慢病毒介导的TGFβ-R2 shRNA抑制人LECs细胞TGFβ-R2的表达

目的:观察转化生长因子β-R2特异性短发夹RNA(shRNA)对人晶状体上皮细胞TGFβ-R2表达的影响。方法:根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性shRNA(RNAi)载体,与TGFβ-R2过表达载体共转染293T细胞,经Western blot筛选出有效RNAi载体后,进行扩增、纯化、滴度测定,并转染培养的人LECs,qPCR检测TGFβ-R2siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。结果:经Western blot筛选,TGFβ-R2/GV1 15RNAi#1对目的基因的表达敲减效果最明显,慢病毒包装,滴度为8E+8TU/mL,感染人LECs细胞后,对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果,达到78.1%(P<0.05)。结论:TGFβ-R2 RNAi载体构建成功,并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。