益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及TGF-β1表达的影响

目的探究益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、益气活血通络汤(C)组、低分子肝素(D)组、益气活血通络汤联合低分子肝素(E)组,每组10只,对B、C、D、E组采用骨钳截断加克氏针髓内固定法建立胫骨骨折模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组4 g/kg益气活血通络汤灌胃,D组500 U/kg低分子肝素灌胃,E组给予益气活血通络汤联合低分子肝素治疗,A组、B组同期灌胃同体积生理盐水,X线摄片检测骨折愈合程度,苏木素-伊红(HE)染色法检测骨组织病理形态,全自动血流变仪检测血液流变学相关指标,免疫组化法检测骨组织中TGF-β1蛋白表达。结果与A组相比,B组骨折线清晰,且没有形成明显骨痂;与B组相比,C、D、E组骨愈合速度明显加快,C、D组骨折线仍可见但折断端边缘趋于模糊,且形成明显骨痂,而E组骨折基本消失,髓腔再通,外骨痂减少,可见大部分骨痂长入骨折线,已有骨外膜形成并可见骨连接形成;A组骨组织形态完整,骨小梁生长旺盛,排列规则有序,且无坏死区域;B组骨组织形态紊乱,出现部分坏死区域,并可见少量纤维组织;C、D组骨痂组织中可见大量肉芽组织、纤维组织长入,成软骨细胞增生活跃,并有网状交织的骨小梁;E组骨组织形态已趋于完整,排列有序且部分已被正常组织替代,骨小梁排列相对规则,可见部分成熟板状骨形成;与A组比较,B、C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著降低,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著升高,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著降低(P<0.05);与C、D组相比,E组上述指标变化显著(P<0.05),而各组骨性骨痂相比无明显差异(P>0.05)。结论益气活血通络汤联合低分子肝素抗凝具有显著疗效,其可显著促进骨折愈合,改善血液流变学,并促进TGF-β1表达。

肾纤康通过调节LncRNA5318介导的TGF-β/Smad信号通路抗肾纤维化作用机制研究

目的:基于LncRNA5318介导的TGF-β/Smad信号通路,探讨肾纤康对肾纤维化大鼠的保护作用及机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型。将25只大鼠随机分为5组,每组5只,即假手术组、模型组、贝那普利组、肾纤康低剂量组、高剂量组。各给药组给予相应药物灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续2周。HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,计算肾小管间质损伤指数及肾纤维化相对面积;Western blot法检测肾组织α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、Smad7蛋白的表达;qPCR法检测肾组织LncRNA5318的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾脏出现明显损伤及纤维化;与模型组相比,贝那普利和肾纤康治疗组肾小管间质损伤指数及肾纤维化相对面积明显下降(P<0.05)。Western blot检测提示与假手术组相比,模型组α-SMA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的表达均明显增强,而Smad7表达明显减弱(P<0.05);贝那普利和肾纤康治疗后α-SMA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的表达明显减少,Smad7的表达明显增多(P<0.05)。qPCR检测提示与假手术组相比,模型组LncRNA5318的表达明显增多(P<0.05);贝那普利和肾纤康治疗后LncRNA5318的表达明显减少(P<0.05)。结论:肾纤康可以延缓肾纤维化,疗效与贝那普利相当,作用机制可能与通过调节LncRNA 5318介导的TGF-β/Smad信号通路有关。

TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响

目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 +TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。

TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究

目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响。方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列。利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接。经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842bp),并与pGL3-Basic载体连接。pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1ng/mLTGF-β1,12h后检测荧光素酶的活性。结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒。与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强。结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能。

复方斑蝥注射液对中晚期结直肠癌TGF-β1表达影响的前瞻性临床研究

目的探讨复方斑蝥注射液对中晚期结直肠癌患者TGF-β1表达的影响。方法选取潍坊市中医院肿瘤中心收治的中晚期结直肠癌患者92例,随机分为2组,每组各46例。对照组采用FOLFOX4化疗方案治疗,治疗组在化疗基础上联合复方斑蝥注射液,分别检测治疗前及治疗1、2、3个周期后两组患者血清TGF-β1水平以及评价近期临床疗效。结果在化疗进行到第1、2、3周期时,两组患者血清中TGF-β1水平均有所改善,治疗组与对照组比较水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);近期临床疗效治疗组在客观反应率(ORR)和疾病控制率(DCR)上均高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方斑蝥注射液能下调结直肠癌组织中的TGF-β1的表达水平,抑制肿瘤的生长、浸润,其作用机制可能与肿瘤血管的抑制和癌细胞的死亡有关,具有良好的临床疗效。

