人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应

目的：对一种新发现的凋亡相关基因ＴＦＡＲ１９进行蛋白质水平的促凋亡效应研究，并对其作用机理进行初步的探讨。方法；利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组ＴＦＡＲ１９蛋白进行纯化，将其加入到培养的白血病细胞株ＨＬ－６０，通过ＤＮＡ片段化、ＰＩ及ＡｎｎｅｋｉｎＶ标记进行流式细胞仪分析，观察ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。利用ＦＩＴＣ标记ＴＦＡＲ１９蛋白，分析其与细胞的结合及定位。利用Ｃａｓｐａｓｅ－３抑制剂ＤＥＶＤ－ｆｍｋ研究ＴＦＡＲ１９的凋亡信号转导途径。结果：高纯度的重组ＴＦＡＲ１９蛋白剂量依赖性地促进撤除血清的ＨＬ－６０细胞的凋亡，最高可使８２％细胞凋亡，对照为３０％。荧光标记的ＴＦＡＮ１９蛋白能与ＨＬ－６０细胞结合，主要定位于细胞核。ＤＥＶＫ－ｆｍｋ可部分抑制ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。结论：ＴＦＡＲ１９蛋白能够直接进入ＨＬ－６０细胞，发挥其促进细胞凋亡的效应。这一效应部分地与Ｃａｓｐａｓｅ－３的凋亡执行效应有关。

抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定

目的研制鼠抗人凋亡相关蛋白 TFAR19的单克隆抗体，以进一步探讨 TFAR19蛋白的结构与功能。方法以纯化的重组人 TFAR19蛋白为抗原 ,免疫 BALB/c小鼠，将 TFAR19蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0进行细胞融合，经克隆筛选获得鼠抗人 TFAR19蛋白单抗的杂交瘤细胞株，以间接 ELISA、 Western免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果获得了 3株稳定分泌抗人 TFAR19单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (C1,C10,2C12),其分泌的单抗效价高，特异性好，亲和力不一，免疫球蛋白亚类均为 IgG1。 Western免疫印迹分析证明 TFAR19蛋白在凋亡细胞中高表达。结论所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的 TFAR19蛋白，为进一步探讨 TFAR19蛋白的生物学效应提供了条件。

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的 :探讨凋亡相关分子TFAR19在TF 1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法 :以TFAR19的单克隆抗体为工具 ,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段 ,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位 ,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine,PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果 :TFAR19蛋白在撤除GM CSF的TF 1细胞中表达水平显著增高 ,伴有明显的核转位现象 ,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论 :TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一 ,这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应 。

几种不同方式诱导Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19的表达

为探讨一个新的细胞凋亡相关基因———TFAR19所参与的凋亡途径 ,我们研究了几种不同方式诱导白血病细胞株Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19表达的变化。采用去除血清 ,VP 16作用及Fas单抗活化受体等方法诱导Jurkat细胞凋亡后 ,以RT PCR方法检测mRNA水平TFAR19的表达 ,用流式细胞术及Western印迹检测蛋白水平TFAR19的表达。实验结果显示 ,Jurkat细胞在去除血清 12小时 ,VP 16作用 2小时 ,以及Fas单抗诱导细胞凋亡 2小时后 ,在mRNA及蛋白水平TFAR19的表达都呈增高趋势。结论提示 ,TFAR19参与了去除血清、DNA损伤及死亡受体激活所诱导的细胞凋亡过程 ,它在细胞凋亡过程的早期开始发挥作用 ,TFAR19是细胞凋亡途径中的“终末共同通路”的参与者。

