Gabra3通过AKT/mTOR途径促进膀胱癌T24细胞侵袭和迁移

目的:探究γ-氨基丁酸受体亚基α-3(Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-3,Gabra3)基因对膀胱癌T24细胞凋亡、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:TCGA数据库分析Gabra3基因在膀胱癌中的表达以及转移和生存的相关性。建立Gabra3过表达和Gabra3突变的T24细胞株,根据转染质粒不同,分为空白T24细胞(Control)、空pDONR223载体转染T24细胞(NC)、野生型Gabra3过表达T24细胞株(wt-Gabra3)、突变型Gabra3 T24细胞株(mut-Gabra3)。在回补实验中,分为转染突变型Gabra3 T24组(mut-Gabra3)、转染空pDONR223载体mut-Gabra3组(mut-Gabra3-NC)、转染野生型Gabra3过表达组(mut-Gabra3+wt-Gabra3)。用TUNEL染色检测T24细胞凋亡,细胞划痕和Transwell分别检测T24细胞迁移和侵袭,Western blot检测AKT/mTOR通路相关分子生物表达水平。结果:Gabra3基因在膀胱癌中显著高表达(P<0.05),生存曲线证实远处转移存在的患者生存期明显较短(P<0.05)。成功构建Gabra3过表达和突变的T24细胞株。与Control组相比,wt-Gabra3组细胞凋亡能力显著降低,迁移、侵袭能力显著增强(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞凋亡显著增加,侵袭能力显著减弱(P<0.05);wt-Gabra3组细胞p-AKT、p-mTOR、p-4E-BP1、p-S6K蛋白表达均显示上凋(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞上述蛋白无差异。在回补实验中,过表达wt-Gabra3的mut-Gabra3突变T24细胞凋亡能力受到抑制(P<0.05),迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),并且该组细胞AKT/mTOR通路相关分子显著激活(P<0.05)。结论:外源性的未编辑的Gabra3可以促进膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭能力,并且可能与激活AKT/mTOR途径通路密切相关。

基于基因表达芯片和实验验证葛根素降低膀胱尿路上皮癌T24细胞IL6表达及抑制细胞增殖的作用

目的探讨葛根素抑制膀胱尿路上皮癌T24细胞增殖的作用机制及潜在作用靶点。方法CCK8实验验证葛根素对T24细胞的增殖抑制作用。火山图和热图对芯片数据进行质量控制。对基因表达芯片实验得到的差异表达基因列表进行KEGG、GO通路富集分析、蛋白质相互作用(PPI)和上游转录因子预测,得到关键作用靶点及通路并进行相关验证。结果葛根素抑制T24细胞的增殖活力,这种抑制作用和浓度成正比,半数抑制浓度为218μmol·L^(-1)。KEGG通路富集分析显示差异基因主要富集在细胞生长和增殖相关通路,GO通路富集分析显示差异基因主要富集在蛋白质折叠、DNA复制和肿瘤细胞坏死相关通路。PPI分析得到关键作用靶点IL6。IL6在病理分期Ⅲ、Ⅳ期的表达明显高于Ⅱ期,并且PCR实验证明葛根素可降低T24细胞中IL6的表达。GSEA分析显示IL6与上皮细胞增殖相关。上游转录因子预测得到CENPA,分子对接结果显示葛根素和CENPA之间对接良好。结论葛根素能抑制T24细胞的增殖活力,其作用机制可能是葛根素和CENPA结合,降低IL6的表达进而影响蛋白质折叠、DNA复制、肿瘤细胞坏死和增殖相关通路,最终抑制T24细胞增殖。

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应。本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化。结果:在12.5μmol/L至200μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25μmol/L～50μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6h和12h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P<0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化。结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。

猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因,将扩增产物与pGEM-T easy载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建T24基因的pGEX-4T-1原核表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blotting;用所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA检测血清抗体,验证其免疫原性。结果显示。所克隆的T24基因片段长716 bp。含有1个678 bp的开放阅读框,其编码226个氨基酸,与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％;表达的融合蛋白大小为40 ku,并能被猪囊虫阳性血清识别;免疫小鼠在免疫1周后即可检测到血清抗体,第30 d达到较高水平,表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。