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用

目的 :探讨TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用。方法 :显微相差动态观察、细胞增殖计数、ALP活性测定及骨结节计数观察TGF β体外成骨作用。结果 :TGF β对该细胞的增殖 ,低剂量有促进作用 ,高剂量有抑制作用。TGF β(在 3～ 7d)对ALP活性有促进作用 ,并呈一定的时效和量效关系。TGF β低剂量对骨结节形成有促进作用 ,高剂量时为强有力的抑制作用 ,与剂量有相关关系。结论 :TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨表现为双相作用。

三七总皂苷提取物Rg1对CsA慢性肾毒性大鼠肾组织TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对环孢素A(Cs A)引起的肾间质纤维化的保护作用。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、模型组、G-Rg1干预组,采用低盐饮食及Cs A灌胃的方法建立Cs A慢性肾纤维化的模型。观察Rg1对大鼠尿量、肾功能、肾脏病理及纤维化指标TGF-β1、α-SMA表达的影响。结果:Rg1能减轻肾组织的病理改变,并下调TGF-β1、α-SMA在肾组织的表达。结论:Rg1通过抑制TGF-β1及α-SMA的表达而发挥保护肾脏的作用。

肝细胞生长因子对系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的影响

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对大鼠系膜细胞增殖及对TGF-β1启动子活性的作用。方法应用MTT法观察HGF(0、0.1、1.0、1.0和100.0ng/mL)对大鼠系膜细胞增殖的影响;构建含不同长度人TGF-β1基因启动子片段的重组体phTGF2.14、phTGF1.12,以氯霉素乙酰基转移酶(CAT)为报告基因,并利用脂质体法将其转染至大鼠系膜细胞中,ELISA方法检测报告基因CAT的活性,以观察不同浓度的HGF(1.0、10.0ng/mL)对TGF-β1启动子活性的作用。结果大鼠系膜细胞经不同浓度的HGF干预后,各实验组与对照组相比细胞增殖水平差异无显著性,P>0.05。在系膜细胞中,HGF的浓度分别为1.0和10.0ng/mL时对重组体phTGF2.14及phTGF1.12的表达活性无抑制作用。结论HGF不能直接抑制大鼠系膜细胞增殖。在系膜细胞中HGF对TGF-β1启动子的表达活性无作用,提示其拮抗TGF-β1生物学作用的靶点并不是发生在基因转录水平。

五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad及Ras/ERK信号通路蛋白的影响

目的探讨五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad及Ras/ERK信号通路蛋白的影响,阐述五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制。方法SD大鼠以高脂低蛋白饲料饲养,饮用10%乙醇,并腹腔注射4.1mol/LCCl4制备肝纤维化模型,给予五灵胶囊进行治疗1个月。Western blot检测肝组织中α-SMA、Ras、ERK、p-ERK、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、TβRⅠ、TβRⅡ;RT-PCR法检测肝组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1mRNA;酶法测定血清ALT、AST;ELISA测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量;肝组织masson和HE染色进行肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度评分。结果五灵胶囊可显著降低血清AST、ALT水平,下调肝组织中Rasp21、α-SMA、p-ERK、TβRⅠ蛋白与TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达(P<0.01或0.05),增加p-Smad2/3蛋白表达(P<0.01),使肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度显著降低。结论五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制是显著降低肝纤维化大鼠组织肝细胞变性和胶原纤维增生的程度、抑制TGF-β/Smad及Ras/ERK信号通路TβRⅠ、Rasp21、p-ERK蛋白表达及TGF-β1过量分泌。

TGF-β_1/Smads细胞因子在硬皮病皮肤

应用免疫组织化学SP法测定38例硬皮病患者活检皮肤组织和10例正常活检皮肤组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、Smad7表达含量,并结合病例临床资料加以分析.实验结果表明,硬皮病患者组活检皮肤组织的TGF-β1、Smad2/3、Smad4表达量显著高于正常皮肤对照组;硬皮病患者组活检皮肤组织的Smad7表达量低于正常对照;在硬皮病患者组内活检皮肤组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7表达量与患者病情分类、分期、合并有无其他结缔组织疾病没有差异.提示TGF-β1/Smads信号传导细胞因子异常参与了硬皮病纤维化的整个发病过程,TGF-β1、Smad2/3、Smad4高表达和Smad7调控不足是促进硬皮病纤维化的主要原因之一.

