水疱性口炎病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用

本研究建立荧光定量RT-PCR鉴别检测水疱性口炎病毒的方法。针对Gen Bank登录的水疱性口炎两血清型-新泽西型(VSV-NJ)和印第安纳型(VSV-IND)的L基因保守区,设计1对引物和2条探针。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了Taq Man荧光定量RT-PCR快速检测VSV的方法。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3 h以内,具有很好的特异性和重复性,可以实现水疱性口炎病毒的快速检测分型。通过对342份临床样品进行检测,结果表明,所建立的检测方法适用于样品中水疱性口炎病毒的直接检测。

HIV-1流行株囊膜假病毒系统的构建及广谱中和抗体中和效价的测定

人类免疫缺陷病毒主要感染人CD4+T细胞与单核-巨噬细胞,造成高致命性的免疫系统衰竭。近年来,抗HIV-1的广谱中和抗体被用于HIV-1感染的阻断和临床免疫治疗效果显著。然而,针对HIV-1抗体中和活性评价假病毒谱系仍有待补充,本研究旨在构建一种易于量化,生物安全性高的HIV-1流行毒株假病毒谱系,用于定量HIV-1中和抗体抗病毒活力。研究从10种亚型中选取了24株代表性HIV-1国内外流行毒株,构建囊膜表达质粒并与囊膜缺失骨架质粒pNL4-3-copGFP-ΔENV共转染制备慢病毒。通过定量p24抗原和测定TCID50分别获得病毒物理和活性滴度。以本实验室表达、纯化的HIV广谱中和抗体VRC01、3BNC117和N6经多梯度稀释后,分别与200 TCID50的假病毒孵育后,感染敏感指示细胞TZM-bl。随后通过测定荧光素酶活性定量假病毒的感染水平并计算出抗体的中和活性。结果表明:三种广谱中和抗体均能中和24种假病毒并计算获得了IC50。本研究成功建立了24种假病毒,可为HIV的抗体筛选功能验证和疫苗免疫效果提供中和活性评价平台。

金刚烷胺抑制牛病毒性腹泻病毒复制的研究

为了在细胞水平测试金刚烷胺对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的抑制作用,试验采用细胞培养技术和CCK8法测定不同浓度金刚烷胺对牛肾原代（MDBK）细胞的毒性作用,确定药物的安全浓度。将感染BVDV的MDBK细胞用金刚烷胺处理,通过荧光定量PCR方法检测金刚烷胺对BVDV的抑制作用。结果表明：金刚烷胺的浓度为500μmol/L时,对MDBK细胞有很强的毒性;当浓度低于125μmol/L时,基本对细胞无明显毒性作用。BVDV的半数致细胞病变量（TCID_（50））为1×10^（-2.5）/mL。在浓度为250,166,125,100μmol/L的金刚烷胺的作用下,病毒的相对表达量分别为4.17%、4.19%、7.51%、21.69%。说明金刚烷胺在合理浓度下对动物体细胞无显著毒性,且具有抑制BVDV复制的作用。