。加入ATP、KN-62或suramin后,冲击波激活Jurkat T细胞的p38MAPK的程度明显降低。结论:①低能冲击波能损伤细胞膜而不损伤其他细胞器,引起T淋巴细胞内的ATP过多向细胞外分泌,细胞外过量的ATP过多地激活了P2X7受体,激活细胞内的大量的p38MAPK,最后磷酸化的p38MAPK作为协同刺激因子增强激活的T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素2。②在低能冲击波对T淋巴细胞的功能调节上,T细胞分泌的ATP起到非常重要的作用。

雷公藤内酯醇(T10)通过抑制脊髓背角内p38-MAPK的磷酸化发挥镇痛作用的机制研究

目的:观察鞘内给予雷公藤内酯(triptolide,T10)对于慢性炎性痛和神经病理性痛模型大鼠脊髓背角小胶质细胞内p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)的磷酸化水平的影响。方法:采用大鼠足底注射完全弗式佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)构建慢性炎性痛模型,L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)和坐骨神经分支选择性结扎(spared nerve injury,SNI)的方法制作慢性神经病理性痛模型。利用von Frey丝刺激法连续观察造模后大鼠的痛行为变化;应用免疫荧光染色方法观察大鼠腰膨大节段胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和电离钙绑定衔接分子1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)的表达水平;应用Western Blot方法观察大鼠腰膨大节段p38 MAPK的磷酸化水平。结果:(1)行为学结果显示:CFA、SNL、SNI模型大鼠机械性痛阈均明显降低,且术后一周内与正常对照组相比均保持在较低水平(P<0.01)。从术后第1 d起鞘内连续给予T10至第7 d,分别观察到T10能够明显提高上述模型大鼠手术侧后足的机械性痛阈(P<0.05);但T10在SNL模型和SNI模型大鼠中的效果要弱于CFA引起的慢性炎性痛(P<0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示:CFA、SNL和SNI模型大鼠腰膨大脊髓背角内GFAP、Iba-1的表达明显高于正常对照组,而p-p38 MAPK阳性产物主要表达于小胶质细胞内。(3)Western Blot结果显示:造模后7 d脊髓背角内p-p38 MAPK的表达明显上调,鞘内给予T10后可以显著下调脊髓背角内p38的磷酸化水平(P<0.05)。结论:鞘内给予T10有效缓解由于CFA、SNL和SNI诱导的慢性痛模型大鼠的机械性痛阈的机制可能是通过下调脊髓背角内p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,进而达到抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的活化。其次,T10对不同类型的疼痛模型的作用效果存在差异,对由CFA引起的慢性炎性痛的作用效果要强于由SNL和SNI诱导的慢性神经病理性痛。

高糖激活p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导CD8^+T淋巴细胞表达辅助性T淋巴细胞1型趋化因子受体3

目的探讨高糖对CD8+T淋巴细胞中辅助性T淋巴细胞(Th)1型趋化因子受体3(CXCR3)表达水平的影响及其可能的机制。方法体外不同浓度葡萄糖(5、10、25、50mmol/L)培养CD8+T淋巴细胞,检测其CXCR3mRNA及蛋白的表达水平变化。同时检测高糖环境下(50mmol/L葡萄糖)CD8+T淋巴细胞氧化应激信号通路相关蛋白P65、P38、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达及磷酸化水平,并观察使用相应抑制剂阻断各氧化应激信号通路对CXCR3mRNA及蛋白表达的影响。结果随着培养基中葡萄糖浓度的升高,5、10、25、50mmol/L葡萄糖处理的CD8+T淋巴细胞中CXCR3mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,两两比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),该作用呈浓度依赖性增强。高糖组(50mmol/L葡萄糖)磷酸化的P65、P38、ERK、JNK表达水平均显著高于与正常组(5mmol/L葡萄糖,P值均<0.05)。加入P38信号通路抑制剂SB203580后,高糖环境下CD8+T淋巴细胞的CXCR3mRNA及蛋白的表达水平显著低于高糖组(P值均<0.05),至正常组水平(P值均>0.05);而加入P65信号通路抑制剂BAY11-7082、ERK信号通路抑制剂PD98059、JNK信号通路抑制剂SP600125后,高糖环境下CD8+T淋巴细胞的CXCR3mRNA及蛋白的表达水平仍显著高于正常组(P值均<0.05),与高糖组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论高糖可能通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路诱导CD8+T淋巴细胞表达CXCR3,参与糖尿病周围神经病变发病中CD8+T淋巴细胞的趋化过程。