TGF-β1对大鼠角膜移植后IL-6,IL-8的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与大鼠穿透性角膜移植术后外周血中IL-6I、L-8含量的关系。方法:建立大鼠穿透性角膜移植模型,于术后1周、2周、3周、4周4个时间点用ELISA法检测大鼠外周血中IL-6I、L-8含量的变化。结果:实验组各时间点IL-6I、L-8的表达较实验对照组和空白对照组均明显下降(P<0.01)。结论:TGF-β1通过抑制大鼠穿透性移植术后外周血中IL-6I、L-8的表达来发挥免疫抑制作用。

星形细胞瘤组织CD105与TGF-β_1的表达及意义

目的探讨CD105和转化生长因子β1(TGF-β1)在星形细胞瘤中的表达及意义,为星形细胞瘤的生物治疗提供依据。方法采用免疫组化法检测正常脑组织、低级别(Ⅰ～Ⅱ级)和高级别(Ⅲ～Ⅳ级)星形细胞瘤组织及瘤旁组织中CD105和TGF-β1蛋白表达。结果星形细胞瘤组织中CD105标染的微血管密度(CD105-MVD)和TGF-β1蛋白表达水平明显高于瘤旁组织和正常脑组织(P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤CD105-MVD和TGF-β1蛋白表达水平均高于Ⅰ～Ⅱ级星形细胞瘤。星形细胞瘤中TGF-β1高表达组CD105-MVD显著高于低表达组和阴性表达组(P<0.05),低表达组高于阴性表达组(P<0.05)。结论CD105与TGF-β1在星形细胞瘤中表达关系密切,可促使肿瘤生长,使其增殖侵袭加速并向恶性转变。CD105与TGF-β1联合检测是判断星形细胞瘤恶性程度的有价值的指标,以此靶点的抗肿瘤治疗将为星形细胞瘤的治疗带来新的选择。

佐剂性关节炎大鼠肺功能变化与Foxp3、TGF-β1/Smads信号传导通路的相关性研究

目的:观察佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠肺系数、肺功能变化、调节性T细胞及Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达,探讨Foxp3与TGF-β/Smads信号传导通路在佐剂性关节炎大鼠肺功能降低中的可能作用机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组和模型组,每组12只,向模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成佐剂性关节炎模型。致炎48天后,观察两组大鼠足跖肿胀度及关节炎指数(AI),计算两组大鼠肺系数,检测大鼠肺功能,测定调节性T细胞百分率,HE染色观察肺病理学改变,免疫组化染色观察Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达情况。结果:①与正常对照组相比,AA模型组大鼠足跖肿胀度、AI、肺系数、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC)、肺泡炎积分、TGF-β1及Smad3蛋白表达明显升高(P<0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)、CD4+T细胞、CD25+T细胞、CD4+CD25+T细胞百分率、Foxp3蛋白及Smad7蛋白表达显著降低(P<0.01)。②Spearman相关分析可知,AA大鼠肺功能参数中FEF50、MMF与足跖肿胀度呈负相关,MMF与肺系数呈负相关,Cldyn与TGF-β1蛋白积分光密度值呈负相关;FEF50、MMF与关节炎指数呈正相关,FEF75与肺系数呈正相关,FEV1/FVC与Foxp3蛋白表达染色指数、Foxp3蛋白积分光密度值呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论:AA大鼠在足跖肿胀度、关节炎指数升高的同时出现肺功能的下降,提示可能是致炎后炎症的持续、发展而出现慢性炎症反应导致肺的损伤(肺间质纤维化),而肺功能的下降与Foxp3、Smad3、Smad7、TGF-β1蛋白表达呈相关性,说明转录因子Foxp3和TGF-β1/Smads信号传导通路共同参与其作用机制。

TGF-β对EMT的诱导及EMT抑制剂研究进展

上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最主要途径。转化生长因子β(TGF-β)是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子。本文系统介绍TGF-β及其诱导肿瘤细胞发生EMT的信号通路,并综述抑制EMT发生的新抑制剂。

TGF-β1、Smad2、CyclinD1与恶性肿瘤关系的研究进展

转化生长因子β1（TGF -β1）是具有负调控生长功能的细胞因子之一，它可使许多细胞生长发生停滞，其主要方式是通过阻止 G1期细胞进入 S 期。TGF -β1的生长抑制作用是通过其信号转导通路完成的，TGF -β1首先与其对应的受体结合形成复合物，该复合物对下游的Smad2蛋白进行活化，并使 Smad2与 Smad4结合，形成转录复合物后进入细胞核，并参与核酸转录因子及靶基因启动子结合调节靶基因的转录，以发挥生长抑制效应［1］。随着 Smad 蛋白家族的发现，TGF -β1信号通路的研究也取得了极大进展，即发现某些恶性肿瘤的发生与 TGF -βRⅡ表达异常有关，同时又存在 Smad 蛋白异常，Smad2属于受体激活的 Smad 蛋白家族成员，Smad2基因在多种肿瘤中发生突变，是一种可能的肿瘤抑制基因。细胞周期素 D1（CyclinD1）为细胞周期调控基因，属于癌基因，Cy-clinD1的过度表达可引起细胞增殖失控，现在许多肿瘤中均已发现有该基因扩增现象。本文就 TGF -β1、Smad2、CyclinD1与恶性肿瘤关系的研究进展做一综述。

