芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖与凋亡的影响及其机制探讨。方法分别采用0、15、30、60μmol/L的芒柄花黄素作用T739细胞后,CCK8法检测T739细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡率的变化,Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡情况,Western blot检测GSK-3β、Axin、β-catenin蛋白含量变化。结果 15、30、60μmol/L的芒柄花黄素以浓度和时间依赖方式明显抑制T739细胞的增殖(P<0.05),且作用T739细胞48 h后凋亡率随药物剂量增加显著上升(P<0.05),呈浓度-效应关系。Hoechst33258染色显示T739细胞随药物浓度的升高,凋亡明显增多。Western blot法显示GSK-3β及Axin蛋白表达随药物浓度升高而增加(P<0.05),β-catenin蛋白水平则随药物浓度升高而降低(P<0.05),且均呈浓度-效应关系。结论芒柄花黄素对T739细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与芒柄花黄素上调GSK-3β、Axin蛋白表达和降低β-catenin蛋白水平有关。

复方三根制剂对T739小鼠肺癌转移的实验研究

目的探讨中药复方三根制剂对T739小鼠阻抑LA795肺癌转移的相关机制,为临床运用中药防治肺癌转移提供实验依据。方法用中药复方三根制剂(FFSG)灌喂载有LA795高转移鼠肺腺癌的T739小鼠,进行整体实验性治疗。观察FFSG(FFSG组)对T739实验鼠移植瘤的抑瘤率及抗肺转移率。并与环磷酰胺(CTX)治疗组和空白对照组作比较。结果FFSG组抑瘤率27.2%,CTX组抑瘤率89.4%;FFSG组抗肺转移率45.7%,CTX组59%;两组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论FFSG具有一定抑制T739小鼠移植瘤生长和肺转移的作用。

氯化镁局部导入对T739鼠LA795肺癌的放射增敏作用及机理探讨

本文采用动物肿瘤模型,观察氯化镁阳极离子导入的放射增敏效应,并通过检测肿瘤组织内CAMP含量变化,来探讨其增敏作用机理。 将接种LA795肺癌的T739纯系小鼠60只随机分为四组:对照组(不做任何处理),导入组(用直流感应电疗机行20％氯化镁阳极离子导入),放射组(用深部X线机行局部照射),放射加导入组(先行导入。

四君子汤对小鼠膀胱癌化疗的减毒增效作用

目的探讨中药四君子汤对小鼠膀胱癌化疗的减毒增效作用。方法采用小鼠膀胱癌细胞接种于T 739小鼠皮下,动物随机分为8组:对照组,丝裂霉素C(mitomycinC ,MMC)常规剂量组,MMC小剂量组,四君子汤大剂量组,四君子汤中剂量组,四君子汤小剂量组,联合用药(四君子汤大剂量+MMC常规剂量)A组,联合用药(四君子汤大剂量+MMC小剂量)B组;每组于接种癌细胞2 4h后分别给药;用药14天后分别检测各组小鼠的抑瘤率、腹腔巨噬细胞活性,观察小鼠荷瘤生存时间及治疗7天后血白细胞数的变化。结果四君子汤大剂量组的荷瘤小鼠生存时间与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,而四君子汤中、小剂量组与对照组比较差异无显著性(P >0. 0 5 ) ;MMC常规组的抑瘤率最高,但荷瘤生存时间与对照组比较差异无显著性(P >0 . 0 5 ) ;联合用药B组的小鼠荷瘤生存时间最长,达到(32 7±1 3)天,与其他各组比较差异均有显著性(P <0 . 0 5 ) ;联合用药B组除抑瘤率低于MMC常规组及联合用药A组,血白细胞数及巨噬细胞活性均优于MMC各剂量组及联合用药A组,差异均有显著性(P <0 . 0 5 )。结论四君子汤联合小剂量MMC化疗可以有效抑制小鼠膀胱肿瘤生长,具有增效减毒之作用。

