苯线磷和甲胺磷对TF-1细胞乙酰胆碱酯酶影响的差异

有机磷农药(organophosphorus pesticides,OPs)具有较强的神经毒性,主要是通过抑制胆碱能神经传导中的关键酶,乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7)的活性来实现的。苯线磷和甲胺磷是广泛用于农业生产的OPs,但对它们抑制人AChE活性的机制研究十分有限。本研究应用2种不同的给药方式,包括对培养的细胞和细胞裂解液进行药物处理,明确苯线磷和甲胺磷对人血液白血病细胞系TF-1中AChE酶活性的直接作用和对AChE基因转录表达的影响,从而揭示苯线磷和甲胺磷抑制AChE酶活性的机制与两者的差别。结果表明,高浓度苯线磷(10^(-3) mol·L^(-1))处理后,TF-1细胞活力降低,同时诱导细胞凋亡和坏死;而所有被试浓度的甲胺磷对细胞活力均没有明显影响。此外,对于TF-1细胞裂解液中的AChE,苯线磷和甲胺磷短期处理(1 h和5 h)均可产生直接抑制作用,其中苯线磷的抑制作用略强于甲胺磷(孵育1 h,IC_(50)值分别为1.181×10^(-6) mol·L^(-1)和2.837×10^(-6) mol·L^(-1))。对培养细胞的药物处理实验结果显示,苯线磷和甲胺磷(10^(-6) mol·L^(-1)和10-5 mol·L^(-1))处理24 h后,均显著降低了TF-1细胞的AChE酶活性,苯线磷的抑制率略高于甲胺磷。而与对酶活性的抑制作用相反,苯线磷和甲胺磷对TF-1中AChE H转录本表达有轻微的上调作用,以甲胺磷更为明显,提示存在反馈调节机制。总结上述结果,我们发现苯线磷对TF-1细胞中AChE的抑制作用总体略强于甲胺磷,而甲胺磷对AChE基因表达的反馈上调作用更明显。从而首次从对AChE酶的直接抑制作用和生物合成影响的不同角度阐述了2个OPs对AChE影响的差异,为进一步的分子机制研究提供了实验数据。

依赖IL-5增殖的细胞株TF-1-9E3的驯化及验证

在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细胞株为来源,用IL-5替换TF-1细胞生长必需的生长因子GM-CSF,降低血清含量进行细胞驯化培养传代。通过35 d的细胞驯化及3~5次降血清传代培养,采用有限稀释法分离单克隆,一共得到14个单克隆细胞株。对14株细胞进行FACS检测,其中,有9个细胞株IL-5Rα表达量升高。对IL-5Rα过表达的细胞株进行IL-5增殖检测,结果表明,相比8%FBS得到的单克隆,6%FBS得到的单克隆对IL-5刺激更敏感。通过单因素优化实验,细胞增殖检测最优的细胞接种量为2×10^(4)个/孔,FBS含量为3%,血清品牌为Gibco。驯化后的细胞TF-1-9E3对IL-5的剂量-效应曲线的信噪比为3.19,Emax区间为2.15,可用于IL-5的生物学活性检测及IL-5与IL-5Rα的抗体阻断活性检测。

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的 :探讨凋亡相关分子TFAR19在TF 1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法 :以TFAR19的单克隆抗体为工具 ,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段 ,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位 ,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine,PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果 :TFAR19蛋白在撤除GM CSF的TF 1细胞中表达水平显著增高 ,伴有明显的核转位现象 ,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论 :TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一 ,这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应 。

TF-1细胞凋亡相关基因的研究

利用近年来发展起来的代表差异分析（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ）技术研究了在人红白血病细胞株ＴＦ１细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因．发现了６个新基因片段．其中有三个经与ＧｅｎＢａｎｋｎｒ和ｄｂＥＳＴ查询均没有发现同源性，已经向ＧｅｎＢａｎｋ进行登记，登记号分别为Ｕ８３２０８，Ｕ８３２７９，Ｕ８３３９７．此外还发现一批已知基因的表达与凋亡相关，其中包括Ｈｏｕ和人硫氧还原蛋白等，提示它们在凋亡中可能起作用．这项工作为进一步研究凋亡相关基因打下了良好基础．通过ＲＤＡ的研究结果，有可能发现人白血病细胞凋亡的特异标记蛋白或发挥作用的重要蛋白，以期为白血病治疗提供理论基础．