TFAR19(PDCD5)蛋白在正常肾、肾透明细胞癌组织及正常膀胱、膀胱癌组织中的表达

目的了解凋亡基因PDCD5在正常肾、肾透明细胞癌组织及正常膀胱、膀胱癌组织中的表达,分析PDCD5在肾透明细胞癌、膀胱癌的发病中所起的作用。方法采用免疫组织化学的方法,对63例肾组织切片和42例膀胱组织切片进行PDCD5的免疫组化染色。采用人工阅片评分及计算机辅助染色强度判定2种方法判断肾组织PDCD5的染色阳性率及染色强度,用单因素方差分析法及列联表的卡方检验和关联度测量判断PDCD5的表达与正常肾、肾透明细胞癌组织的相关性;采用人工阅片判断膀胱组织PDCD5的染色阳性率。结果免疫组织化学的结果显示,在正常肾组织肾小管区中,PDCD5表达多呈强阳性,肾透明细胞癌组织表达随着分期的增加呈递减趋势。正常肾组织及各期肾透明细胞癌组织中PDCD5表达的差异有统计学意义。正常膀胱、膀胱癌组织中PDCD5无显著表达。结论PDCD5可能在不同程度上参与了肾透明细胞癌进程中的调控;PDCD5在正常膀胱、膀胱癌组织中表达程度极低。

人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定

构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到原核表达载体pGEX 4T 2 .经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后 ,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化 .利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定 .用白血病细胞株HL 6 0检测蛋白活性 .成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体 pGEX 4T 2表达载体 ,对融合蛋白的表达条件进行了优化 .SDS PAGE结果显示 ,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达 .免疫学检测证实获得了正确的表达产物 .活性检测证实 ,野生型TFAR19和缺失突变体 4可以明显促进去血清诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,第

凋亡促进因子TFAR19,Apaf-1与腰椎间盘突出症的关系研究

目的探究凋亡促进因子TFAR19,Apaf-1与腰椎间盘突出症关系。方法随机选择广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科住院接受手术的腰椎间盘突出症患者99例,其中设单个节段突出的患者70例为A组,多个节段突出(腰椎间盘突出节段数量≥2个)的患者29例为B组,于入院次日收集外周静脉血。同时随机选取健康体检者40例作为对照组(C组)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测腰椎间盘突出症患者血清中TFAR19,Apaf-1浓度。结果 C组、B组及A组血清中TFAR19浓度分别为1.30±0.09,1.85±0.14和2.33±0.25 ng/ml,各组之间TFAR19浓度差异具有统计学意义(F=7.979,P<0.01)。与C组相比,A组(q=3.60,P=0.012)、B组(q=5.59,P<0.01)TFAR19浓度差异具有统计学意义。A组、B组之间TFAR19浓度差异有统计学意义(q=2.93,P=0.012)。C组、B组及A组血清中Apaf-1浓度分别为107.52±11.58,159.22±11.87,203.20±20.21 Pg/ml,各组之间Apaf-1浓度差异具有统计学意义(F=8.828,P<0.01)。与C组相比,A组(q=3.89,P=0.007)、B组(q=5.86,P<0.01)Apaf-1浓度差异具有统计学意义。A组、B组之间Apaf-1浓度差异有统计学意义(q=2.97,P=0.037)。各组间性别构成比差异无统计学意义(x^2=0.229,P=0.892)。各组之间年龄差异无统计学意义(F=0.091,P=0.91)。结论腰椎间盘突出症患者血清TFAR19,Apaf-1表达上调加速了腰椎间盘退变过程,参与了腰椎间盘突出症的发生,并且与椎间盘突出节段数量相关,突出节段数量越多,TFAR19,Apaf-1表达量越高。

