云南景洪直立型普通野生稻抗稻瘟病Pi-ta^＋等位基因的克隆与分析

用PCR法从景洪直立紫杆普通野生稻中克隆了抗稻瘟病基因Pi-ta+的4672bp序列,该序列包含完整的编码框、内含子和终止密码子下游的331bp。所克隆的直立型紫杆普通野生稻Pi-ta基因序列的编码区与已报道的日本栽培稻社糯(Yashiro-mochi)和元江普通野生稻相应序列间的同源性分别为99.86%和98.78%。与社糯的Pi-ta基因相比,其编码区有4个核苷酸的差异并导致3个氨基酸残基的改变,而内含子区域有6个核苷酸差异。对该序列进一步分析发现,其推导的氨基酸残基的918位为丙氨酸,属于稀有的抗稻瘟病的Pi-ta+等位基因。景洪直立型普通野生稻Pi-ta+基因因其编码序列和推导的氨基酸序列与社糯有所不同,推测其抗病能力大小和抗菌谱可能与社糯的Pi-ta基因不同。直立型普通野生稻中Pi-ta+等位基因的克隆为进一步利用该基因改良栽培稻抗病能力提供了前期物质基础。

云南野生稻抗稻瘟病Pi-ta基因的检测及分析

以16个不同来源的云南野生稻作为供试材料,用抗稻瘟病Pi-ta基因特异引物(KG2/KG4)进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆、测序及分析。结果表明,16个野生稻中7个品种持有抗稻瘟病Pi-ta基因,其中,来自云南景洪的紫秆普通野生稻中Pi-ta基因的编码区与原始型的抗稻瘟病Pi-ta基因的DNA序列完全相同。可见,云南可能是抗稻瘟病基因Pi-ta的起源地之一。

正五聚体蛋白-3(PTX-3)评估多发性大动脉炎(TA)病情活动性的价值

目的探索正五聚体蛋白-3(pentraxin-3,PTX-3)在评估多发性大动脉炎(Takayasu′s arteritis,TA)病情活动性方面的价值。方法选取2010年10月至2012年3月就诊于复旦大学附属中山医院风湿科的TA患者45名、健康体检者25名及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者10名,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISAs)检测血浆PTX-3水平,采用Kerr指标作为疾病活动性评定的金标准。结果 TA患者血浆PTX-3水平显著高于健康人[(18.5±13.9)ng/mL vs.(0.52±0.26)ng/mL,P<0.01]和RA患者[(18.5±13.9)ng/mL vs.(0.73±0.47)ng/mL,P<0.01];且活动期患者PTX-3水平显著高于稳定期患者[(26.7±16.8)ng/mL vs.(6.2±4.7)ng/mL,P<0.01],并与疾病活动性评分呈正相关(Rho=0.78,P<0.01);而健康人与RA患者血浆PTX-3水平差异无统计学意义。结合其他实验室检查及影像学结果分析后发现,TA患者血浆PTX-3水平与血清基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9水平(Rho=0.65,P<0.01)、全身血管磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)上受累血管管腔狭窄程度(Rho=0.67,P=0.04)及管壁增厚程度(Rho=0.54,P=0.05)呈正相关。ROC曲线分析表明,PTX-3(≥10.71ng/mL)在评估TA活动性方面的敏感性为88.89%,特异性为77.78%,准确性为84.44%(ROC曲线下面积=0.95,95%CI:0.89～1.00)。结论 PTX-3有望成为一种评估TA病情活动性的有效的血清学指标,且其血浆水平可能反映了患者血管损伤情况,用于监测疾病活动性。

溶胶-凝胶法制备纳米SrBi_2Ta_2O_9的晶化过程和晶粒长大研究

以乙二醇为溶剂,醋酸为催化剂,部分无机盐代替醇盐的溶胶-凝胶工艺制备了不 同平均晶粒尺寸的纯SrBi2Ta2O9(SBT)纳米粉末,晶相粉末晶粒大小为4-70nm.用XRD、 TG-DTA、TEM系统研究了SBT纳米相的形成过程.通过改变干凝胶的热处理温度和热处 理时间,研究了温度与时间参数对SBT晶粒长大的影响规律.研究表明,碳的燃烧和二氧化 碳的蒸发对纳米团簇的长大具有一定的阻碍作用. SBT相的晶化行为分为金属-氧团簇向玻 璃态转变和玻璃态到晶态的转变过程,玻璃态到晶态的转变温度区间为500-550℃.两个过程 的长大激活能分别为:Eal=0.709eV,Ea2=0.093eV.温度是晶粒长大的主要因素,热处理时间 对晶粒长大影响不明显.

