成年起病-低钙血症-低PTH血症-TBX1移码缺失

甲状旁腺功能减退症(hypoparathyroidism, HP)是一种罕见的内分泌疾病,是由甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)合成或分泌缺乏引起的一组临床综合征,其临床特征包括低钙血症、高磷血症、神经肌肉兴奋性增高和软组织异位钙化。本文报道1例成年起病的HP患者,经基因检测发现TBX1移码缺失(NM_080647,exon3:c.161_186del/p.A54Afs*105),考虑诊断为DiGeorge综合征(DiGeorge syndrome, DGS)相关HP,提示临床医生对患者应进行仔细的体格检查和病史询问,有提示时,即使是成年起病的非手术性HP患者,也应考虑进行相关的基因筛查。

TBX1基因在常染色体显性遗传性多囊肾肾组织中的表达及意义

目的通过检测常染色体显性遗传性多囊肾(ADPKD)患者肾组织中TBX1基因的表达,探讨其在多囊肾发病中的分子遗传学机制。方法 ADPKD多囊肾肾组织11例为病例组;正常肾组织7例为对照组。实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾组织TBX1 m RNA表达;Western blot及免疫组化法检测TBX1蛋白表达。采用SPSS 13.0软件比较两组差异。结果ADPKD多囊肾肾组织TBX1 m RNA及蛋白表达较对照组均明显增强,差异有统计学意义(P<0.01);TBX1在对照组肾组织的肾小管上皮细胞中有微量表达,而在多囊肾囊肿组织上皮细胞中有较强的表达。结论在ADPKD发病过程中TBX1基因过度表达可能是ADPKD发生的一种潜在致病机制。

Tbx1基因功能下调影响斑马鱼Tbx20和Tbx2表达

目的采用吗啡啉修饰反义寡核苷酸显微注射方法下调斑马鱼Tbx1基因表达,研究斑马鱼Tbx1基因功能下调对其他两个T盒基因Tbx20和Tbx2表达的影响。方法采用吗啡啉修饰的反义寡核苷酸显微注射方法抑制斑马鱼Tbx1基因表达,分别将2.5、5、8、10 ng吗啡啉反义寡核苷酸在斑马鱼0-4细胞期注入胚胎,并构建Tbx20,骨形成蛋白2b(Bmp2b)和Tbx2反义RNA探针,进行整体原位杂交,观察Tbx1基因下调对Tbx20、Bmp2b及Tbx2表达的影响。结果Tbx1吗啡啉寡核苷酸显微注射组胚胎表现出鳃弓、耳囊、心血管系统和胸腺的发育异常。Tbx1基因下调导致Tbx20的表达出现改变,Tbx20在心脏的表达与对照组相比明显下调,神经元的表达范围明显缩小;Tbx1基因功能下调会导致Bmp2b在心脏和咽囊的表达减低,Bmp2b在后部咽囊的表达较前部咽囊减低得更为明显;Tbx1基因功能下调胚胎,Tbx2在鳃弓的表达模式发生改变,48 hpf,Tbx2在鳃弓的表达出现从后向前逐渐减低,鳃弓的表达范围较对照组明显缩小。结论Tbx1在发育过程中,会对其他T盒基因,如Tbx20和Tbx2具有激活或抑制的调控作用。Tbx1对Tbx20的作用可能是通过影响Bmp2b的途径,继发地影响Tbx20的表达。Tbx1基因功能下调,会改变Tbx2在鳃弓的表达模式。

TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的相关研究

心脏圆锥动脉干畸形是婴幼儿期常见的青紫型先天性心脏病,主要由于胚胎期心脏发育异常所致。现综述TBX1基因在心脏发育过程中的作用以及可能的作用机制等国内外近几年的研究进展,旨在揭示TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的关联。

肺动脉闭锁患儿TBX1缺失分析

肺动脉闭锁（pulmonary atresia,PA）是先天性心脏病中的一种复杂的心脏圆锥隔畸形,发病率为活产婴儿的0.42/1万,它是圆锥动脉干的正常发育受到影响所致,多合并房间隔缺损（atrial septal defect,ASD）、室间隔缺损（ventricular septaldefect,VSD）、右心发育不良、主动脉骑跨、动脉导管未闭（PDA）等多种心内外畸形。

TBX1基因在透明细胞型肾细胞癌组织中的表达及意义

目的通过检测TBX1基因在透明细胞型肾细胞癌(cc RCC)癌组织中的表达,探讨该基因在cc RCC发病中的分子遗传学机制。方法应用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测12例cc RCC癌组织及对应的癌旁正常肾组织中TBX1 m RNA表达;Western blot法检测肾组织TBX1蛋白表达。结果与癌旁正常肾组织比较,TBX1 m RNA及蛋白表达水平在cc RCC癌组织中均明显增强(均P<0.05)。结论 TBX1基因过度表达可能为cc RCC发生的一种潜在致病机制。

