Tinospora crispa extract inhibits MMP-13 and migration of head and neck squamous cell carcinoma cell lines

Objective: To investigate the effect of Tinospora crispa(T. crispa) extract on matrix metalloproteinase 13(MMP-13) expression and cell migration. Methods: The cytotoxicity of T. crispa extract was examined by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay on head and neck squamous cell carcinoma(HNSCC) cell lines. The effect on expression of MMP-13 was analysed by RT-PCR and ELISA. The migration was assessed by wound healing assay. Results: MMP-13 m RNA was highly expressed in the metastatic human HNSCC cell lines, HN22 and HSC-3. T. crispa extract at a concentration of 100.0 μg/m L caused about 50% reduction of cell survival. T. crispa extract at a non-toxic concentration of 12.5, 25.0 and 50.0 μg/m L signii cantly suppressed MMP-13 m RNA expression and secreted MMP-13 in both HN22 and HSC-3. The expression of tissue inhibitors of metalloprotease by HSC-3 cells was attenuated by 25.0 and 50.0 μg/m L of T. crispa extract. Addition of the extract to cells in a wound healing assay showed inhibition of cell migration by HN22 cells. Conclusions: These data suggest that T. crispa could be considered as a potential therapeutic drug to prevent metastasis of HNSCC.

酪氨酸激酶抑制剂A77-1726阻断IL-13介导STAT6磷酸化和c-fos表达

目的研究酪氨酸激酶抑制剂A77-1726对IL-13介导Dami细胞STAT6磷酸化和c-fos表达的影响,为A77-1726的临床应用和IL-13的信号通路研究提供新的实验依据。方法提取Dami细胞总RNA,RT-PCR检测c-fos mRNA表达。提取Dami细胞总蛋白,Western blot检测磷酸化STAT6和c-fos蛋白表达。凝胶定量软件Quantity One检测电泳条带光密度,统计学分析。结果100μg·L-1IL-13作用Dami细胞,可见STAT6磷酸化,50μmol·L-1A77-1726可阻断IL-13诱导的Dami细胞STAT6磷酸化。IL-13作用Dami细胞,c-fos mRNA表达增高(P<0.05),50μmol·L-1A77-1726阻断了IL-13诱导的Dami细胞c-fos mRNA的表达(P<0.05)。IL-13促进Dami细胞c-fos蛋白表达(P<0.05),50μmol·L-1A77-1726作用Dami细胞,阻断了IL-13诱导的c-fos蛋白表达(P<0.05)。结论酪氨酸激酶抑制剂A77-1726阻断了IL-13介导的白血病Dami细胞STAT6磷酸化和c-fos表达,JAK/STAT6通路是IL-13信号通路之一,IL-13诱导的c-fos表达与STAT6通路相关。

白细胞介素-13对巨核细胞系-HEL细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的 :研究重组人白细胞介素 - 13 (rhIL - 13 )刺激巨核细胞系 -HEL细胞的增殖是否与原癌基因c -mpl表达有关。方法 :用MTT比色法和RT -PCR法 ,分别观察了rhIL - 13对HEL细胞增殖的影响和对c -mplmRNA表达的影响。结果 :rhIL - 13促进了HEL细胞的增殖 ,上调了HEL细胞c-mplmRNA的表达。结论 :rhIL - 13促进巨核细胞系 -HEL细胞增殖 ,其部分机制可能是通过上调c -mpl的表达来实现。