TF-1细胞凋亡相关基因19在系统性红斑狼疮发病中的作用

目的 :探讨TF - 1细胞凋亡相关基因 1 9(TFAR1 9)在系统性红斑狼疮 (SLE)发病诱因中的作用及其与SLE病情的关系。方法 :应用倒置相差显微镜、Ladder方法、Westernblotting方法、荧光免疫显微镜、ELISA方法检测中波紫外线 (UVB)诱导HaCaT细胞凋亡时TFAR1 9的表达及其与SLE患者病情的关系。结果 :在剂量为 30mJ/cm2的UVB照射 2 4h后 ,HaCaT细胞开始凋亡 ,TFAR1 9在此过程中有表达 ,发现活动期SLE患者血清中TFAR1 9的抗体值高于稳定期和正常对照组的值 (P≤ 0 .0 5)。结论 :在UVB诱导角质形成细胞HaCaT凋亡的过程中 ,有TFAR1 9的参与并发挥了作用 ,提示TFAR1

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的:研究在中波紫外线(UVB)诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡过程中,T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19)的表达时相及位置。方法:使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin-V)、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果:在凋亡过程中,TFAR 19逐渐向核周聚积,最后向核膜内移位,在核膜及其周围以及核内表达。 结论:在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。

TF-1细胞增殖法测定神经生长因子生物学活性的建立与应用

目的:建立并优化用于检测神经生长因子(NGF)生物学活性的TF-1细胞增殖法,并应用于重组人NGF和鼠NGF制品的活性检测。方法:将梯度稀释的人NGF国际参考品与TF-1细胞相作用,通过MTT法测定细胞增殖情况,建立测定NGF活性的TF-1细胞增殖法;从粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)残留、NGF加样稀释率、TF-1细胞接种浓度、培养时间等多个环节对实验条件进行优化;将建立的TF-1细胞增殖法应用于重组人NGF和鼠NGF的活性检测。结果:建立了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法;实验条件优化结果表明,在无GM-CSF残留的情况下,将稀释至1/4的NGF样品与4×105/mL的细胞相互作用,培养48 h,可以得到更为典型的的四参数曲线;利用条件优化后建立的检测方法对重组人NGF和鼠NGF各2批样品分别进行4次测定,结果平均值分别为10.01×105、10.81×105和3.55×105、3.30×105U/mg,变异系数分别为7.5%、7.2%和7.2%、9.1%,检测结果稳定均一,表明检测方法具有很好的重复性。结论:建立并优化了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法,该方法操作简便、定量准确、重复性好、稳定可靠,可有效应用于人NGF和鼠NGF制品的活性检测。

人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力

目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350 V电压电击30 ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论:用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。

TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究

目的 探索JAK/STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM CSF受体的TF 1细胞 ,观察细胞增殖与凋亡 ;建立免疫沉淀和Westernblot印迹方法 ,检测经GM CSF 10 0ng/ml瞬时诱导的TF 1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况。结果 经过GM CSF刺激 ,细胞不但免于凋亡 ,TF 1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应。当耗竭细胞因子 6～ 12h后 ,倒置显微镜下TF 1细胞呈现折光性改变 ,细胞开始凋亡 ,呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带 ,而加入 0 .1ng/ml的GM CSF ,TF 1细胞即开始进入增殖状态 ,提示GM CSF对细胞具有凋亡保护作用。经过 10 0ng/mlGM CSF的瞬时诱导 ,在分子量 130kd区域见到JAK2蛋白条带 ,显示GM CSF可诱导TF 1细胞磷酸化JAK2表达 ;而在分子量 90kd区域未见到STAT3蛋白条带 ,显示无磷酸化STAT3表达 ;而未经GM CSF诱导的TF 1细胞 ,既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达。结论 GM CSF为TF 1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需 ;GM CSF诱导的TF

蛋白酶体抑制剂可增加足叶乙甙对白血病细胞系M-07e和TF-1的凋亡诱导效应

近年来的研究显示泛素 蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙 (VP16)对白血病细胞系M 0 7e及TF 1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z LLL CHO及VP16联合作用于M 0 7e及TF 1细胞 ,可增强两种药物单独的细胞杀伤效应。流式细胞术检测提示单独应用Z LLL CHO及VP16均可使S +G2 /M期细胞比例增加 ,两者联合应用导致细胞凋亡峰比例的显著增高。通过对M 0 7e细胞裂解物做免疫印迹检测 ,发现在Z LLL CHO及VP16单独作用中均导致Bcl 2蛋白被酶解为 2 2kD的片段 ,而联合作用时Bcl 2的酶解现象具有叠加效应。结论 :Z LLL CHO与VP16联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性 ,细胞周期S +G2 /M期比例的增加及Bcl 2酶解片段的增加是导致蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO及VP16对白血病细胞系联合效应的可能机制。

硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SALL4基因表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1细胞生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。(2)显微镜下观察细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。(3)电镜下观察可见凋亡小体。(4)Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。(5)流式细胞仪分析细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(P<0.05)。(6)RT-PCR结果示Sall4基因在TF-1细胞上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加,Sall4 mRNA与β-actin mRNA表达量的积分光密度比值(Integral optical density ratio,V/B)水平下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能抑制TF-1细胞增殖,诱导其凋亡,呈时间-剂量依赖关系。Sall4基因在TF-1细胞株上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加表达水平下降,呈时间-剂量依赖关系。