外源性视黄酸调节胚鼠心肌TBX1基因表达的研究

目的观察外源性视黄酸(RA)对胚鼠心肌细胞TBX1基因mRNA水平表达的影响。方法分离培养胚鼠心肌细胞,经不同浓度的RA处理后,采用RT-PCR方法分别检测胚鼠心肌细胞TBX1基因在mRNA水平表达有无变化。结果①TBX1基因在胚鼠心肌细胞中有基础表达,在予以RA刺激后,1×10-8mol/LRA和1×10-7mol/LRA使细胞内TBX1基因mRNA表达分别增加54.94%和89.53%,而1×10-6mol/LRA使TBX1基因mRNA表达降低47.94%。②在最适浓度条件下(1×10-7mol/LRA),在予以RA刺激8h、12h、16h后TBX1基因mRNA表达水平分别增加1.65倍、1.35倍和1.04倍,差异有显著意义。结论外源性视黄酸在一定浓度下可以促进胚鼠心肌TBX1基因mRNA的表达,为进一步研究先天性心脏病的遗传基础提供了依据。

TBX1基因启动子活性的初步研究

目的研究心脏发育关键转录因子T-box家族成员TBX1基因启动子的活性并确定关键区域。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TBX1基因转录起始位点上游启动子不同长度片段,酶切连接至pGL3-Basic报告基因载体,构建含不同长度TBX1基因启动子调控荧光素酶的报告基因。利用FuGene HD转染试剂将不同长度的TBX1基因启动子调控荧光素酶的报告基因载体瞬时转染293T、COS7细胞,42 h后经荧光素酶检测,比较不同长度TBX1基因启动子的活性。结果不同长度TBX1基因启动子活性不同,其中5 kb和1.2 kb的TBX1基因启动子活性较高;TBX1基因启动子在不同细胞中表现的活性不同,COS7细胞中5 kb的基因启动子活性最高,297T细胞中1.2 kb的基因启动子活性最高。结论 TBX1启动子在转录水平上可以驱动报告基因表达,不同长度启动子的活性不同,推测转录起始位点上游1.2 kb区域是TBX1基因启动子关键区域。

Shh和Fgf8介导的视黄酸对22q11.2微缺失综合征心肌细胞TBX1表达的影响

目的探讨Shh和Fgf8介导的视黄酸(RA)对22q11.2微缺失综合征中心肌细胞TBX1基因的调节机制。方法出生1～2 d SD乳鼠26只,分离培养乳鼠心肌细胞,48 h后用流式分选方法分选纯化心肌细胞,纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为空白对照组;阴性对照组;处理1组:1×10-7mol/L RA;处理2组:3×10-7mol/L RA;处理3组:5×10-7mol/L RA。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Shh、Fgf8 mRNA和蛋白相对量表达的变化。结果Shh和Fgf8在乳鼠心肌细胞有少量的表达,给予RA刺激后,与空白对照组比较,3×10-7mol/L RA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加1.51倍和1.10倍(t=11.328,15.598 Pa<0.05),5×10-7mol/LRA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加2.21倍和2.38倍(t=13.761,18.982Pa<0.05);3×10-7mol/L RA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加2.50倍和0.80倍(t=14.368,24.226 Pa<0.05),而5×10-7mol/LRA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加3.48倍和2.04倍(t=23.926,26.364 Pa<0.05)。结论RA可以上调乳鼠心肌细胞Shh和Fgf8的表达,且呈剂量依赖效应。Shh和Fgf8参与了RA对心肌细胞TBX1的调节过程。

外源性视黄酸调节乳鼠心肌细胞Tbx1的表达

目的研究视黄酸(RA)对心肌细胞Tbx1基因表达的影响。方法分离培养乳鼠心肌细胞,经不同浓度的RA处理后,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Tbx1基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果Tbx1基因在乳鼠心肌细胞有少量基础的表达,在予以RA刺激后,1×10-7mol/LRA使细胞内Tbx1基因mRNA和蛋白含量表达分别增加1.51倍和1.10倍(P均<0.05),1×10-6mol/LRA使细胞内Tbx1基因mRNA和蛋白含量表达分别增加2.21倍和2.38倍(P均<0.05)。结论RA可以上调乳鼠心肌细胞Tbx1的表达,且此作用呈剂量依赖效应。