沉默TRIP13位点对慢性淋巴细胞白血病患者细胞株生物学影响及通路机制

目的探讨甲状腺激素受体相互作用蛋白13(TRIP13)位点对慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者细胞株生物学影响及通路机制。方法选择2013年至2018年我院收治的80例门诊为CLL的患者设为研究组,同时选取同期80例体检健康者作为对照组。比较两组患者静脉血中CD19^+B淋巴细胞TRIP13信使核糖核酸(mRNA)相对表达量、干扰靶点TRIP13蛋白敲减效率及TRIP13干扰后JVM-2细胞凋亡率,观察JVM-2细胞慢病毒感染情况、TRIP13干扰后JVM-2细胞增殖能力及对凋亡相关蛋白的影响。结果研究组TRIP13mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.05);TRIP13干扰5d内干扰组JVM-2细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05);TRIP13干扰后干扰组JVM-2细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);TRIP13干扰后干扰组较对照组JVM-2细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、髓细胞增生原癌基因(Myc)蛋白表达下调,活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Caspase-3)表达上调(P<0.05)。结论 CLL患者体内TRIP13水平升高,TRIP13基因通过调控Bcl-2、Myc及Caspase-3信号通路诱导体内Bcl-2、Myc蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达上调,有望成为治疗CLL新的靶点。

Apelin-13诱导miRNA-21高表达促宫颈癌Caski细胞增殖

目的:观察在APJ内源性配体13环境孕育下宫颈癌Caski细胞微核糖核酸-21的表达及细胞的增殖能力;分析Apelin-13和miR-21对宫颈癌Caski细胞的作用及意义。方法:通过qRT-PCR检测miR-21mRNA的表达情况和western blot检测PDCD4和Caspase-3蛋白的表达情况。细胞增殖能力采用CCK-8检测。结果:Apelin-13诱导miR-21的高表达并靶向调控下游基因PDCD4和Caspase-3的表达,从而促宫颈癌Caski细胞增殖。结论:Apelin-13通过调控miR-21高表达可能在宫颈癌Caski细胞中起关键性作用。

煤尘抽提物诱发BALB/3T3A31-1-13细胞系形态转化的研究

本文用 BALB/3T3 A31-1-13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系.但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,如细胞生长迅速、接触抑制消失和停泊不依赖性生长等.本文结果看来支持煤矿工胃癌高发原因的煤尘假说。

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响

目的观察羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响。方法体外培养人肾上腺皮质癌SW-13细胞,随机分为干预组和对照组,干预组加入羟喜树碱使其终浓度为0.8μg/ml,对照组不加羟喜树碱,分别培养48 h后,采用台盼蓝拒染法观察羟喜树碱对SW-13细胞生长增殖的影响。结果光镜下可见干预组SW-13细胞数减少,死亡细胞数较多,干预组活细胞率明显低于对照组(P<0.05)。结论羟喜树碱可能具有抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖并促进其死亡的作用。

13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系的建立

为了在细胞水平上研究13/17罗伯逊易位猪群这一种质资源,试验采用组织块分离法对13/17罗伯逊易位杂合子猪、纯合子猪及正常核型家猪耳组织进行了分离培养,构建了3个成纤维细胞系,并对其进行了形态学、生长动力学、核型分析、绿色荧光蛋白报告质粒转染和微生物污染检测等生物学特性研究。结果表明:3种核型家猪细胞形态均为标准成纤维细胞形态,细胞内波形蛋白呈现阳性表达;细胞生长曲线均呈"S"型;杂合子猪细胞染色体2n=37所占比例为92.5%,纯合子猪细胞染色体2n=36所占比例为93.8%,正常核型家猪细胞染色体2n=38所占比例为96.3%;外源质粒能在细胞中进行稳定表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测结果呈阴性。说明本研究已成功建立13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系。

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80μmol/L)处理24,48,72h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P<0.01;TE-13:F=46.99,P<0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P<0.01;TE-13:r=0.925,P<0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P<0.01;TE-13:r=-0.703,P<0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P<0.01;TE-13:r=-0.753,P<0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.

miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义。方法选择21例行肾上腺皮质肿瘤手术患者的术后切除组织,其中肾上腺皮质腺瘤组织8份,其瘤旁正常组织8份,肾上腺皮质癌组织5份;另选人肾上腺皮质癌SW-13细胞系(SW-13细胞系)和裸鼠皮下移植瘤组织6份。采用RT-PCR技术检测各组织中的miR-214表达。结果与肾上腺皮质腺瘤组织和瘤旁正常组织比较,肾上腺皮质癌组织、SW-13细胞系、裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达明显降低(P均<0.01);与肾上腺皮质癌组织和SW-13细胞系比较,裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达降低(P<0.05)。结论 miR-214表达下调可能参与肾上腺皮质癌的发生、发展,深入探讨其功能和作用机制有重要意义。