雷帕霉素对膀胱癌T24细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨雷帕霉素对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将T24细胞贴壁培养于10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。取对数生长期细胞,随机分为处理组(加入浓度为10～1000nmol/L的雷帕霉素)和对照组(不加药物),每天更换RPMI1640培养液。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的变化。结果雷帕霉素对T24细胞有增殖抑制作用,呈剂量依赖关系。transwell法检测结果显示,雷帕霉素处理后的T24細胞体外侵袭能力明显下降,与雷帕霉素呈剂量依赖性。结论雷帕霉素具有抑制膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的作用。

黄芩素通过失活JAK/STAT信号通路抑制T24细胞迁移侵袭

目的:研究黄芩素对膀胱癌细胞的细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:运用Transwell法检测细胞迁移侵袭量;Western blot检测细胞中uPA、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、p-JAK2和p-STAT的蛋白表达。结果:与NC组相比,黄芩素处理组细胞的迁移量和侵袭量均显著降低(P<0.05),细胞迁移侵袭相关蛋白uPA、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),TIMP-1、TIMP-2蛋白表达显著升高(P<0.05);50μmol/L黄芩素处理组细胞JAK/STAT信号通路相关蛋白p-JAK2、p-STAT表达显著降低(P<0.05),且JAK/STAT信号通路的活性与细胞迁移侵袭量成正相关;激活黄芩素处理组细胞的JAK/STAT信号通路可显著增加细胞的迁移侵袭量。结论:黄芩素可抑制膀胱癌细胞的迁移侵袭,其机制可能与失活JAK/STAT信号通路有关,将可为黄芩素治疗膀胱癌的临床应用提供依据。

小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。

溶解氧浓度对低合金钢T24在超临界水中氧化的影响

超(超)临界机组部分锅炉管长期工作在超临界水环境,其抗氧化性直接影响使用寿命。对T24钢在550℃、25MPa超临界水中10-7,3×10-7和2×10-6三种溶解氧环境下的氧化性能进行试验研究。天平称重研究氧化增重曲线,采用扫描电镜和能谱仪研究氧化物表面和横截面形貌及元素分布,采用X射线衍射仪对氧化物相结构进行检测。在此基础上探讨溶解氧浓度对T24氧化性能的影响。结果表明:氧化增重随溶解氧浓度的增加而增加;氧化层为典型的双层结构,高溶解氧可能使氧化层转化为多层结构;溶解氧浓度越大氧化物越容易产生裂纹。

慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移

目的:观察N-Myc下游调节基因-2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响。方法:采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株。Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响。结果:建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株。与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达[(30.1±1.27)vs(9.9±1.24)、(8.2±1.28),P<0.01]明显提高;Lenti-NDRG2组MMP-2[(13.5±1.32)vs(30.7±1.29)、(28.8±1.30),均P<0.01]和MMP-9[(11.7±1.27)vs(25.2±1.28)、(26.4±1.31),均P<0.01]的表达明显降低;Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数[(18.1±3.4)vs(88.5±4.2)、(90.2±4.1)个,均P<0.01]和迁移细胞数[(20.1±3.5)vs(109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P<0.01]明显减少。结论:慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭。

姜黄素通过调控microRNA-7641及其靶基因p16抑制膀胱癌T24细胞增殖的机制研究

目的确定可能导致膀胱癌的mi RNAs,并研究其在姜黄素抗癌作用中的机制。方法对T24和SV-HUC-1细胞进行了芯片测序和q PCR分析。检测mi R-7641在含姜黄素或不含姜黄素的T24和SVHUC-1细胞株中的潜在致瘤性。并使用蛋白质印迹分析p16是mi R-7641在T24细胞中作用的重要靶基因。结果姜黄素诱导mi R-7641的表达下调及p16的上调,而p16是mi R-7641的转录后水平靶点之一,从而导致膀胱癌细胞凋亡增加。结论研究表明姜黄素可能是治疗无肌肉浸润性膀胱癌的临床治疗的潜在有效药物。