Tbx1基因和DiGeorge综合征

Tbx1基因属于T-box基因家族。Tbx1蛋白通过与DNA上的T盒结合调控基因的表达。Tbx1位于人的22q11.2和小鼠的16号染色体。胚胎发育过程中,Tbx1参与了咽弓内胚层的发育和神经嵴细胞的迁移和分化。小鼠和斑马鱼的研究均表明Tbx1的缺失将导致来源于咽弓的结构发育异常。Tbx1基因是DiGeorge综合征最重要的候选基因。Shh,Fgf,视黄酸可以对Tbx1基因的功能进行调控。

心脏圆锥动脉干畸形患儿TBX1C基因3'UTR区域突变分析

目的筛查心脏圆锥动脉干畸形(CTHD)患者中TBX1C基因3'UTR区域存在的基因突变,探讨该区域突变影响TBX1C基因表达的可能机制。方法选取无22q11.2区微缺失的52例CTHD患儿(CTHD组)和89名健康儿童(对照组)作为研究对象,PCR扩增TBX1C基因完整3'UTR区序列,所有扩增片段均进行双向测序;将测序结果与GenBank中TBX1C 3'UTR序列(NM 080647.1)进行比对,筛查出可能存在的基因突变;PicTar和TargetScan在线预测软件预测可能与TBX1C基因3'UTR区结合的微RNA(miRNA),分析TBX1C基因3'UTR区突变对miRNA调控TBX1C基因表达的影响。结果在CTHD组中发现1例突变c.*164_*165insC,即在距离终止密码子164位与165位核苷酸之间插入1个胞嘧啶;该突变在对照组中不存在,其他研究中未见报道,为新发突变;预测结果显示10种miRNA能与TBX1C基因3'UTR区结合,该突变并不位于10种miRNA与TBX1C3'UTR的结合区域。结论 TBX1C基因3'UTR区域存在新发突变c.*164_*165insC,该突变可能改变TBX1C3'UTR区域与miRNA结合的空间构象,进而影响miRNA对TBX1C基因表达的调控作用。

中国先天性心脏病患者TBX1基因突变的研究

目的检测中国先天性心脏病患者TBX1基因突变以探讨TBX1基因突变与非综合征心脏畸形发生的相关性。方法应用聚合酶链反应-单链构像多态性(PCR-SSCP)技术对73例先天性心脏病患者和70例健康人样本的TBX1基因进行突变分析。结果先天性心脏病患者和对照组中均检测到928G→A核苷酸变异和933A→G核苷酸变异,经χ2检验,928G→A和933A→G核苷酸变异的频率在先天性心脏病患者和对照组之间差异均无统计学意义。结论在非综合征心脏畸形的发病机制中,TBX1基因突变可能不占主导地位。

TBX1与心脏发育

哺乳动物的心脏发育是一个复杂的过程,受转录因子精确的时空调控。TBX1在胚胎发育中参与咽弓内胚层的发育、咽弓动脉的形成、神经嵴细胞的迁移和分化,是胚心发育过程中关键性转录因子,多种先天性心脏畸形的发生与其有关。本文就心脏的发育,TBX1的功能及可能作用机制做一综述。

TBX1基因影响22q11.2微缺失综合征表型的作用机制研究进展

22q11.2微缺失综合征是指人类的第22号染色体长臂近端微片段22q11.21⁃q11.23缺失引起的遗传综合征。TBX1属于T⁃box家族,位于染色体的22q11.2,研究表明,TBX1单倍剂量不足是导致22q11.2微缺失综合征的主要原因,它对其表现型的出现具有重要意义。因此,文章就TBX1对心脏病变、肺动脉的表型、胸腺发育、咽腭发育、淋巴管的生成以及甲状旁腺肿瘤低增殖性的作用机制研究进展进行综述。

TBX1基因可能通过调控Tgfb2基因的表达参与心脏发育及先天性心脏病的发生

目的通过检测TBX1基因干扰后转化生长因子β2基因(Tgfb2)表达的变化探讨TBX1基因参与心脏发育及先天性心脏病发生的可能途径。方法根据处理因素不同,将细胞分为NC-siRNA组和TBX1-siRNA组。在大鼠胚胎心肌细胞H9C2中转染TBX1-siRNA,采用实时定量PCR法(qRT-PCR)检测干扰效率;收集转染TBX1-siRNA 48h后的H9C2细胞系,提取总RNA,qRT-PCR法检测干扰后Tgfb2基因mRNA的表达水平。结果(1)qRT-PCR检测心肌细胞TBX1 mRNA的表达:H9C2细胞转染TBX1-siRNA 48h后为0.22±0.02,与NC-siRNA(0.99±0.02)比较,TBX1mRNA表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)qRT-PCR检测心肌细胞Tgfb2mRNA的表达:H9C2细胞转染TBX1-siRNA48h后为2.19±0.01,与NC-siRNA(1.00±0.01)比较,Tgfb2mRNA表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TBX1基因表达下调可能通过调控Tgfb2基因的表达参与心脏发育及先天性心脏病的发生。