小鼠凋亡相关新基因TFAR19 cDNA的克隆化和序列分析

目的：了解一个细胞凋亡相关新基因ＴＦＡＲ１９在不同种属间的序列同源性。方法：利用表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇ，ＥＳＴ）拼接技术、ＲＴＰＣＲ、ＤＮＡ序列测定技术及计算机分析技术。结果：首次成功进行了小鼠ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ编码区的ｃＤＮＡ克隆化和序列分析，发现小鼠和人ＴＦＡＲ１９在核苷酸水平上有８１．４％的同源性，在氨基酸水平上有高达９６％的同源性。功能区分析发现，小鼠ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ序列含编码１２６个氨基酸的开放性读码框架，含１个可能的ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ依赖的蛋白激酶磷酸化位点，４个可能的ＰＫＣ磷酸化位点。其Ｃ端的“ＥＤＤＡＤＹ”序列与人ＤＮＡ拓扑异构酶Ｉ１４１１４７位残基序列完全相同。结论：小鼠ＴＦＡＲ１９是与人ＴＦＡＲ１９高度同源的新基因，与ＤＮＡ拓扑异构酶Ｉ可能有功能相关性。

重组人TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人7721肝癌细胞凋亡的增敏作用

目的 :探讨新的人凋亡相关基因产物TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人 772 1肝癌细胞凋亡的增敏作用。方法 :将不同浓度的rhTFAR19蛋白单独或与羟基喜树碱 (hydroxycamptothecin ,HCPT)同时加入处于指数生长期的 772 1肝癌细胞中共同培养 ,通过透射电镜、DNA片段化分析、PI及AnnexinV标记进行流式细胞仪分析 ,观察细胞的形态学和细胞凋亡的变化。结果 :不同质量浓度的rhTFAR19蛋白单独作用于 772 1肝癌细胞未见明显凋亡 ,但同时加 5mg·L-1的羟基喜树碱后 ,各质量浓度组均观察到细胞凋亡 ,并且显示了明确的量效关系 :5mg·L-1的HCPT加 5mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为 2 9.5 8% ,而加 2 0mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为6 3 .77%。结论 :rhTFAR19蛋白对HCPT诱导的细胞凋亡有明显的剂量依赖性促进作用 ,临床用HCPT行局部化疗时 ,若加rhTFAR19蛋白 ,可能会在不增加化疗药物毒性的情况下 。

TFAR19蛋白在卵巢上皮性癌中的表达

目的探讨TFAR19蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达情况及关系。方法应用免疫组化方法检测TFAR19蛋白在79例卵巢上皮性癌组织(其中浆液性腺癌33例,粘液性腺癌13例,子宫内膜样腺癌11例,其他类型卵巢上皮性癌22例),33例卵巢良性肿瘤组织(其中浆液性腺瘤18例,粘液性腺瘤13例,其他良性肿瘤2例)及11例正常卵巢组织中的表达。结果39.24％的卵巢上皮性癌、81.82％的正常卵巢上皮、75.76％的卵巢良性肿瘤组织中TFAR19蛋白呈强阳性表达,卵巢上皮性癌与卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢上皮相比差异有显著性(P<0.05)。不同FIGO分期(1986年)卵巢上皮性癌中强阳性表达比例分别为FIGO I期:80％,FICOⅡ期45.45％,FIGOⅢ期31.25％,FIGOⅣ期30％;不同组织学分级卵巢上皮性癌中TFAR19的强阳性表达分别为G1期62.5％,G2期50％,G3期29.79％;卵巢粘液性癌组织中TFAR19蛋白的强阳性表达明显高于浆液性腺癌与子宫内膜样癌。结论TFAR19蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期、组织学分级、病理类型相关。随FIGO分期与组织学分级升高,TFAR19蛋自的表达下调。TFAR19蛋白可能是卵巢上皮性癌细胞细胞凋亡的重要调控因子。

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

重组TFAR19蛋白对鼻咽癌CNE-1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响

目的研究重组TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的影响,探讨重组TFAR19蛋白促CNE-1细胞凋亡的作用机制。方法将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后,通过7-AAD及AnnexinV-PE标记进行流式细胞术分析,检测TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应;RT-PCR法比较试验组和对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA的表达水平;TRAP-银染法检测重组TFAR19蛋白作用下CNE-1细胞株端粒酶活性的改变。结果(1)一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下,可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30mg/L的TFAR19蛋白后,CNE-1细胞的凋亡率分别是15.26%,29.48%,37·11%,54·20%,72.36%。阳性对照组(凋亡诱导剂stuanrosporin处理)与阴性对照组(PBS处理)的细胞凋亡率分别是98·37%、13·40%。(2)试验组与对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA表达无显著差异。(3)与20mg/L以上浓度的重组TFAR19蛋白共同培养后,CNE-1细胞株端粒酶活性明显降低。结论重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性,明显促进肿瘤细胞凋亡。