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用。方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异。结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Cytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点。结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响。人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的CoⅡ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系。

佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞体外生长的影响

【目的】探讨佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、形态、细胞周期的影响。【方法】试验设试剂对照组、肿瘤细胞阴性对照组及5种不同浓度的促癌剂实验组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用;光镜下观测细胞形态学的改变;透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期的变化率。【结果】TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性。细胞周期发生G1→S期阻滞。【结论】TPA能抑制SKOV3细胞增殖,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长。

姜黄素、佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长的影响

目的:通过研究抑癌剂姜黄素(CCM)、促癌剂佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、细胞形态及细胞周期的影响,探讨肿瘤细胞SKOV3增殖抑制的效应机制。方法:采用MTT法测定CCM、TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率。光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变。流式细胞仪检测细胞周期。结果:TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性,细胞生长停滞于G1/S期。部分细胞出现凋亡形态学改变。TPA抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:CCM、TPA通过抑制细胞增殖,细胞周期发生停滞,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长。

4种刺激剂对小鼠腹腔巨噬细胞生成白细胞介素6的研究

用白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ＩＬ６）依赖细胞株Ｂ９的ＭＴＴ法，研究了４种刺激剂ＰＭＡ，Ａ２３１８７，ｆＭＬＰ和ＬＰＳ对小鼠腹腔巨噬细胞生成及分泌ＩＬ６的影响。分别检测了巨噬细胞培养上清液及胞溶部分ＩＬ６的含量。结果表明，ＰＭＡ（０１～１０μｍｏｌ·Ｌ－１），Ａ２３１８７（００１～１μｍｏｌ·Ｌ－１），ｆＭＬＰ（００２５～２５μｍｏｌ·Ｌ－１）均能促进巨噬细胞生成及分泌ＩＬ６，且有量效关系。ＬＰＳ（０１～１０μｇ·ｍｌ－１）能增加巨噬细胞培养上清液中ＩＬ６的含量，但对胞溶部分无影响。结果提示：巨噬细胞ＩＬ６的生成及分泌与蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和钙离子通道活化有关；

不同方法诱导THP-1细胞分化效果比较

目的优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况。结果两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致。THP-1-M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP-1-M2细胞高表达CD163和CD209;THP-1-DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c。PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM-CSF/M-CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长。结论两种方法均能成功地诱导THP-1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法。

白细胞介素13对HEL细胞分化和转录因子c-fos表达的影响

目的研究白细胞介素13(IL-13)对红白血病细胞系 HEL 细胞分化作用及对 HEL 细胞转录因子 c-fos 表达的影响。方法用 RT-PCR 方法检测 HEL 细胞 IL-13受体α1、GPⅡb、vWF 和 c-fos基因 mRNA 表达,用 Western blot 和流式细胞术分别检测 IL-13受体α1、c-fos、GPⅡb和 vWF 蛋白水平的表达。结果 HEL 细胞表达 IL-13受体α1,用 IL-13(100 ng/ml)作用于 HEL 细胞,GPⅡb和 vWF 基因 mRNA 表达上调,实验组和对照组 GPⅡb/β-actin 吸光度比值分别为2.912,1.303,实验组为对照组的2.23倍(P<0.05);实验组和对照组 vWF/β-actin 吸光度比值分别为0.506,0.217,实验组为对照组的2.33倍(P<0.05)。流式细胞术分析结果显示,实验组 GPⅡb和 vWF 蛋白表达明显高于对照组。IL-13作用于 HEL 细胞30 min,c-fos 基因 mRNA 表达水平达高峰,IL-13作用 HEL 细胞60 min,c-fos 蛋白表达达高峰,30 min 组、60 min 组 c-fos/β-actin 吸光度比值高于其它各组(P<0.05)。结论IL-13可促进 HEL 细胞分化,并上调 c-fos 表达。