高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖及β-catenin表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用含10%FBS的DMEM培养液体外培养膀胱癌T24细胞,将细胞分为5组:空白组(5.5 mmol/L葡萄糖)、对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(10、20、30 mmol/L葡萄糖)。采用MTT法及克隆形成实验检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响;通过实时定量PCR检测膀胱癌T24细胞β-catenin mR NA的表达水平;通过Western blot法检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞β-catenin蛋白表达的影响。结果 MTT法及克隆形成实验结果显示,高浓度葡萄糖显著促进膀胱癌T24细胞的增殖(P<0.01);Western blot检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin蛋白的表达。实时定量PCR检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin mR NA的表达。结论高浓度葡萄糖明显促进膀胱癌T24细胞的增殖,并促进T24细胞β-catenin蛋白和其mRNA的表达,该作用机制可能与β-catenin表达上调有关。

吉西他滨诱导膀胱癌T24细胞自噬的实验研究

目的观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)处理膀胱癌T24细胞后引起凋亡的同时是否诱导T24细胞自噬的产生,并初步探究其自噬产生的机制,以及自噬与凋亡之间的关系。方法体外培养T24细胞,应用CCK-8法测定细胞抑制率;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP的活化,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、底物蛋白P62和自噬潮,以及JNK通路相关蛋白Jnk1、P-Jnk、Bcl-2的表达情况;并通过透射电镜观察细胞超微结构自噬体的变化;Annexin V-PI双流式细胞术检测抑制自噬后细胞凋亡率的变化情况。结果 CCK-8检测结果显示吉西他滨能有效抑制膀胱癌T24细胞增殖;1.0μg/mL吉西他滨处理T24细胞4 h即可发生明显的自噬,透射电镜观察可见自噬体小体的形成;Western blot检测结果显示吉西他滨作用T24细胞后cleaved-Caspase-3、PARP和LC3-Ⅱ表达增高,P62表达降低;P-Jnk出现活化,Bcl-2发生降解;而抑制自噬后能显著增强吉西他滨诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡。结论吉西他滨介导膀胱癌T24细胞凋亡的同时又诱导保护性自噬,JNK信号通路参与调控其自噬的发生,抑制自噬可以明显增强膀胱癌T24细胞对吉西他滨的化疗敏感性。

姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的:旨在探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞传代培养:培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素,观察对细胞的增殖、凋亡作用;应用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率(碘化丙啶染色)。结果:姜黄素各组较对照组增殖降低,存在剂量-效应关系。姜黄素各组较对照组凋亡升高,存在剂量-效应关系。结论:姜黄素抑制人膀胱癌T24细胞增殖,姜黄素促进人膀胱癌T24细胞凋亡。

microRNA-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响及对VEGF和AP1蛋白的调节

【目的】研究microRNA-21(miR-21)对膀胱癌T24细胞系中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和活化因子蛋白-1(activatorprotein-1,AP1)及mRNA表达的调节作用,探讨miR-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响。【方法】用人工合成的miR-21相应的双链互补DNA片段,插入pSilencerTM3.1-H1neo载体表达载体,经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒;用脂质体将miR-21高表达质粒转染进T24膀胱癌细胞,经G418筛选获得阳性克隆。用RT-PCR技术和Westernblot方法分别检测该细胞系中VEGF和AP1的mRNA和蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测膀胱癌T24细胞增殖的变化情况。【结果】Westernblot结果显示miR-21能够增加VEGF和AP1蛋白的表达,RT-PCR方法分析显示VEGF和AP1mRNA水平升高。MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显加快。【结论】miR-21促进T24膀胱癌细胞增殖,提示可能与VEGF和AP1的低表达有关。

T24钢过冷奥氏体连续冷却转变研究

利用Gleeble-1500热模拟机测量T24钢以不同速度连续冷却时的膨胀曲线,结合差热分析法与金相-硬度法,确定临界点及相变温度点,绘制并对比分析T24钢的过冷奥氏体的连续冷却曲线（CCT图）,研究实验钢连续冷却时的奥氏体转变。研究结果表明：T24钢过冷奥氏体在高温区可能发生铁素体转变,中温区可能发生贝氏体转变,低温区可能发生马氏体转变;当冷却速度小于0.10℃/s时,转变产物为铁素体和少量贝氏体的混合组织;当冷却速度分别为0.03,0.05和0.10℃/s时,过冷奥氏体先在高温区发生组织转变,转变量分别为49%,25%和22%,之后在中温区发生组织转变。在0.50-10.00℃/s的冷却速度范围内,转变产物为贝氏体。当冷却速度大于20.00℃/s时,转变产物为马氏体。合金元素Cr和Mo等能够推迟奥氏体分解,Mn对贝氏体转变有促进作用,对于T24钢,只有以低于0.10℃/s的速度冷却才会有先共析铁素体和碳化物生成,在0.50-10.00℃/s的较宽冷却速度范围内连续冷却都会发生贝氏体转变。