小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义

目的:建立环磷酰胺(CTX)治愈荷膀胱癌T739小鼠的动物模型,观察外周血象特别是血小板计数在化疗治愈肿瘤中的动态变化及其意义。方法:给正常T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织,建立荷膀胱癌的小鼠模型。接种后第7天,荷瘤小鼠腹腔内分别注入15、40、100mg/kg的CTX,等量生理盐水对照,确定CTX治愈肿瘤的量效关系。然后再取12只荷瘤小鼠,随机分成2组,15mg/kgCTX单次腹腔内注射,等量生理盐水对照,分别在用药后6h、用药后第2、4、9、14天内眦静脉取血,进行血常规检测,分析荷瘤小鼠外周血象的动态变化。结果:15～100mg/kgCTX治疗后2周内,荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制或肿瘤结节缩小的速率与所用CTX的剂量呈正相关;CTX治疗后2月,荷瘤小鼠的存活率与所用CTX的剂量呈负相关。15mg/kgCTX单次腹腔内注射在治愈多数荷瘤小鼠的同时对外周血象无明显抑制作用。用药后6h治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数为(1483.4±184.4)×109/L,明显高于对照组小鼠(1086.6±81.0)×109/L,两组数据比较具有统计学意义(P<0.01);用药后第2、4、9、14天治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数与对照组小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:15mg/kgCTX可治愈多数荷膀胱癌T739小鼠。单剂量CTX治疗后6h荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与其抗肿瘤作用有关。

毕赤酵母表达重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用

背景与目的:肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成,内皮抑素能抑制肿瘤的血管生成。本研究旨在观察毕赤巴斯德酵母(pichia.pastoris.GS115)分泌表达的重组人内皮抑素(recombinanthumanendostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法:挑取一株高效分泌表达rhES的毕赤巴斯德酵母菌株,利用甲醇进行大量诱导表达;用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白;将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,分别给予rhES和PBS皮下注射,每日1次,连续14天;观察两组小鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤体积大小,并观察两组小鼠肿瘤肺部转移情况。结果:经甲醇诱导的毕赤巴斯德酵母菌株高效分泌表达了rhES;动物实验研究发现rhES能显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长,rhES治疗组肿瘤大小与对照组比较具有显著性差异(P<0.001),抑瘤率达到66.4%,并且有效抑制了肿瘤的肺部转移。结论:利用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,可显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长和转移。

内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移抑制作用的初步研究

目的 :观察人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法 :对重组人内皮抑素高效表达克隆 pCX的表达产物进行纯化 ,得到重组人内皮抑素 (rhES)。用亲和层析及胰弹性蛋白酶消化法从过期人血浆纯化得到人血管抑素(hAS)。将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成 3组 ,分别给予rhES ,hAS或等体积PBS皮下注射 ,1次 /日 ,共 14d。观察 3组肿瘤生长情况、肺湿重、肺表面转移结节数、动物生存期 ,分别进行 q检验。 结果 :rhES组及hAS组肿瘤生长缓慢 ,8d后肿瘤逐渐回缩 ;肺湿重、肺表面转移结节数明显减少 ,动物生存期明显延长。结论 :rhES与hAS均可明显抑制LA795所致的小鼠实验性肿瘤的生长与转移 ,延长动物的生存期。

小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠动物模型的建立

[目的]建立单一剂量环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）治愈荷膀胱癌小鼠的动物模型。[方法]T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织建立荷瘤小鼠模型。肿瘤接种后第7天,不同剂量的CTX单次腹腔内注射,观察荷瘤小鼠用药后体重和肿瘤结节直径的变化,找出CTX可治愈多数荷瘤小鼠的最低有效剂量。然后再取12只荷瘤T739小鼠随机分成两组,最低有效剂量的CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水作对照,分别在治疗后第4、14天内眦静脉取血进行白细胞计数。[结果]接种2 mm^3的小鼠膀胱癌肿瘤组织可使T739小鼠肿瘤进行性生长,接种后第7天肿瘤直径约为2-4 mm。15-400 mg/kg的CTX单次腹腔内注射后1周内,荷瘤小鼠肿瘤结节缩小的速率和毒性反应均与所用CTX的剂量呈正相关。CTX治疗后2月,100-200 mg/kg CTX治疗组的荷瘤小鼠全部死亡;40 mg/kg CTX治疗后20%的荷瘤小鼠存活;15 mg/kg CTX治疗组60%的荷瘤小鼠存活,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。15 mg/kg CTX治疗后第4天荷瘤小鼠外周血WBC为（11.36±0.30）×10^9/L,对照组为（11.14±2.14）×10^9/L,两组数据比较差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗后第14天,治疗组小鼠WBC计数降为（8.46±0.76）×10^9/L,与CTX治疗后第4天WBC计数比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,但与对照组（9.86±3.40）×10^9/L比较差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]15 mg/kg CTX单次腹腔内注射后荷瘤小鼠无明显毒性反应,并可使多数荷瘤小鼠肿瘤治愈,因此,小剂量CTX治愈荷膀胱癌小鼠模型成功建立。

^(125)Ⅰ粒子照射T_(739)小鼠膀胱癌的实验研究

笔者在建立T739近交系小鼠低分化移行细胞膀胱癌动物模型的基础上,通过125I粒子植入肿瘤的实验,观察肿瘤的生长、组织学变化,了解125I粒子照射治疗膀胱癌的生物学效应,为临床应用125I粒子治疗膀胱癌提供实验依据.

