亚甲蓝光化学法对人外周血淋巴细胞的灭活效果及预防TA-GVHD的可行性研究

目的研究亚甲蓝光化学法对淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性的抑制,探讨该方法对淋巴细胞的灭活作用及预防输血相关的移植物抗宿主病(TA-GVHD)的可行性。方法实验分为实验组:从全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于亚甲蓝终浓度为3μmol/L的自体血浆中,注入PVC小袋内(660nm处透光率为77%),于35000lux光照度的荧光下进行照射,于不同时间点取样检测淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性;对照组:为相同来源、重悬于不含亚甲蓝的自体血浆中且不接受光照处理的淋巴细胞。

辐照血液的临床应用与TA-GVHD

成分输血的广泛使用,已经很大程度降低了临床输血的不良反应,起到了医疗救治的目的,但其也存在某些并发症,例如严重的是输血相关性移植物抗宿主病（TA-GVHD）[1],该病尚无有效治疗手段,病死率为90%以上。TA-GVHD的发病率相对比较低,TAGVHD发病率为普通受血者：0.01%~0.1%;恶性淋巴瘤疾病患者：0.1%~2%;强化疗后输血患者：15%~20%,由于临床表现缺乏特异性,极易漏诊和误诊,因此未及时得到救治导致死亡。

辐射变色膜用于标识输注辐照血液辐照剂量的研究

目的制备可标识血液辐照剂量的辐射变色膜,了解其吸光度峰值与淋巴细胞反应抑制率之间的对应关系。方法分别用5、15、25、35、50Gy 5种辐射剂量的射线照射所制备的辐射变色膜和血液,测定辐照前后辐射变色膜的吸光度和淋巴细胞反应抑制率。结果该辐射变色膜具有低剂量响应特征,与血液同时被辐照后,薄膜颜色由粉红色变为蓝色,其吸收峰的吸光度与血液淋巴细胞反应抑制率具有相关性。结论经肉眼观察辐射变色膜可确定血袋是否经辐照,测定辐射变色膜的吸光度可定量标识血液的辐照剂量。该辐射变色膜在血液辐照预防TA-GVHD中具有重要的应用前景。

γ射线辐照对血液质量的影响

目的 探讨用灭活淋巴细胞剂量的γ射线辐照对血液质量造成的影响。方法 用淋巴细胞转化试验找出能灭活淋巴细胞的最小剂量 ,以此剂量辐照 ,对辐照前后的标本作红细胞渗透脆性试验 ;用血细胞计数仪对辐照前后血标本作RBC、Hct、MCV、Plt、MPV检测 ;用生化分析仪检测辐照前后血清中K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度的变化 ;用瑞氏染色法观察辐照前后RBC及Plt的形态变化 ;用CD4 1a、CD6 2 p标记辐照前后血小板标本后 ,用流式细胞仪检测其阳性率。结果 辐照前后标本RBC、Hct、MCV、Plt、MPV无变化 ;RBC、Plt形态无改变 ;K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度无变化 ;CD4 1a、CD6 2p阳性率无变化。结论 血液成分经 35Gyγ射线辐照后 ,淋巴细胞被灭活 ,而RBC、Plt的数目。

核黄素光化学方法抑制淋巴细胞增殖及细胞因子分泌活性的实验研究

目的研究核黄素光化学方法对淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性的抑制程度,观察该方法对淋巴细胞增殖周期的影响。方法实验分为实验组:随机选择捐献的全血将从中收集的淋巴细胞悬浮于核黄素终浓度为50μmol/L的1640缓冲溶液中,注入PVC透光转移袋内(440nm处透光率为80%),用400—500nm的可见光照射,照射量为8.8J/ml;对照组:为相同来源、悬浮于不含核黄素的1640缓冲溶液中、未接受光照处理的淋巴细胞。以植物血凝素同步刺激2个组的淋巴细胞,用MTS非放射性细胞增殖试验检测淋巴细胞的增殖活性,计算核黄素光化学处理对淋巴细胞的增殖抑制率;用酶标方法检测细胞因子;用流式细胞术观察经植物血凝素(PHA)刺激后的淋巴细胞周期变化(RPT-lymphocytes)。结果与对照组比较,实验组经过核黄素光化学法处理后的淋巴细胞(RPT-lymphocytes)对PHA刺激的增殖抑制率为(99.21±1.06)%,淋巴细胞IL-1β、-2、-6、-8及TNF-α、IFN-γ细胞因子的分泌量比对照组细胞分别降低了(95.09±2.60)%、(98.20±1.64)%、(98.77±0.97)%、(92.30±11.04)%及(98.82±1.42)%、100%;实验组S期细胞占0.73%,对照组S期细胞则占32.5%。结论可见光激发的核黄素光化学方法可有效抑制淋巴细胞的增殖活性和细胞因子分泌活性,阻止淋巴细胞进入细胞增殖周期,提示该方法可能是预防TA-GVHD的一种有效并且可行的方法。