曲古霉素A增强抗肿瘤药物对膀胱癌T24细胞的杀伤作用

目的观察HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)和针对DNA的抗癌药物联用对膀胱癌T24细胞的杀伤作用。方法用MTT法测定TSA单用及分别与ADM、MMC和DDP联用对T24细胞的抑制率,用金氏公式法判断联合用药的效果。结果TSA分别与ADM、MMC、DDP联合用药对T24细胞的抑制率均随着浓度的增加而明显增加,TSA与MMC联用的协同作用最明显,而TSA与ADM和DDP在中低剂量下联用亦表现为协同作用。结论HDAC抑制剂TSA可明显增强针对DNA的抗癌药物对膀胱癌细胞的杀伤作用,有希望应用于晚期膀胱癌的化疗方案中。

苦参碱对T24/ADM细胞耐药逆转研究

目的:研究苦参碱对T24/ADM细胞耐药逆转的作用。方法:证明T24/ADM具有多药耐药性。将苦参碱按不同浓度分组加入到T24/ADM中,测定其细胞毒性。将非毒性浓度苦参碱按不同浓度分组加入到T24/ADM中,测定各组细胞凋亡率和检测细胞P-gp的表达变化并确定最佳逆转浓度。结果:苦参碱组的细胞凋亡率均高于对照组有显著性差异(P<0.05),且P-gp的表达明显降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:苦参碱对T24/ADM细胞有耐药逆转作用。

姜黄素对膀胱肿瘤细胞株T24和BIU87增殖影响

目的 :初步明确姜黄素对膀胱肿瘤的作用。方法 :用不同浓度的姜黄素作用于膀胱肿瘤细胞株T2 4和BIU87,用MTT法测定细胞抑制率 ,用流式细胞仪测定细胞凋亡结果 ,用RT -PCR测定不同姜黄素浓度对肿瘤细胞株SurvivinmRNA表达量的影响。结果 :姜黄素对膀胱肿瘤细胞株的作用具有时间和剂量依从性 ,姜黄素能够诱导膀胱肿瘤细胞株T2 4和BIU87凋亡 ,姜黄素可使肿瘤细胞株的SurvivinmRNA表达量降低。结论 :具有抗氧化、抗突变、抗促癌和抗炎症等多方面作用的姜黄素对膀胱肿瘤的作用值得进一步研究。

VX-680诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响及意义。方法:体外培养T24细胞,分别给予不同浓度及作用时间的VX-680,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学改变;RT-PCR和Western blot检测细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果:Annexin V/PI显示,凋亡率分别随着浓度增高和时间增长而增加,呈浓度及时间依赖性;Hoechst染色发现细胞在处理72 h后,其凋亡增多程度及Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调水平均随浓度增高而增加,呈浓度依赖性。结论:Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调Bcl-2表达显著诱导人膀胱癌T24细胞凋亡,且具有浓度依赖性。

苹果酸舒尼替尼抑制膀胱癌T24细胞系的体外增殖

目的探讨苹果酸舒尼替尼对人膀胱癌T24细胞系体外增殖的影响。方法取人膀胱癌T24细胞系悬液,分别加入浓度为0.625、1.25、2.5、5、10和20μmol/L的苹果酸舒尼替尼,分别于24、48及72 h进行处理,用细胞毒抑制实验(MTT法)检测药物对其生长的影响。结果苹果酸舒尼替尼可浓度依赖地抑制人膀胱癌细胞系T24细胞增殖,当药物浓度>5μmol/L时,苹果酸舒尼替尼与顺铂比较,对T24细胞系具有更强的抑制作用(P<0.05)。这种抑制作用随着药物培育时间延长(24、48、72 h)而增强,表现为IC50值显著降低,但其抑制能力与顺铂比较无显著差别。结论苹果酸舒尼替尼可呈浓度和时间依赖地抑制膀胱癌T24细胞系增殖。