副溶血性弧菌溶血相关毒素基因原核融合表达载体的构建

目的:实现副溶血性弧菌溶血相关毒素TRH基因在大肠杆菌中的融合表达,以获得纯度较高的蛋白产物。方法:构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX—3X/DE3),并在31℃条件下,用0.6mmol/L IPTG诱导表达。用SDS-PAGE分析蛋白表达。结果:PRⅡ在上述条件下诱导后,目的蛋白呈高效、可溶、融合性表达。薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量最高,SDS-PAGE表明,融合蛋白的相对分子量(Mr)为49Kda,与预期结果一致。结论:trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础。