老年皮肤基底细胞癌患者miR-451、TBX1表达及其与预后的相关性

目的探讨老年皮肤基底细胞癌(BCC)患者微小RNA-451(miR-451)、T结构域转录因子(TBX)1表达及其与预后的相关性。方法收集老年BCC患者85例,根据其病理分型分为:结节溃疡型组38例、色素型组27例、浅表型组15例、硬斑病样或纤维化型组5例。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BCC组织标本中miR-451、TBX1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测BCC组织标本中TBX1表达情况;收集BCC患者临床病理及随访资料,分析miR-451、TBX1表达与BCC患者临床病理特征及预后之间的关系。结果与结节溃疡型组相比,色素型组、浅表型组、硬斑病样或纤维化型组组织中miR-451表达水平显著降低(P<0.05),TBX1 mRNA表达水平、阳性表达率显著升高(P<0.05);与色素型组、浅表型组相比,硬斑病样或纤维化型组miR-451表达水平显著降低(P<0.05),TBX1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。miR-451、TBX1在BCC组织中的表达与患者年龄、皮损直径无关(P>0.05),与组织病理分型、转移情况显著相关(P<0.05)。Pearson相关分析显示,BCC组织中miR-451与TBX1表达呈负相关(r=-0.618,P<0.05)。Kaplan-Meier及Log-rank法分析显示,miR-451低表达患者无病生存率(80.95%)显著低于miR-451高表达患者(88.37%),TBX1阳性表达无病生存率(83.72%)显著低于TBX1阴性表达患者(85.71%,P均<0.05)。结论BCC组织中miR-451、TBX1表达与组织病理分型、转移有关,且二者存在负相关,可作为BCC患者预后预测的潜在指标。

1例甲状旁腺功能减退症的临床特征及遗传学特征分析

回顾性分析唐山市妇幼保健院小儿内分泌科收治的1例甲状旁腺功能减退症患儿的临床资料、实验室检查及基因诊断结果。患儿,男,11岁,由“无热抽搐1个月”来诊,实验室检查可见低钙血症、甲状旁腺素减低、心电图Q-T间期延长、颅内钙化,诊断甲状旁腺功能减退症明确,全外显子检测结果显示TBX1基因:c.1009G>A(错义变异、新生变异),结合临床表现考虑为致病基因。儿童甲状旁腺功能减退症常表现为惊厥、手足搐搦,并因遗传学病因不同而伴随相应的症状,基因检测不仅有利于精准的遗传学病因诊断,还有助于深入认识临床表型与基因型的对应关系,提高临床医生对该疾病的认识。

TBX1基因T350M多态性与法洛四联症的相关性

目的探讨TBX1基因T350M多态性与法洛四联症（TOF）的相关性。方法选择TOF患儿112例（TOF组）。其中男69例,女43例;年龄（4.27±1.93）岁。200例健康体检儿童作为健康对照组。其中男102例,女98例;年龄（5.68±2.17）岁。采用病例-对照研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性结合DNA测序进行TBX1基因T350M位点（NCBI SNPID：rs4819522）多态性检测,分析基因型频率和等位基因频率在病例组和健康对照组的分布,比较不同基因型和等位基因与TOF患病风险的关系。应用SPSS13.0软件进行分析。结果在所有312例样本中,TBX1基因T350M多态位点存在C/T多态。T350M多态位点基因型频率在TOF组与健康对照组中的分布存在统计学差异（χ2=8.220,P=0.016）,等位基因频率在TOF组与健康对照组中的分布亦存在显著性差异（χ2=9.544,P=0.002）,且T等位基因携带者患TOF的风险高于C等位基因携带者（OR=1.746,95%CI1.224~2.490）。结论 TBX1基因T350M多态性与TOF具有明显的相关性,具有T等位基因的个体TOF患病风险增高,TBX1基因可能是TOF的遗传易感基因。

TBX1基因多态性与先天性心脏病的相关性

目的探讨TBX1基因多态性与先天性心脏病(先心病)的相关关系。方法选择2004-10—2005-03在哈尔滨医科大学附属第二医院住院的先心病患儿99例,对照组96名(与先心病患儿年龄相近的健康儿童)。应用小剂量DNA提取技术及采用ABI Prism SNaPshot方法,检测了先心病患儿和对照组儿童的TBX1基因多态性。结果经χ2检验,TBX1基因各基因型频率在对照组、先心病组之间均无显著性差异(P>0·05);各等位基因频率在两组人群中差异均无显著性意义(P>0·05)。结论未发现TBX1基因多态性与先天性心脏病之间存在相关关系。