重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795的抑制作用

目的观察重组人内皮抑素(rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法对ThES高效表达克隆pCX的表达产物进行纯化,得到ThES。将LA795肺腺癌细胞接种于T739小鼠背部皮下,随机分成2组,接种后第10天起分别给予rhES20mg/kg·b.w.或等体积PBS缓冲液皮下注射,1次/d,共14d。观察2组肿瘤生长情况、肺湿重、肺表面转移结节数、动物生存时间,分别进行t检验。结果治疗前后rhES组肿瘤体积分别为(650±201)mm3、(1642±211)mm3;而PBS组肿瘤体积由治疗前的(623±248)mm3增至(9194±952)mm3。rhES组肺湿重、肺表面转移结节数明显少于PBS组,动物生存时间明显延长(P<0.01)。结论rhES可明显抑制LA795所致的小鼠实验性肿瘤的生长与转移,延长动物的生存时间。

屏障系统内T_(739)小鼠管理和科学饲养的探究

结合天津市医药科学研究所动物实验室的实际,以T739小鼠为例,讨论屏障系统内的饲养管理和繁育方法的经验,加强和完善屏障系统内实验动物的管理制度和质量控制。参照国家有关实验动物标准,建立一套行之有效的屏障系统实验室管理规范,为更好地研究、发展T739小鼠品系奠定基础。

重组人白介素-2抑制小鼠LA_(795)肺腺癌高转移株肺转移的研究

目的 :探讨不同剂量的重组人白介素 2抑制LA795肺腺癌高转移株皮下肿瘤生长及肺转移的作用。方法 :皮下接种LA795肺腺癌高转移株于T739同系小鼠 ,腹腔注射不同剂量的重组人白介素 2 ,观察抑制肿瘤生长及肺转移的作用。结果 :rhIL 2 1.5× 10 5U/d能明显地抑制肿瘤生长。肿瘤体积 ,瘤体湿重以及肺转移结节数较对照组小和少 ,抑制率分别达 66.0 3 %、76.0 3 %、97.5 4 % (P <0 .0 1)。小剂量rhIL 2 2 .6× 10 3U/d ,抑制肿瘤生长的抑制率仅为 5 .13 % (P >0 .0 5 ) ,而对肺转移有 68.75 %的抑制率 (P <0 .0 1)。结论 :大剂量的rhIL 2仅能有效地抑制LA795肺腺癌的肺转移 ,且能较好地抑制肿瘤生长。小剂量的rhIL 2仅对LA795肺腺癌转移有一定的抑制作用。因此rhIL 2治疗肿瘤应使用大剂量。

TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究

目的 :观察TNP 4 70和重组人内皮抑素 (recombinanthumanendostatin ,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法 :用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素 (rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES ,将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成 3组 ,每组各 10只 ,分别给予PBS ,rhES及TNP 4 70 +rhES皮下注射 ,每日 1次 ,连续 14d ;观察各组小鼠肿瘤生长情况 ,游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠 ,原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。结果 :经甲醇诱导 ,毕赤酵母重组菌分泌表达rhES ,并应用肝素亲和层析将其纯化 ;动物试验显示与PBS对照组比较 ,rhES治疗组及rhES +TNP 4 70治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长 (P <0 .0 1) ,TNP 4 70 +rhES组与rhES组比较亦有显著性差异 (P <0 .0 1)。原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著 (P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳 ,具有良好的协同治疗作用。

重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用

目的观察酵母表达重组人内皮抑素(recombinant human endostatin, rhES)对小鼠肺腺癌LA795原位肿瘤微血管生成及肺转移的抑制作用。方法对含有人内皮抑素基因的重组酵母菌株进行诱导表达及纯化rhES;将接种LA795小鼠肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,每组各10只,于接种后第6日起给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14 d;观察两组小鼠原位肿瘤微血管生成情况及肺部肿瘤转移情况。结果经甲醇诱导酵母转化子表达rhES,并用肝素亲和层析的方法获得纯化的rhES;治疗结束后用免疫组化方法观察两组小鼠原位肿瘤微血管密度发现rhES治疗组肿瘤微血管密度明显小于PBS对照组(P<0.01);观察两组小鼠肺部发现rhES治疗组小鼠肺部未见有明显肿瘤转移病灶,而PBS对照组小鼠肺部可见大量散在肿瘤转移病灶;两组小鼠肺湿重比较具有显著性差异(P<0.01)。结论rhES具有良好的生物学活性,显著抑制了小鼠肺腺癌LA795肿瘤血管生成,并能有效抑制肿瘤的肺部转移。