TA载体pEASY-T1 Simple在基因克隆中的新应用

在基因克隆操作中,由于常用克隆载体多克隆位点的酶切位点数目有限,造成一些DNA片段的克隆、连接受限。为解决这一问题,本文利用pEASY-T1 S imp le载体无酶切位点的特点,通过TA克隆的方法引入多个单一酶切位点,并对所构建的克隆载体进行了验证。最后证明,这种方法可高效构建含有不同多克隆位点的载体,克服了对常用克隆载体的依赖,大大提高了基因操作的灵活性和有效性。

钛基RuO_2-Ta_2O_5涂层电极材料的电容性能分析

采用热分解方法在钛基体上制备了(36%)RuO2-(64%)Ta2O5混合氧化物涂层。采用X射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)、循环伏安(CV)以及恒流充放电测试研究了涂层电极的组织结构、表面形貌以及电容性能。结果表明:(36%)RuO2-(64%)Ta2O5涂层以非晶氧化物为基体,带有少量纳米微晶RuO2的组织结构。在酸性溶液中,在50～900 mV/s的扫描速度下,Ti/(36%)RuO2-(64%)Ta2O5涂层电极的伏安曲线都具有近似矩形形状,表现出良好的电容特性和功率特性。以5 mA/cm2和10 mA/cm2放电,比电容分别为525.5 F/g和495.1 F/g。在经历2000次循环充放电后,电极的电荷储存能力仍未衰减,显示其优异的循环稳定性。

填丝TIG焊TA15钛合金与18-8钢接头的微观组织

以铜焊丝为填充材料对TA15钛合金与18-8不锈钢进行填丝钨极氩弧焊(TIG).利用金相显微镜(OM)、扫描电镜(SEM)、电子探针(EPMA)及显微硬度计对TA15/18-8接头的微观组织、相组成、元素分布及显微硬度进行了分析.结果表明,焊缝组织为铜固溶体枝晶;TA15钛合金侧熔化未混合区为α-Ti与磷化物脆性相Ti_3P,Ti(Cu,Fe)的混合组织;18-8不锈钢侧熔合区为Fe-P共晶组织;磷在18-8不锈钢侧熔合区的聚集促进了共晶组织的形成,未参与共晶反应的铜形成团状聚集区;两侧熔合区显微硬度明显高于热影响区和焊缝,Ti_3P脆性相导致钛合金侧熔化未混合区的显微硬度最高值达720 HV0.5.

电解-磁力复合研磨TA18钛合金管内表面研究

为了改善TA18合金制造零部件的表面质量,降低其表面粗糙度,提出了一种高效率的电解-磁力复合研磨加工方法,采用电解的钝化作用辅助磁力研磨,对比了复合加工与单纯磁力研磨加工前后表面粗糙度与表面形貌的变化,通过单因素试验分析磁极转速、电解电压对表面质量的影响。结果表明:电解-磁力复合加工实现了对TA18管内表面的精密研磨,与单纯磁力研磨相比,经过50min加工,表面粗糙度由原始的0.9μm下降到0.08μm,残余应力有效降低,表面微观形貌得到明显改善,有效提高了工件疲劳强度。

圆二色谱分析抗氧化剂EGb761配伍TA9901对老化Aβ_(1-42)二级结构改变的影响

目的 研究抗氧化剂EGb76 1、TA990 1及EGb76 1配伍TA990 1抑制Aβ1-42 聚集作用的分子机制。方法 运用圆二色谱 (CD)分析Aβ1-42 老化后以及其与EGb76 1、TA990 1和二者配伍物共同孵育后二级结构变化。结果 Aβ1-42 孵育 30min和 2 4h及用EGb76 1、TA990 1和其配伍物干预后 ,Aβ1-42 的CD图形发生了明显改变 ,30min以不规则卷曲和α 螺旋为主 ,其含量分别为 4 0 5 %和 2 5 4 % ;孵育 2 4h后以 β 折叠为主 ,占 4 0 3% ;TA990 1、EGb76 1和配伍物分别与Aβ1-42 共同作用后 ,则α 螺旋结构增多 ,分别为 37 6 %、4 5 3%和 10 0 % ,β 折叠消失。 结论 EGb76 1配伍TA990 1及其成分均能促使老化的Aβ1-42 由 β 折叠向α 螺旋转化 。