亚甲蓝光化学作用抑制淋巴细胞增殖及其细胞因子分泌活性的研究

目的探讨亚甲蓝光化学法对淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性的抑制作用,分析该方法对淋巴细胞的灭活作用。方法实验分为实验组(n=3):从全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于亚甲蓝终浓度为3μmol/L的PBS缓冲液中,注入PVC小袋内(660 nm处透光率为64%),于35 000 lux光照度的荧光下照射50 min;光照组(n=3):相同来源的淋巴细胞重悬于不含亚甲蓝的PBS缓冲液中,将其注入PVC小袋内并于35 000 lux光照度的荧光下照射50 min;对照组(n=3):为相同来源、重悬于不含亚甲蓝的PBS缓冲液中且不接受光照处理的淋巴细胞。以植物血凝素(PHA)同时刺激3组细胞,用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测淋巴细胞增殖活性,计算亚甲蓝光化学处理对淋巴细胞的增殖抑制率;细胞因子分泌活性采用酶联免疫试剂盒检测;显微镜观察细胞形态及增殖集落。结果与对照组比较,实验组(亚甲蓝光化学处理)培养3、4、5 d后对PHA刺激的增殖抑制率分别为89.31%,100%及94.39%,其TNF-α、IFN-γ、IL-10的分泌量均较对照及光照组有极明显的降低(P<0.05);IL-4的分泌量较光照组显著降低(P<0.01);镜下照片显示,实验组经PHA刺激后仅有少量细胞集丛,与对照组及光照组增殖集落相比增殖抑制效应明显。结论亚甲蓝光化学法可有效抑制淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性,提示该方法预防输血相关的移植物抗宿主病(TA-GvHD)的有效性与可行性。

造血干细胞移植中的输血相关问题

在造血干细胞移植预处理后到造血重建这一段时间内,由于移植患者的骨髓重度抑制,引起全血细胞极度低下,因而可导致贫血、出血和严重感染,输血液制品便成为此时间段帮助患者度过造血抑制期的重要支持治疗措施。

输血相关性移植物抗宿主病

输血相关性移植物抗宿主病(TA-GVHD) 是严重危及受者生命, 与输血密切相关的一组疾病, 其发生的条件为输入的血液中含有一定数量的具有免疫活性的淋巴细胞, 供体与受体之间存在组织相容性及受者的免疫功能低下。供、受体淋巴细胞相互作用, 激活并使供者的T细胞克隆性扩增, 导致细胞因子释放, 继而损伤受者的细胞和组织, 典型的临床表现有发热、皮疹、肝炎、腹泻和全血细胞减少。本病虽少见但其病死率高达90%以上。输血前, 将血液或血细胞进行γ-射线或紫外线照射, 可预防TA-GVHD的发生。

输血相关的移植物抗宿主病研究进展

输血相关的移植物抗宿主病(TA-GVHD)是严重危及受者生命、与输皿密切相关的一组疾病,至今尚无有效的诊断和治疗手段。本文就TA—GVHD的发病机制、易感因素、诊断及防治作一综述。