TFAR19在口腔白斑和口腔鳞癌中表达的研究

目的研究凋亡相关基因tfar19在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测17例正常口腔黏膜、60例口腔白斑,30例口腔鳞癌组织标本中TFAR19蛋白的表达。结果①口腔正常黏膜组TFAR19染色阳性率为88.2%,白斑组TFAR19染色阳性率为63.3%,口腔鳞癌组TFAR19染色阳性率为30%,3组间染色阳性率分别有统计学差异(分别为P≤0.05)。应用Crosstabs相关性统计分析,TFAR19染色阳性率与组织病变恶性度显负相关(r=-0.997,P<0.05)。②口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织的TFAR19细胞染色强度指数分别为199.34±25.33、130.23±19.21,和59.44±13.83,各组间分别有显著性差异。结论tfar19基因在口腔黏膜上皮成癌过程中的确发挥着重要的作用,并且可以推测tfar19基因的表达缺失发生在肿瘤形成的早期。

凋亡相关蛋白TFAR19在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达与定位

目的 探讨凋亡相关蛋白TFARl9在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达。 方法 以TFAR19蛋白的单克隆抗体为工具,利用过氧化酶标定的链霉卵白素染色试剂盒对老年性白内障晶状体上皮细胞行免疫组化染色,观察TFAR19蛋白在晶状体上皮细胞中的表达及定位。结果 发现正常人品状体上皮细胞中有TFAR19蛋白低水平的表达,老年性白内障晶状体上皮细胞中有3种高表达的细胞:一种为少部分细胞呈胞浆高表达,胞核不表达;另一种为偶见胞核、胞浆均高表达;第3种为凋亡晚期的细胞仅在凋亡小体上有表达。 结论 老年性白内障晶状体上皮细胞中有凋亡相关蛋白TFAR19的特征性表达,该结果对进一步揭示细胞凋亡是否参与自内障的发病有着重要意义。

白内障患者NOS、DPP及TFAR19蛋白的表达及临床意义

目的分析白内障患者一氧化氮合酶(NOS)、二肽基肽酶(DPP)及凋亡相关蛋白19(TFAR19)的表达及临床意义。方法选取2017年5月至2018年5月本院收治的64例白内障患者作为观察组,以患者病变周围巩膜正常组织为对照组。对比观察组与对照组NOS水平及DPP、TFAR19表达情况,分析NOS、DPP、TFAR19的表达与白内障患者临床特征的关系,采用Logistic回归模型分析影响患者术后视力预后的独立危险因素。结果观察组NOS水平高于对照组,DPP及TFAR19阳性表达率显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NOS、DPP及TFAR19的表达与白内障患者年龄呈显著正相关(P<0.05),与患者性别、不同类型、合并糖尿病、合并高血压之间无显著相关性(P>0.05)。性别、不同类型、合并高血压为非影响白内障患者术后视力预后的单因素(P>0.05);年龄、合并糖尿病、NOS、DPP、TFAR19为影响患者术后矫正视力预后的单因素(P<0.05)。选取有条件的单因素经非条件多因素Logistic回归模型进一步分析,得出:年龄(≧65岁)、NOS表达(高水平)、DPP表达(阳性)、TFAR19表达(阳性)影响白内障患者术后视力预后的独立危险因素(P<0.05)。结论NOS、DPP、TFAR19在白内障患者中呈高表达,NOS、DPP、TFAR19的表达与患者年龄之间有密切联系,上述指标表达过高会影响患者手术矫正视力预后。