利用TA克隆载体构建pET15b-SOD1重组质粒

目的利用pGEM-TEasyvector构建pET15b-SOD1重组质粒。方法以pBluescriptIISK-SOD1质粒为模板,应用pfuDNA聚合酶,聚合酶链反应法(PCR)扩增SOD1cDNA。将扩增的SOD1cDNA与三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,然后通过TaqDNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在SOD1cDNA的3’末端加“A”并纯化,然后将纯化后的SOD1cDNA与pGEM-TEasyvector直接连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,蓝白筛选,挑选白色克隆扩增、鉴定,重组的质粒命名为pGEM-TEasy-SOD1。pGEM-TEasy-SOD1和pET15b分别用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切,采用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片断,前者回收470bp的SOD1cDNA片段,后者回收线性化的pET15b片段,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,抽提后的重组体质粒命名为pET15b-SOD1,然后对pET15b-SOD1进行酶切和核苷酸序列测序鉴定。结果重组质粒pET15b-SOD1经测序分析证实克隆入pET15b-SOD1的人SOD1cDNA与GeneBank“AB087266”登录的人SOD1cDNA序列一致,从而成功构建了pET15b-SOD1重组质粒。结论pET15b-SOD1重组质粒的构建为细胞穿透肽介导的SOD1转导提供了一对照载体。

溶胶-凝胶法制备SrBi_2Ta_2O_9铁电陶瓷薄膜

以可溶性无机盐为原料 ,通过溶胶 -凝胶法在 Al2 O3基片上制备了 Sr Bi2 Ta2 O9(SBT)铁电陶瓷薄膜 .实验结果表明 ,在前驱体溶胶制备中 ,络合剂的种类对溶胶的稳定性和 SBT相薄膜的形成有重要影响 .在以EDTA和乙二醇为络合剂时 ,易形成均匀稳定的溶胶和单一相的 SBT薄膜 .在薄膜制备工艺中 ,Bi2 O3的高温挥发性和薄膜的退火温度是控制制备过程的关键因素 .当 Bi过量 40 % ,且在 70 0℃的温度下退火热处理 ,可以制备出符合化学计量比、结晶性较好、具有均匀晶粒尺度的 Sr Bi2 Ta2 O9铁电陶瓷薄膜 .

Ta掺杂对BaCe_(0.8)In_(0.1)Y_(0.1)O_(3-δ)电解质材料性能的影响

采用柠檬酸盐燃烧法和固相反应相结合的方法制备BaCe_(0.8)In_(0.1)Y_(0.1)O_(3-δ)(BCIY)和掺杂Ta的BaCe_(0.7)Ta_(0.1)In_(0.1)Y_(0.1)O_(3-δ)(BCTIY)电解质粉体,在200 MPa压力下干压成型后在不同温度下烧结成电解质片,并使用X射线衍射仪(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)和电化学工作站分别对样品的物相、微观结构和电导率进行了表征.XRD结果显示,1 000℃煅烧5 h的BCIY和BCTIY均表现出单一的钙钛矿相.收缩率和SEM结果显示,BCIY在1 250℃下就可以烧结致密,掺杂Ta的BCTIY在1 350℃下也可以烧结致密.在空气和湿润的H_2气氛下BCTIY的电导率比BCIY的略有降低.在CO_2和沸水环境下,BCTIY比BCIY明显表现出较好的化学稳定性.研究结果表明:BCTIY有望成为中低温固体氧化物燃料电池稳定的电解质材料.

改进TA-Fe法显示大鼠肾血管和肾小管的研究

目的光镜下观察改进单宁酸-氯化铁法(TA-Fe法)媒染肾微血管和肾小管的效果。方法经TA-Fe法媒染的大鼠肾的两组冰冻切片,一组切片用TA-Fe法,湿片拍照;另一组切片用改进TA-Fe法经脱水、透明、封片,显微摄影。结果两种TA-Fe法均能显示肾微血管和肾小管。改进TA-Fe法使组织结构更清晰,肾血管球毛细血管分叶更明显。肾小囊上皮、毛细血管内皮细胞、足细胞以及球内系膜细胞核亦被良好显示。切片可较长时间保存,但立体感较改进前略差。结论改进后的TA-Fe法显示肾微血管和肾血管效果更好,适合做回顾性研究。