TGF-β_1在IgA肾病中的作用

转化生长因子β1(TGF-β1)被认为是最重要的促纤维化因子之一。在IgA肾病中,一方面它能增加细胞外基质的合成并抑制其降解,从而导致肾小球硬化;另一方面它可调节肾小管上皮细胞向间充质细胞转化,从而导致肾间质纤维化。血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体抑制剂不能完全阻断TGF-β1的表达。修饰素cDNA注入骨骼肌内可阻止纤维化进程,有可能成为治疗肾脏纤维化疾病的有效药物。

重症肌无力病人外周血单个核细胞TGF-β及IL-6水平的测定

①目的 探讨转化生长因子 β(TGF β)及白细胞介素 6 (IL 6 )与重症肌无力 (MG)病人发病的关系。②方法 利用体外细胞培养方法和ELISA法 ,检测 34例MG病人及 2 0例健康对照者外周血单个核细胞经乙酰胆碱受体 (AchR)刺激后细胞培养上清液中TGF β、IL 6水平。 ③结果 MG病人外周血单个核细胞TGF β、IL 6水平高于正常对照组 (t=2 .0 1、2 .18,P <0 .0 5 ) ;且TGF β水平与病程有关 (F =3.32 ,q =3.82 ,P <0 .0 5 )。 ④结论MG病人自身免疫功能异常 ,TGF β及IL

TGF-β/Smads通路关键蛋白在5种前列腺癌细胞株中表达的鉴定及意义

目的:对多种不同人前列腺癌细胞株TGF-β/Smads信号通路的"开放"或"关闭"状态进行鉴定,初步探讨此通路在前列腺癌侵袭、转移中的作用及可能的机制。方法:用Western印迹法检测LNCaP、PC-3、DU145及AR-CaP亚细胞系IF11、IA8细胞中TGF-β/Smads通路的关键蛋白TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、Smad2/3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4的差异表达。结果:TβRⅡ在PC-3、DU145、IF11、IA8中表达较高,在LNCaP中表达极低;Smad2/3在所有细胞中表达均较高,但活性成分p-Smad2仅在PC-3、DU145中表达;Smad4在LNCaP、PC-3、DU145中表达较高,IF11、IA8中表达缺失。结论:不同转移潜能的前列腺癌细胞株TGF-β/Smads通路的"开闭"状态存在差异,仅PC-3、DU145细胞处于开放状态;前列腺癌细胞可能通过不同的方式改变TGF-β/Smads通路状态参与晚期肿瘤的侵袭、转移过程。

固本通络汤对DM大鼠早期肾损害及TGFβ-1表达影响的实验研究

本研究运用固本通络汤观察其对糖尿病（DM）大鼠早期肾损害及TGF-β1表达的影响,获得较好的疗效,现报道如下。

miR-101-3p靶向TGFβR1/Smad抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移

目的探索miR-101-3p对视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法RT-PCR检测miR-101-3p及转化生长因子β受体1(transforming growth factor beta receptor 1,TGFβR1)表达水平;生物信息学预测miR-101-3p与TGFβR1的靶向关系并通过荧光素酶报告实验进行验证。将Y79细胞分为Control组、miR-101-3p mimic组(转染miR-101-3p mimic)、pcDNA-TGFβR1组(转染pc-TGFβR1)及miR-101-3p mimic+pc-TGFβR1组(共转染miR-101-3p mimic和pc-TGFβR1),MTT检测细胞增殖速率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测TGFβR1、Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-9、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子、p-Smad2及p-Smad3的表达水平。结果在视网膜母细胞瘤组织中,miR-101-3p的表达为0.35±0.05,明显低于正常视网膜组织(P<0.01);视网膜母细胞瘤细胞株Y79中miR-101-3p的表达为0.24±0.04,明显低于视网膜上皮细胞株ARPE-19(P<0.01);与Control组相比,miR-101-3p mimic组miR-101-3p mRNA水平显著升高、TGFβR1 mRNA水平显著降低(均为P<0.01);miR-101-3p与TGFβR1之间存在连续结合片段。与Control组相比,miR-101-3p mimic组TGFβR1的表达水平显著降低,增殖速率及细胞中Ki67表达均显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax及cleaved Caspase-9表达显著升高、Bcl-2表达显著降低,侵袭细胞数目和划痕闭合率显著降低,MMP-2、MMP-9、血管内皮生长因子、TGFβR1、p-Smad2和p-Smad3的表达水平显著降低(均为P<0.01)。结论miR-101-3p通过靶向下调TGFβR1抑制视网膜母细胞瘤细胞的侵袭和迁移。