益气养阴通络汤联合贝那普利治疗糖尿病肾病疗效及对血清TGF-β1、VEGF指标影响

目的探讨益气养阴通络汤联合贝那普利治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的疗效及对转化生长因子-β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1)),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)影响。方法选取2019年10月—2021年10月医院收治的DN病人94例,随机分为对照组(n=48)和观察组(n=46)。入院后两组病人均实施生活方式相关的指导,包括体质量控制、运动、戒烟酒等,给予脂质的代谢紊乱相关纠正、血糖控制、血压等基础的治疗,对照组实施盐酸贝那普利片的口服治疗,观察组则在此基础上实施益气养阴通络汤治疗,两组持续治疗4周。对比两组临床疗效、尿微量白蛋白(microalbumin,mALB)、尿白蛋白肌酐比(urine albumin creatine ratio,UACR)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-microglobulin,β_(2)-MG)水平、中医证候评分、血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、血清TGF-β_(1)和VEGF及空腹血糖(fasting plasma glucose/fasting blood glucose,FPG)、餐后2 h血糖(2 hour postprandial blood glucose,2 h PG)和糖化血红蛋白(glyeosylated hemoglobin,HbAlc)指标变化。结果治疗前两组mALB、UACR、β_(2)-MG指标间无统计学意义(P>0.05);治疗后两组mALB、UACR、β_(2)-MG指标较治疗前显著降低(P<0.05);并且观察组降低较明显(P<0.05);观察组治疗总有效率较对照组明显较高(P<0.05);治疗后两组主症评分、次症评分和中医证候总评分明显降低(P<0.05);且观察组降低较明显(P<0.05);治疗后两组血清Hcy、TNF-α、IL-6指标明显降低(P<0.05);且观察组降低较明显(P<0.05);治疗后两组血清TGF-β_(1)和VEGF指标较治疗前明显降低(P<0.05);且观察组降低较明显(P<0.05);治疗后两组FPG、2 h PG和HbAlc指标较治疗前明显降低(P<0.05);且观察组降低较明显(P<0.05)。结论采用益气养阴通络汤联合贝那普利治疗DN具有较好的临床疗效,可降低血清TGF-β_(1),VEGF指标,降低蛋白尿水平。

金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

中药熏蒸治疗炎症坏死期糖尿病足溃疡的疗效及对创面渗出液中TGF-β_(1)、IL-1β、MMP-9、TIMP-1水平的影响

目的探讨自拟中药复方熏蒸治疗炎症坏死期糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)的临床疗效以及其对患者创面渗出液中转化生长因子(TGF)-β_(1)、白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)水平的影响。方法选取2018年3月—2019年12月该院收治的96例炎症坏死期DFU患者,采取简单随机数字表法将其随机分成观察组48例与对照组48例。其中对照组采取西医常规治疗,观察组在此基础上联合笔者自拟中药复方(由大黄、土茯苓、毛冬青、金银花、黄芪、败酱草、连翘、苦参等十六味中药组成)熏蒸治疗。连续治疗14 d后评估两组疗效及安全性。观察两组治疗前及治疗7、14 d后创面面积、创面中医证候积分及创面渗出液中TGF-β_(1)、IL-1β、MMP-9和TIMP-1水平的变化情况,并进行统计分析。结果观察组疾病总有效率和创面中医证候总有效率分别为91.7%(44/48)、85.4%(41/48),均较对照组[75.0%(36/48)、66.7%(32/48)]显著提高(P<0.05)。随治疗时间的延长,两组创面面积均逐渐缩小(P<0.05),创面中医证候积分均逐渐降低(P<0.05);但与同期对照组相比,观察组治疗7、14 d后创面面积均显著更小(P<0.05),创面中医证候积分则均显著更低(P<0.05)。随治疗时间的延长,两组创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1浓度均逐渐升高(P<0.05),IL-1β、MMP-9含量则均逐渐降低(P<0.05);且观察组治疗7、14 d后创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1水平均显著高于对照组同期(P<0.05),IL-1β、MMP-9水平则均较对照组同期显著更低(P<0.05)。两组不良反应均较少且轻微。结论自拟中药复方熏蒸治疗炎症坏死期DFU的整体疗效确切,能明显减轻患者创面局部症状,加快创面愈合速度,其作用机制可能是通过进一步上调创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1表达水平及下调IL-1β、MMP-9表达水平实现的。