大鼠金属蛋白酶组织抑制物-1反义基因片段TA克隆载体的构建

目的 构建含大鼠金属蛋白酶组织抑制物 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)反义基因片段TA克隆载体 ,为进一步研究TIMP 1在肾组织纤维化中的作用奠定基础。方法 本实验利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,从提取的大鼠肾组织总RNA中特异地扩增含 313bp的TIMP 1cDNA片段 ,并将其克隆到TA载体。结果 用限制性内切酶鉴定 313bp的TIMP 1cDNA片段插入方向 ,测序结果证实扩增片段为目的片段。结论 成功地构建了含大鼠TIMP

采用TOPO-TA克隆法建立多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA文库

目的:通过实验方法建立多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA文库,欲以此为基础对人体不同肿瘤细胞中的该基因家族进行表达谱分析。方法:主要为PCR和TOPO-TA克隆技术。结果:通过电泳图谱初步证实了这一家族的不同成员均已得到有效的扩增,并获得了相应的片段库。结论:多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA被成功扩增,并建立了该基因家族的cDNA文库。

小麦Ta-UBX1基因克隆、表达及生物信息学分析

为深入研究小麦U-BOX基因的功能,以周麦22和周麦24为材料,利用RT-PCR技术克隆小麦的Ta-UBX1基因,对其序列结构、基因表达和进化特性进行分析。结果表明,小麦Ta-UBX1基因全长2 059 bp,编码553个氨基酸,在其序列的N端和C端分别具有UBA_like保守域和UBX结构域,属于泛素途径中的典型U-BOX蛋白,并且与其他禾本科植物同源的U-BOX蛋白具有高度的序列相似性;该基因在小麦叶片、小花、幼穗、根、种子中均有表达,但以小花和幼穗中的表达量较高,叶片中表达量较低;在花药发育的四分体期和单核早期表达量最高,单核后期到三核期表达量逐步降低,推测该基因表达可能与小麦花发育,尤其花药发育密切相关。本研究可为探究该基因的功能奠定分子基础。

凝胶-固相反应法制备SrBi_2Ta_2O_9

以碳酸锶、五氧化二钽、三氧化二铋等物质为原料,采用凝胶-固相反应法制备了SrBi_2Ta_2O_9。利用XRD、DTA、SEM等分析手段对其形成过程和烧结特性进行了研究。结果表明,球磨时间、烧结时间以及烧结温度对烧结密度和SrBi_2Ta_2O_9的分解都有明显的影响。介电性能显示,该方法合成的SrBi_2Ta_2O_9和传统的固相法合成的SrBi_2Ta_2O_9性能差别不大。

溶胶-凝胶法制备可见光响应光催化剂K_4Ce_2Ta_(10)O_(30)及其光解水活性

以可溶性的乙醇钽为前体,通过溶胶-凝胶法合成可见光响应光催化剂K4Ce2Ta10O30。XRD、SEM、BET以及UV-Vis等表征手段表明通过溶胶-凝胶法制备的K4Ce2Ta10O30具有分布均匀的纳米颗粒(20～40nm),比表面积高,光吸收红移近30nm。并且在可见光下(λ>400nm)分解水的活性测试中,溶胶-凝胶法制备的样品比高温固相反应获得样品具有更高的光催化分解水活性。

HLA-DR_α基因片段TA克隆载体的构建

目的 应用TA克隆技术构建含HLA-DRα基因的载体,作为实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 HLA-DRα基因的标准模板。方法 利用RT-FCR法,从提取的外周血单核细胞总RNA中特异地扩增含635bp的HLA- DRαcDNA片段,并将其克隆到TA载体。结果 用限制性内切酶法和测序方法证实扩增片段为目的片段。结论 成功地构建了 HLA-DRα基因片段TA克隆载体。为实时荧光定量RT-PCR法检测HLA-DRαmRNA表达提供标准模板。

截短的小麦冷胁迫反应蛋白基因片段TA3-13的融合表达、纯化与诱导抗TMV功能研究

TA3-13是小麦中一个冷胁迫蛋白WCSP1编码基因的5′端截短的DNA序列。它与水稻白叶枯病菌Harpin蛋白的编码基因hpa1_(X∞)(又称hrf1,hrfA)具有59%的一致性。为了研究TA3-13蛋白的生物学性状和功能及其与Harpin蛋白的关系,本研究以pET30a(+)为载体,构建了His融合表达重组体,转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的诱导下获得了融合蛋白的表达。利用镍柱对融合蛋白进行了纯化研究,结果表明:融合蛋白在200 mmol·L^(-1)咪唑浓度下能够被有效地洗脱下来,电泳显示具有单一条带。烟草花叶病毒(TMV)接种试验显示:纯化的TA3-13蛋白喷雾烟草后仍具有较高的诱导烟草抗TMV的作用。