T_(739)近交系小鼠及其亲本染色体C带大小的特征

T_(739)小鼠是由615近交系小鼠和昆明种小鼠杂交后兄妹交配培育成功的。本文对T_(739)小鼠及其亲本的C带染色体进行了研究,从C带多态性证明T_(739)和615小鼠为近交系小鼠。

建立小鼠膀胱肿瘤原位模型的一种新方法

目的 建立一种简单、实用的小鼠膀胱肿瘤动物模型。方法 将绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒导入膀胱癌细胞株BTT T739,筛选出高表达GFP的细胞克隆并配置成细胞悬液。将一定浓度肿瘤细胞悬液经雌性同系小鼠尿道注入膀胱壁粘膜层。荧光显微镜观察肿瘤浸润生长及微转移 ,常规病理切片观察。与同时建立的经腹膀胱壁内注射肿瘤模型进行对比。结果 经尿道种植膀胱肿瘤细胞 (4× 10 5个 ) 1周后可见膀胱粘膜层肿瘤细胞生长 ,而经腹膀胱壁内注射产生的肿瘤多在膀胱浆膜层及肌层。随时间延长膀胱内肿瘤逐渐增大 ,并出现血尿及远处转移的表现。结论经尿道膀胱壁注射肿瘤细胞建立膀胱癌模型的方法简单、实用、迅速。用该方法建立的模型更符合人类膀胱肿瘤的病理过程 ,有望成为研究膀胱肿瘤更为有效的工具。

HSV-TK/ACV治疗小鼠肺腺癌LA795及其与机体免疫系统的关系

目的 :探讨HSV -TK/ACV(GCV)系统对小鼠肺腺癌细胞LA795治疗作用及其与机体免疫系统的关系。方法 :用重组逆转录病毒载体上清感染体外培养的小鼠肺腺癌细胞LA795 ,然后用新霉素类似物G41 8进行筛选 ,得到转染HSV -TK基因的LAtk细胞 ,分别将LA795细胞和LAtk细胞接种于小鼠皮下 ,观察ACV治疗后肿瘤生长情况、抗免疫功能以及对动物生存期的影响。结果 :体外转染HSV -TK基因的LAtk细胞获得了对ACV的敏感性 ,接种LAtk细胞的治疗组动物在ACV治疗后出现了肿瘤体积缩小 ,而对照组接种LA795细胞的动物在ACV治疗后肿瘤体积逐渐增大 ,两者具有显著差异 (P<0 .0 1 )。治疗组动物生存期为 5 1 .8d ,对照组动物生存期平均为 1 5 .9d ,两者具有显著差异 (P <0 .0 1 )。光镜下观察治疗组肿瘤组织及血管周围有大量的淋巴细胞浸润 ,计数 75个高倍视野中的淋巴细胞为 1 1 6.0 3± 5 2 .95 ,而对照组为 1 0 .41± 5 .5 2 ,二者具有显著差异 (P <0 .0 1 )。超微结构观察显示淋巴细胞群攻击癌细胞现象 ,癌细胞出现凋亡征象。结论 :①HSV -TK/ACV系统可以显著杀伤小鼠肺腺癌细胞LA795 ,使肿瘤消退 ,动物生存期延长 ,提示该系统有良好的治疗效果和应用前景。②HSV -TK/ACV系统治疗肿瘤除了其直接杀伤作用外 ,尚有机体免疫系统的?

小鼠CD154真核表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞体内成瘤性的影响

目的构建小鼠CD154真核表达质粒,观察其转染膀胱癌细胞后对癌细胞体内成瘤性的影响。方法逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法扩增T739小鼠CD154cDNA,重组到pcDNA3.1/Zeo(+)构成重组质粒,经阳离子脂质体转染小鼠膀胱移行细胞癌细胞BTT739,将转染后的细胞接种T739小鼠,观察肿瘤在体内的生长情况。结果RTPCR产物进行凝胶电泳可见0.8kb处的目的基因条带,序列测定结果正确;CD154重组质粒转染BTT739细胞后能够在肿瘤细胞内表达;转染CD154的肿瘤细胞在小鼠体内不能成瘤。结论成功构建小鼠CD154真核表达质粒,将其转染肿瘤细胞后能抑制肿瘤细胞的体内成瘤性。