一种新的中心体蛋白质TACP1与有丝分裂激酶Nek2A相互作用的研究

目的:研究一种新的中心体蛋白TACP1蛋白与有丝分裂激酶Nek2A在有丝分裂期的相互作用关系。方法:在大肠杆菌中表达和纯化的Nek2A305-446蛋白与293T细胞中表达的TACP1蛋白,进行体外pull-down实验;TACP1和Nek2A两种质粒共转染293T细胞,用TACP1多抗进行免疫共沉淀实验;Hela细胞共转TACP1和Nek2A,利用间接免疫荧光的方法在荧光显微镜下观察两种蛋白的亚细胞定位。结果:TACP1条带可以出现在大肠杆菌中表达和纯化的Nek2A305-446泳道中,而对照组中无TACP1条带。TACP1抗体可以将细胞裂解液中的Nek2A蛋白连同TACP1蛋白一起沉淀下来,而对照组免疫前的兔血清则不能将TACP1或Nek2A沉淀下来。在Hela细胞有丝分裂中期,TACP1和Nek2A都呈点状定位于中心体,两者信号叠加后也重合。结论:中心体蛋白TACP1在体内、体外能与有丝分裂激酶Nek2A相互作用,两者在细胞有丝分裂期都定位于中心体。

小麦ent-柯巴基焦磷酸合酶基因TaCPS1的克隆与荧光定量分析

ent-柯巴基焦磷酸合酶(ent-copalyl diphosphate synthase,CPS)是植保素合成途径中的关键酶。本研究利用mRNA差异显示技术,从小偃麦异附加系种质SN6306中得到一个与抗白粉病相关的Ta CPS1基因。该基因ORF长2 394 bp,编码797个氨基酸。对其进行生物信息学分析表明,该序列推导的蛋白无信号肽,主要由亲水性氨基酸组成,可能存在于细胞质中;其具有类异戊二烯合成酶超家族的保守结构域。荧光定量分析结果表明,SN6306中的Ta CPS1基因在白粉病菌E09诱导处理72 h时,表达量上调了大约45倍,但感病亲本烟农15(YN15)基本不受诱导。在茉莉酸甲酯诱导下,Ta CPS1基因表达量升高将近15倍;在水杨酸诱导下,Ta CPS1基因表达量升高将近2.4倍。推测Ta CPS1基因可能参与小麦抗白粉病机制中的水杨酸和茉莉酸激素调节途径。