百里醌抑制皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13增殖和诱导凋亡机理研究

目的:探讨百里醌对体外培养人皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13的影响及其机制。方法:选取人皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13进行培养,采用MTT法检测SCC13细胞增殖,流式细胞术检测SCC13细胞凋亡,RT-PCR法检测SCC13细胞Cyclin D1和Survivin mRNA表达,Western blot法检测SCC13细胞β-catenin、Cyclin D1和Survivin蛋白表达。结果:百里醌可降低SCC13细胞增殖率,降低Cyclin D1 mRNA和Survivin mRNA水平以及β-catenin、Cyclin D1和Survivin蛋白表达,增加SCC13细胞凋亡率,且呈剂量依赖性。结论:百里醌能抑制SCC13细胞增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin传导通路实现的。

p53基因对食管癌细胞的作用

目的 观察野生型p5 3基因对不同放射敏感性食管癌细胞的作用 ,探索p5 3基因治疗与放射治疗联合应用的价值。方法 以人食管癌细胞株TE 13及经反复照射后改变了放射敏感性的细胞TE 13R5 0为实验对象 ,将载有人野生型p5 3cDNA并含巨细胞病毒 (CMV)启动子的重组腺病毒(Ad5CMV p5 3)感染上述两种细胞及肿瘤组织并加用放射 ,在体、离体实验比较观察Ad5CMV p5 3对不同放射敏感性食管癌细胞的影响。结果 TE 13细胞及TE 13R5 0细胞的放射敏感性明显不同 (D0 值分别为 1.38、2 .4 8Gy) ;当联合应用Ad5CMV p5 3时明显增加了它们的放射敏感性 ,TE 13R5 0细胞的提高幅度较大 ,接近了亲代细胞的水平 (D0 值分别为 0 .97、1.14Gy)。放射合并瘤内注射Ad5CMV p5 3与单纯放射相比 ,荷瘤裸鼠的肿瘤生长速度明显受到抑制 ,对TE 13R5 0细胞的作用更大。结论 Ad5CMV p5 3可提高食管癌细胞的放射敏感性 ,在一定程度上消除了食管癌细胞的放射抗拒性。

Epstein-Barr病毒BARF1基因协同TPA诱发猴肾上皮细胞恶性转化的研究

目的 探讨Epstein Barr病毒 (EBV)BARF1基因单独或协同佛波醇乙酯 (TPA)诱发猴肾上皮细胞恶性转化的作用。方法 用猴肾永生化上皮细胞PT1和PT7单独或进一步加促癌物TPA注射裸鼠或Scid小鼠背部皮下 ,观察成瘤情况。结果 EB病毒BARF1永生化细胞PT1和PT7在裸鼠不能形成肿瘤 ,但在免疫力严重缺陷的Scid小鼠能形成肿瘤 ,成瘤率为 6 6 7%～ 10 0 % ,成瘤时间较长为45～ 6 0d。加TPA后裸鼠及Scid小鼠均能形成肿瘤 ,裸鼠的成瘤时间为 2 0～ 2 2d ,Scid小鼠的成瘤时间为 5～ 7d。用聚合酶链反应 (PCR)可从肿瘤组织中扩增出BARF1基因。结论 EB病毒BARF1基因是致癌基因 ,甚至无需促癌物等辅助条件 。

用微载体高密度培养CHO工程细胞

rβ-13 CHO 工程细胞在 MC-1型微载体上可良好地附着和增殖,当载体浓度为10mg/ml 时,细胞密度可高达4.5×10~6细胞/ml。由于该细胞具有可自动从载体解离,并再附着和增殖于新载体表面的特性,故采用直接加入新鲜载体和培养基的方法,即可方便地扩大生产。这些结果表明用微载体悬浮培养系统生产 CHO 工程细胞产品将是可行的。