^(60)Co辐照血红细胞CR_1分子数目的变化

目的 :研究不同剂量60 Coγ射线辐照全血在保存期内红细胞CR1分子数目的变化。方法 :应用酶联法定量测定经 15 35GY五个照射剂量辐照全血在保存期内红细胞CR1分子数目。结果 :照射后 1d ,15 2 5GY剂量组红细胞CR1分子数目相互间比较及分别与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 ) ;经 30、35GY辐照红细胞CR1分子数目分别与其他剂量组和对照组比较有明显差异 ( P <0 0 5 0 0 1)。另外 ,随着保存期的延长 ,各剂量组和对照组红细胞CR1分子数目呈阶梯式下降 ,尤其在照射后 3d ,30和 35GY剂量组红细胞CR1分子数目接近于照射后 7d水平 ,二者相互比较无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 :在一定范围内 ( 15 2 5GY) 60

输血相关的移植物抗宿主病研究的新进展

输血相关的移植物抗宿主病(TA-GVHD)至今仍无有效的治疗手段。本文就TA-GVHD易感人群的新认识,TA-GVHD发病机理和诊断技术以及TA-GVHD的预防做一文献综述。

采用^(137)CSγ射线辐照灭活红细胞血液制品中大肠杆菌的实验研究

目的探讨不同剂量γ射线辐照对红细胞血液制品中大肠杆菌的灭活作用,确定红细胞血液制品灭菌的最佳辐照剂量。方法制备含102-106不同数量级大肠杆菌的红细胞血液制品,应用强度为0、15、20、25、30和35Gy的γ射线进行照射,并于照射后0、7、14d检测血液中大肠杆菌的含量。结果红细胞血液制品经照射后大肠杆菌数量发生了不同程度的改变,当细菌量≤103cfu/ml时,25Gy的γ射线强度足以灭活样本内的所有细菌。结论25Gy的γ射线辐照剂量能有效灭活红细胞血液制品中的细菌,是一种安全有效的红细胞血液制品灭菌剂量。

25～45Gyγ射线辐照对红细胞制品质量的影响

目的 研究不同剂量辐照对红细胞的活性及功能的即刻损伤及保存损伤 ,确定辐照血液的保存时间。方法 将CPDA 全血 4 0 0ml分成 4组 ,于采血后 1d进行 0 (为对照组 )、2 5、35、4 5Gyγ射线辐照。在辐照后 0、4、7、1 4、2 1、2 8、35d取样测定红细胞活性、功能指标。结果 0～ 35d保存过程中 ,①红细胞功能 :各辐照组的 2 ,3 DPG含量与对照组比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;②红细胞活性 (ATP含量 ) :2 5Gy辐照组在 35d保存过程中与对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;35、4 5Gy组分别于 35d(84 .7% )及 2 8d(83.6 % )起低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③红细胞脆性 :红细胞最小抵抗力 ,2 5、35、4 5Gy组分别自 35、2 8、2 1d起低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;红细胞最大抵抗力 ,保存过程中 2 5Gy组与对照组差异无显著性 (P >0 0 5 ,35、4 5Gy组分别自 35及 1 4d起低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;④游离K+ :2 5Gy组自辐照后 1d ,35、4 5Gy组自辐照后 0d起即高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;K+ 含量与剂量呈正相关性 (r为 0 .96 6～ 0 .999) ;⑤游离血红蛋白 :在保存过程中显示出一定的剂量关系 ,但差异尚无统计学意义。结论 辐照对红细胞有一定的损伤 ,损伤程度与剂量有一定的相关性 ,但总体来说损伤不大 。

输注脾细胞建立输血相关的移植物抗宿主模型

目的探讨输注同种脾细胞建立小鼠输血相关的移植物抗宿主(TA-GVHD)模型及其特点。方法分离C57BL/6(H-2b)脾细胞,分别经静脉输注给Balb/c(H-2d)裸鼠与F1代(C57BL/6×Balb/c H-2b/d),建立输血相关的移植物抗宿主模型。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein diacetate succini midyl ester,CFSE)标记供者脾细胞,通过流式细胞仪分析供者细胞在受者体内的增殖;免疫组化分析供者脾细胞survivin的表达;检测Balb/c裸鼠体内抗供者抗体及IL-10浓度;分析皮肤、小肠、肝脏的病理变化。结果输注同种脾细胞成功建立急性TA-GVHD模型。受者脾脏及外周可以检测到标记后增殖的供者细胞。小鼠的病理改变主要出现在肝脏,浸润细胞早期表达survivin。小肠及皮肤未见明显的病理改变。TA-GVHD裸鼠第7天IL-10、抗-Balb/c显著升高。结论输注同种脾细胞可以建立TA-GVHD模型,并具有简单、快速、稳定的特性,为诊断、治疗GVHD提供了良好的模型。