阻断p38丝裂原激活蛋白激酶通路抑制脾脏树突状细胞介导的OT-Ⅱ细胞增殖

目的探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对脾脏树突状细胞（DC）介导的CD4＋-鸡卵清蛋白转基因小鼠T（OT-Ⅱ）细胞增殖的影响。方法应用CD11c＋免疫磁珠从C57BL/6小鼠脾脏中分选DC。应用CD4＋分离试剂盒从OT-Ⅱ转基因小鼠脾脏中分选出OT-Ⅱ细胞。p38MAPK抑制剂SB203580处理DC后,脂多糖（LPS）刺激。流式细胞术检测DC表面共刺激分子（CD80、CD86）、MHCⅡ分子的表达,及DC提呈组织相容性复合体Ⅱ类分子Eα链第52~68位抗原肽（Eα52-68）的能力。ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6、转化生长因子β（TGF-β）的水平。DC经OVA323-339多肽处理后,与OT-Ⅱ细胞共培养,采用流式细胞术检测OT-Ⅱ细胞增殖。结果分选后获得较高纯度的DC和OT-Ⅱ细胞（〉90%）。SB203580降低DC表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达,抑制其抗原提呈功能,同时TNF-α、IL-1α、IL-6表达下调,TGF-β表达上调,并且抑制DC介导的OT-Ⅱ细胞增殖。结论 SB203580阻断p38MAPK通路,可能通过调节DC表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达及其抗原提呈功能和细胞因子的合成,从而抑制DC介导的OT-Ⅱ细胞增殖。

p38 MAPK的活化促进小鼠T细胞增殖

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并测定其增殖的相关指数;采用碘化丙锭染色分析SB203580和茴香霉素对ConA或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的影响。结果显示:0.5μmol/L～15.0μmol/L SB203580对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);该浓度范围的SB203580能够呈明显剂量依赖性地阻止ConA或PDB加Ion诱导的T细胞进入S期或G2/M期(r_s=-0.98,P<0.01;r_(G2)/M=-0.97,P<0.01)。茴香霉素浓度在0.01～0.5ng/ml时能够增强ConA对T细胞的促增殖作用,并能够促进ConA诱导的T细胞进入G2/M期,促进PDB加Ion诱导的T细胞进入S期。以上提示p38信号通路的活化在促进小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。

100t EBT电弧炉-LF-CC流程生产38CrMoAl钢的工艺实践

渗氮钢38CrMoAl(%:0.35～0.42C、0.20～0.45Si、0.30～0.60Mn、1.35～1.65Cr、0.15～0.25Mo、0.70～1.10Al)由100 t EBT DC EAF-100 t LF-200 mm×200 mm,150 mm×150 mm方坯连铸机流程生产。通过出钢过程加60%Al,LF加40%Al,高碱度渣吹氩精炼,精炼末期喂Φ16 mm 28Ca-55Si线,加大中间包浸入式水口内径,全程保护浇铸等工艺措施成功生产出38CrMoAl钢,可连浇5炉钢,轧材总氧含量为(5～8)×10^(6),各项性能均满足用户要求。

HCV/HIV共感染者T细胞表面CD38分子的表达水平

丙型肝炎病毒（HCV）/人类免疫缺陷病毒（HIV）共感染对丙型病毒性肝炎的病情进展有影响,其机制尚不清楚。CD38分子是T细胞表面活化标志之一[4,5],在HCV/HIV共感染者中T细胞的活化是否发生变化尚无定论。我们于2012-2013年通过对比分析单独HCV感染组和HCV/HIV共感染组患者T细胞表面CD38分子的表达水平,了解HCV/HIV共感染者的T细胞活化的变化，报告如下。