凋亡促进分子TFAR19与子宫肌瘤关系的研究

目的：检测子宫肌瘤患者血清TFAR19活性。方法随机选择北京市怀柔区妇幼保健院妇产科住院接受手术的子宫肌瘤患者45例，其中6 cm≤单个最大肌瘤直径≤10！的患者29例（A组）、单个最大肌瘤直径＞10 cm的患者16例（B组），同时随机选取育龄期健康体检者25例作为对照组（C组），A，B组于入院当晚采集外周静脉血，C组于体检当天采集外周静脉血，采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测子宫肌瘤患者血清中 TFAR19活性。结果 A组、B组、C组 TFAR19活性分别为25.32±1.93，14.41±2.28，34.79±4.65活性单位；各组间 TFAR19活性差异有统计学意义（F＝7.93，P＝0.01）；与 C 组相比，B 组（q＝5.606，P＜0.001）、A 组（q＝3.055，P＝0.034）间TFAR19活性差异具有统计学意义；A组，B组之间TFAR19活性差异有统计学意义（q＝3.086，P＝0.033）。各组之间年龄差异无统计学意义（F＝2.086，P＝0.132）。结论子宫肌瘤患者血清 TFAR19表达下调抑制了细胞凋亡过程，参与了子宫肌瘤的发生，并且与肌瘤的大小相关，肌瘤直径越大，TFAR19表达越低。

细胞凋亡相关新基因TFAR19(PDCD5)研究进展

细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下 ,由基因控制的细胞自我毁灭过程。凋亡异常与许多疾病 (尤其是肿瘤 )的形成及发展进程密切相关。细胞凋亡调控机制研究证明 ,多种基因 (如 P5 3、C- myc、Bcl- 2、Bax等 )参与了细胞凋亡的调控过程。TFAR1 9基因是由我国科研人员最近新发现的另一重要的凋亡相关基因 ,笔者主要就其结构特点、性质功能。

凋亡相关基因TFAR19与肿瘤

细胞凋亡是由基因调控的个别细胞发生的自主有序的死亡，其在机体的发育和维持内环境的稳定中起着至关重要的作用，很多证据表明肿瘤的发生与凋亡有关。TFAR19基因是由北京大学人类疾病基因中心克隆到的凋亡相关新基因之一，经国际人类基因命名委员会命名为PDCD5。它在多种肿瘤中表达下调，具有临床检测价值，并有可能作为肿瘤的凋亡促进剂应用于临床。现将TFAR19基因与肿瘤关系的研究进展综述如下。

乙肝后肝硬化中医证型与凋亡相关蛋白TFAR19表达关系的临床分析

目的:探讨乙肝后肝硬化中医证型与凋亡相关蛋白TFAR19表达的关系。方法:选取乙肝后肝硬化患者60例为病例组,根据肝硬化中医临床辨证分为6型;健康体检者20例为对照组。用ELISA法测定所有血清标本的TFAR19表达水平。结果:病例组血清TFAR19表达为(0.217±0.064),对照组为(0.328±0.058),2组比较。差异有非常显著性意义(P<0.01),乙肝后肝硬化患者血清TFAR19明显降低。血清TFAR19表达气滞血瘀证型、肝郁脾虚证型和瘀血内结证型之间比较,差异无显著性意义(P>0.05),而气滞血瘀证型、肝郁脾虚证型与气虚血瘀证型、脾肾阳虚证型和肝肾阴虚证型之间比较,差异有显著性意义(P<0.05),瘀血内结证型与气虚血瘀证型、脾肾阳虚证型和肝肾阴虚证型之间比较,差异无显著性意义(P>0.05)。血清TFAR19表达在偏实证型、虚实夹杂证型及偏虚证型之间比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:乙肝后肝硬化患者血清TFAR19表达显著低于对照组,且中医辨证分型在乙肝后肝硬化病情严重程度的判断上与TFAR19蛋白表达相一致。