预防输血相关性移植物抗宿主病发生的研究进展

输血是医疗救治的重要手段,但同时存在着多种并发症。输血相关性移植物抗宿主病(TA-GVHD)是其中之一,该病发生率为0.5%左右,死亡率却超过90%。由于TA-GVHD一旦发生,可逆转和治愈的几率低,所以TA-GVHD的预防显得尤为重要[1]。目前,预防TA-GVHD的主要方法有三种,一是利用白细胞过滤器进行去除白细胞后的输血[2];二是伽马血液辐照仪对血液制品进行伽马辐照,使血液制品中的T淋巴细胞失活,从而不再攻击人体[3];三是通过修改核酸,干扰病原体和白细胞的复制,抑制T淋巴细胞增殖。本文针对输血过程中可能发生的TA-GVHD,阐述了其发病机制、临床表现,着重探讨了目前预防TA-GVHD发生的三种方法,以期为减少TA-GVHD的发生提供参考。

血液辐照仪的安装确认

目的确保血液辐照仪应用中的辐射安全。方法分析项目引进的血液辐照仪组成特点、辐射源项目和防护结构,按国家相关标准分别对其未运行状态和运行状态下的不同位点进行监测。结果该血液辐照仪采用铯-137发射的γ射线作血液辐照,对职业人员辐射所致最大个人有效剂量(年)HE为2.7×10^(-5)m Sv/a;对公众所致的HE为6.6×10^(-5)m Sv/a,均远低于剂量管理目标值;运行与未运行状态测量值无明显变化。结论项目引进的的血液辐照仪符合《电离辐射防护与辐射源安全基本标准》(GB18871-2002)要求,项目引进和使用安全有效。

γ射线辐照机采单个供者血小板的损伤评估及意义

目的选择适当剂量γ射线辐照机采单个供者血小板(SDP),不损伤SDP且预防输血相关移植物抗宿主病(TA-GVHD)发生。方法选择13份SDP样本并均分为3组,2组分别选择30Gy和40Gy的γ射线辐照,未辐照且同温度条件下样本为对照组,检测乳酸脱氢酶(LDH)值等并比较。结果3组间LDH检测均无显著性差异,血小板形态、聚集程度等均无显著性变化,pH检测符合SDP保存条件。结论LDH等相关检测表明,选择30-40Gy辐照剂量对SDP无显著性损伤,灭活淋巴细胞效果显著且时间较短。

核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞灭活作用的研究

目的研究核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞的增殖及细胞因子分泌活性的抑制作用,探讨该方法对淋巴细胞凋亡的诱导作用。方法实验分为实验组:从随机采集的全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于核黄素终浓度为100μM的自体血浆中,注入PVC袋,在波长为420 nm的可见光下照射,总照射剂量为40 J/cm2;对照组:使用相同来源的淋巴细胞,悬浮于不含核黄素的自体血浆中,不进行光照处理。用植物凝集素(PHA)同步刺激两组淋巴细胞,用BrdU细胞增殖检测试剂盒检测淋巴细胞的增殖活性,并计算核黄素光化学法对淋巴细胞的增殖抑制率;用酶联免疫试剂盒检测淋巴细胞细胞因子的分泌量;使用Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒和流式细胞技术检测细胞凋亡。结果与对照组比较,经过核黄素光化学法处理的实验组淋巴细胞对PHA刺激的增殖抑制率为(94.69±7.61)%;实验组淋巴细胞接受PHA刺激后,细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌量与对照组比较分别降低了(89.54±22.75)%、(77.83±22.3)%和(88.57±15)%,IL-4的分泌量较对照组差异不明显;流式细胞术检测结果表明,实验组绝大多数淋巴细胞发生了凋亡,其早期凋亡率和晚期凋亡或坏死率均明显高于对照组。结论核黄素光化学法能够抑制人外周血淋巴细胞的增殖和一些细胞因子的分泌,同时可诱导淋巴细胞凋亡。该方法有望成为预防TA-GvHD的新途径。