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shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G_2/M期阻滞的影响
被引量:
1
1
作者
祝淑钗
王玉祥
+3 位作者
李任
韩春
邱嵘
沈文斌
《癌症》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期127-131,共5页
背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 ...
背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 shRNA,分别提取质粒DNA并采用脂质体转染TE13细胞并传代;采用Westernblot、RT-PCR和流式细胞仪分别检测CHK1和CHK2蛋白和mRNA表达、以及5Gy60Coγ射线照射后细胞周期变化,克隆形成实验检测5Gyγ射线照射后细胞存活率。结果:采用CHK1和CHK2shRNA转染TE13细胞后,其mRNA和蛋白表达均明显降低。单纯5Gyγ射线照射后24h,TE13细胞G2/M期比例由未照射组的32.17%增至61.47%;shRNA转染的TE13细胞在5Gyγ射线照射后24h,G2/M期比例由单纯照射组的61.47%降至28.13%(CHK1)和42.80%(CHK2),P<0.05。5Gyγ射线、CHK1shRNA加5Gyγ射线、以及CHK2shRNA加5Gyγ射线照射后,细胞存活率分别为27.0%、13.0%和21.0%。shRNA转染的子一代TE13细胞在转染后120h,对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制作用已基本消失;转染120h后以5Gyγ射线照射24h,CHK1或CHK2 shRNA转染组G2/M期比例高于单纯照射组,P<0.05;至转染后144h和5Gyγ射线照射后48h,转染组与单纯照射组比较G2/M期比例无明显差别,P>0.05。结论:采用质粒连接的人CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,可以明显抑制其mRNA和蛋白表达并消除照射后G2/M期阻滞,增加放射敏感性;提示TE13细胞γ射线照射后G2/M期检测点可能受CHK1和CHK2激酶双重调节,但以CHK1为主。
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关键词
食管肿瘤
TE13细胞
Γ射线照射
细胞周期
CHK1
CHK2
RNA干扰
下载PDF
职称材料
题名
shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G_2/M期阻滞的影响
被引量:
1
1
作者
祝淑钗
王玉祥
李任
韩春
邱嵘
沈文斌
机构
河北医科大学第四医院放疗科
出处
《癌症》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期127-131,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30470524)~~
文摘
背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 shRNA,分别提取质粒DNA并采用脂质体转染TE13细胞并传代;采用Westernblot、RT-PCR和流式细胞仪分别检测CHK1和CHK2蛋白和mRNA表达、以及5Gy60Coγ射线照射后细胞周期变化,克隆形成实验检测5Gyγ射线照射后细胞存活率。结果:采用CHK1和CHK2shRNA转染TE13细胞后,其mRNA和蛋白表达均明显降低。单纯5Gyγ射线照射后24h,TE13细胞G2/M期比例由未照射组的32.17%增至61.47%;shRNA转染的TE13细胞在5Gyγ射线照射后24h,G2/M期比例由单纯照射组的61.47%降至28.13%(CHK1)和42.80%(CHK2),P<0.05。5Gyγ射线、CHK1shRNA加5Gyγ射线、以及CHK2shRNA加5Gyγ射线照射后,细胞存活率分别为27.0%、13.0%和21.0%。shRNA转染的子一代TE13细胞在转染后120h,对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制作用已基本消失;转染120h后以5Gyγ射线照射24h,CHK1或CHK2 shRNA转染组G2/M期比例高于单纯照射组,P<0.05;至转染后144h和5Gyγ射线照射后48h,转染组与单纯照射组比较G2/M期比例无明显差别,P>0.05。结论:采用质粒连接的人CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,可以明显抑制其mRNA和蛋白表达并消除照射后G2/M期阻滞,增加放射敏感性;提示TE13细胞γ射线照射后G2/M期检测点可能受CHK1和CHK2激酶双重调节,但以CHK1为主。
关键词
食管肿瘤
TE13细胞
Γ射线照射
细胞周期
CHK1
CHK2
RNA干扰
Keywords
Esophageal neoplasm
tel3 celt
γ-ray irradiation
Cell cycle
CHK1
CHK2
RNA interference
分类号
R735.1 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G_2/M期阻滞的影响
祝淑钗
王玉祥
李任
韩春
邱嵘
沈文斌
《癌症》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
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