凋亡相关新基因 TFAR19 的 cDNA 克隆、表达和功能研究

利用ＲＤＡ技术从人白血病细胞ＴＦ－１中克隆成功一个与凋亡相关的新基因ＴＦＡＲ１９。序列分析表明，ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ全长５５９ｂｐ，其中２５—３９９ｂｐ编码１２５个氨基酸的蛋白质。ｍＲＮＡ斑点杂交分析表明ＴＦＡＲ１９在５０种组织中均有不同程度的表达。在大肠杆菌中表达并纯化了重组ＴＦＡＲ１９蛋白质，制备了多克隆抗体，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ发现ＴＦＡＲ１９蛋白在凋亡的ＴＦ－１细胞中高表达。瞬时转染ＴＦＡＲ１９正义基因后，ＴＦ－１细胞去细胞因子后凋亡速度增加。研究表明它能抑制胃癌细胞株８０３细胞和Ｈｅｌａ细胞的生长，促进它们的去血清所致的凋亡。

人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定

构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到原核表达载体pGEX 4T 2 .经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后 ,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化 .利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定 .用白血病细胞株HL 6 0检测蛋白活性 .成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体 pGEX 4T 2表达载体 ,对融合蛋白的表达条件进行了优化 .SDS PAGE结果显示 ,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达 .免疫学检测证实获得了正确的表达产物 .活性检测证实 ,野生型TFAR19和缺失突变体 4可以明显促进去血清诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,第

重组TFAR19蛋白对鼻咽癌CNE-1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响

目的研究重组TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的影响,探讨重组TFAR19蛋白促CNE-1细胞凋亡的作用机制。方法将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后,通过7-AAD及AnnexinV-PE标记进行流式细胞术分析,检测TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应;RT-PCR法比较试验组和对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA的表达水平;TRAP-银染法检测重组TFAR19蛋白作用下CNE-1细胞株端粒酶活性的改变。结果(1)一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下,可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30mg/L的TFAR19蛋白后,CNE-1细胞的凋亡率分别是15.26%,29.48%,37·11%,54·20%,72.36%。阳性对照组(凋亡诱导剂stuanrosporin处理)与阴性对照组(PBS处理)的细胞凋亡率分别是98·37%、13·40%。(2)试验组与对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA表达无显著差异。(3)与20mg/L以上浓度的重组TFAR19蛋白共同培养后,CNE-1细胞株端粒酶活性明显降低。结论重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性,明显促进肿瘤细胞凋亡。

人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞一氧化氮释放和TGF-β1表达的影响及意义

目的:研究人参皂苷Rb1对白消安(BU)致血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生和转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对内皮细胞的保护作用机制并确定其作用的最佳浓度。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的人参皂苷Rb1和BU干预,以硝酸还原酶法检测HUVEC培养上清液中一氧化氮水平,ELISA方法检测TGF-β1、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和TF的蛋白含量,实时荧光定量PCR检测HUVECTGF-β1、PAI-1和TFmRNA的表达。结果:BU(60mg.L-1)能使HUVEC一氧化氮产生减少,TGF-β1、PAI-1和TF蛋白水平明显增高及mRNA表达显著增强,一定质量浓度的人参皂苷Rb1(80mg.L-1)则可明显抑制BU对HUVEC的这种作用;各组一氧化氮水平与TGF-β1表达成负相关,TGF-β1表达与PAI-1和TF表达成正相关。结论:人参皂苷Rb1可能通过增加一氧化氮产生,抑制TGF-β1相关信号转导途径,降低PAI-1及TF的表达,具有纠正内皮细胞高凝、低纤溶活性异常状态的作用。

肾透明细胞癌PDCD5表达及与预后的关系

目的探讨PDCD5在肾透明细胞癌发生、发展中的作用及与预后关系。方法采用免疫组织化学方法,对46例肾透明细胞癌组织中PDCD5表达进行研究,对患者存活率进行回顾性随访。结果癌旁肾组织中PDCD5阳性表达率显著高于肾癌组织。PDCD5阳性表达率随肾透明细胞癌病理分级和临床分期的上升而下降,染色强度也减弱。PDCD5阳性表达组3年及5年存活率高于阴性表达组。结论PDCD5为肾透明细胞癌的负性调节因子,对抑制肾透明细胞癌的恶性转化和进展可能有重要的意义。

果蝇程序化死亡基因5(PDCD5)同源cDNA的克隆和序列分析

为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA编码区基因克隆和序列分析 .发现果蝇与小鼠及果蝇与人 PDCD5在核苷酸水平上分别有 57.5%和 57.1 %的同源性 ,在氨基酸水平上分别有 46.8%和 46.4%的同源性 .功能区分析发现 ,果蝇 PDCD5c DNA编码 1 33个氨基酸 ,计算机预测可能是一种核蛋白 ,含 5个可能的酪蛋白激酶 (casein kinase )磷酸化位点 ,2个可能的 PKC磷酸化位点 ,与人 PDCD5的功能区类似 .因而果蝇 PDCD5是与人 PDCD5同源的新基因 ,可能都与细胞程序化死亡相关 .

苦参碱诱导白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响

目的:探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导急性髓性白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响。方法:将不同质量浓度(0.5,1.0,1.52,.0 g.L-1)的Mat分别作用于体外培养的TF-1细胞不同时间(24,48,72 h),MTT检测Mat对细胞增殖的影响;流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定细胞周期;Annexin V和PI双染色法检测细胞凋亡;逆转录RT-PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测SALL4 mRNA表达。结果:Mat(0.5～2.0 g.L-1)作用TF-1细胞24,48,72 h后均有增殖抑制作用(P<0.01),在该浓度范围内抑制率呈剂量和时间依赖4,8 h半数抑制浓度(IC50)为1.0 g.L-1;Mat作用TF-1细胞48 h后,与对照组相比G0/G1期细胞比例增加,S期细胞下降(P<0.01);流式细胞术检测细胞凋亡率分别为8.6%1,1.21%,15.26%,17.63%,与对照组(5.05%)相比较,差异具有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示SALL4mRNA表达量与β-actin(内参照)表达量的比值,随Mat剂量增加而显著减小(P<0.01)。结论:Mat在一定浓度和时间范围内对TF-1细胞具有增殖抑制作用,其机制是使细胞发生G0/G1期阻滞;抑制SALL4基因的表达,诱导细胞凋亡。

TF-1细胞凋亡相关基因19与甲状腺肿瘤之间关系的初步探讨

目的 探讨TF 1细胞凋亡相关基因 19(TFAR19)在甲状腺腺瘤 (TA)和甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否有表达及其细胞定位。方法 6例TA和 6例PTC患者 ,经手术得到甲状腺肿瘤组织标本并获病理诊断 ,以 6例TA患者的瘤周正常甲状腺组织作为对照。TFAR19表达的检测采用免疫组化染色。结果 TFAR19在正常甲状腺组织中几乎未见表达 ;在TA组的甲状腺肿瘤组织中呈强阳性表达 ,而在PTC组中呈阴性表达。结论 TFAR19凋亡通路在TA中被激活 ,而在PTC中则受到抑制 ,提示细胞凋亡与增殖之间的平衡失调可能在PTC的发病机制中具有重要作用。

人参皂苷Rg1对人白血病TF-1细胞EPOR信号通路的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1诱导急性髓系白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及其对红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)通路的影响,以及可能的机制。方法:不同浓度人参皂苷Rg1处理TF-1细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞的增殖活性,FCM法检测并在透射电子显微镜下观察人参皂苷Rg1诱导TF-1细胞的凋亡,FCM法和免疫荧光法检测TF-1细胞中EPOR蛋白的表达水平和分布情况,实时荧光定量-PCR法检测TF-1细胞EPOR mRNA的表达,蛋白质印迹法检测人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞的红细胞生成素(erythropoietin,EPO)反应性以及TF-1细胞中EPOR、磷酸化EPOR、酪氨酸激酶JAK2(Janus tyrosine kinase 2)、磷酸化JAK2、信号转导和转录激活因子5(signal transducers and activators of transcription 5,STAT5)、磷酸化STAT5、Bax、Bcl-2和caspase-3(激活型)蛋白的表达。结果:人参皂苷Rg1(12.5、25、50、100和200μmol/L)作用24、48和72 h后,TF-1细胞的增殖受到抑制(P<0.05)。人参皂苷Rg1(12.5、25和50μmol/L)作用48 h后,TF-1细胞的早期凋亡率高于人参皂苷Rg1未处理的对照组(P<0.05),透射电子显微镜下可见TF-1细胞出现凋亡变化。FCM法和免疫荧光检测结果均显示,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞膜表面EPOR的表达明显减少,并且TF-1细胞EPOR mRNA的表达水平下调(P<0.05)。与对照组比较,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞EPOR总蛋白的表达水平无明显变化,但降低了TF-1细胞对EPO的反应性,磷酸化EPOR的表达水平明显下调,Bax和caspase-3(激活型)蛋白的表达水平明显上调,Bcl-2以及EPOR下游JAK2、磷酸化JAK2、STAT5和磷酸化STAT5的表达水平均明显下调(P均<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制TF-1细胞的增殖并促进其凋亡,其促凋亡机制可能与降低TF-1细胞对EPO的反应性,下调EPOR下游相关蛋白的表达并激活caspase-3的表达有关。