TGF-β1通过组蛋白修饰酶调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的表观基因学研究

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)/Smad信号通路与组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的相关性。方法BMSCs成骨诱导培养,用TGF-β1、SB431542和TGF-β1+SB431542干预。分为4组:BMSCsCtrl-3d组(A组),BMSCs-Ctrl-ost3d组(B组),BMSCs-TGF-β1-ost3d组(C组),BMSCs-TGF-β1-SB1UMost3d组(D组)。用qRT-PCR方法检测各组甲基化酶和去甲基化酶mRNA表达量。结果(1)与A组比较,B组DM3B、KDM4A、KDM4B、KDM4C、KDM4D、KDM5A、KDM5B、KDM5C、KDM6A、KDM6B、EZH1的mRNA表达明显增强(P<0.05)。(2)与B组比较,C组KDM3B、KDM4A、KDM4C、KDM4D、KDM5C、EZH1的mRNA表达明显降低(P<0.05);KDM5B、KDM6A、KDM6B的mRNA表达明显增强(P<0.05);而KDM4B、KDM5A表达无明显改变(P>0.05)。(3)与C组比较,D组KDM3B、KDM6A、KDM6B的mRNA表达发生明显改变(P<0.05);KDM4C、KDM4D、KDM5C和EZH1的mRNA改变不显著(P>0.05),KDM4A的mRNA发生非特异性改变(P<0.05)。结论TGF-β1通过TGF-β1/Smad信号通路和TGF-β1/非Smad信号调控部分相关组蛋白甲基化转移酶/去甲化酶的表达,从而促进了BMSCs成骨分化。

基于TGF-β_(1)/Smads信号通路探讨大蒜素对2型糖尿病大鼠肾纤维化的影响

目的:探讨大蒜素对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肾纤维化和TGF-β_(1)/Smads信号通路的影响以及大蒜素对T2DM所致肾纤维化的作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和大蒜素低剂量组(5 mg/kg)、大蒜素中剂量组(10 mg/kg)、大蒜素高剂量组(20 mg/kg),每组10只。正常对照组大鼠常规饲养,其余各组采用高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链尿佐菌素的方法复制T2DM大鼠模型。造模完成后,大蒜素各剂量组大鼠腹腔注射相应剂量大蒜素溶液,正常对照组及模型组腹腔注射等剂量生理盐水,每天1次,共4周。干预4周后,测定各组大鼠空腹血糖水平,称量体质量;生化分析法测定24h尿蛋白(24 hour urine protein,24h UP)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)表达水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)进行肾组织病理学检查;Masson染色进行肾组织纤维化检查并计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测肾组织中转化生长因子β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))、磷酸化Smad2(phospho-Smad2,p-Smad2)、p-Smad3蛋白表达以及Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ,ColⅢ)表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肾小球增大、系膜基质增厚、肾小管上皮细胞空泡变性、炎性细胞浸润,大鼠空腹血糖、24h UP、BUN、SCr、CVF、TGF-β_(1)、p-Smad2、p-Smad3、Col I、ColⅢ均升高,体质量下降;与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠空腹血糖水平降低、体质量升高(P<0.05),24h UP和血清BUN、SCr水平降低(P<0.01),病理学改变改善;与模型组比较,大蒜素低、中、高剂量组大鼠肾组织纤维化改善,肾组织CVF降低(P<0.01);与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠肾组织TGF-β_(1)、p-Smad2、p-Smad3、Col I、ColⅢ蛋白表达下调(P<0.01)。结论:大蒜素对T2DM大鼠肾纤维化具有抑制作用,其机制可能与大蒜素调控TGF-β_(1)/Smads信号通路进而抑制细胞外基质生成有关。

中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin 水平、巨噬细胞M1表型及VEGF蛋白的作用

目的研究中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin水平、巨噬细胞M1表型及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的作用。方法SPF级健康SD大鼠50只,随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余40只进行糖尿病足模型建立,建模成功后40只大鼠按随机数字表法分为模型组,通心络低、中、高剂量组,每组10只,健康组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃;通心络低、中、高剂量组分别给予通心络胶囊0.50、0.75、1.00 g/kg灌胃。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态,HE及Masson染色观察大鼠足部病理形态,RT-聚合酶链反应(PCR)检测Nephrin、podocin表达,多重免疫荧光检测伤口组织中M1型和M2型巨噬细胞数量,Western印迹检测细胞中VEGF、缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达水平,应用ImageJ 1.46医学图像分析糖尿病足大鼠溃疡面积。结果模型组肾小球萎缩,基底膜增厚,有炎性细胞浸润,足部炎症细胞较多,新生胶原纤维组织较薄,且排列疏松、不规律,管腔较少;与模型组相比,通心络低、中、高剂量组有所改善。与健康组相比,模型组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著降低;与模型组相比,通心络各剂量组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著升高,且以高剂量组效果最为显著(P<0.05)。与模型组相比,通心络低、中、高剂量组M1型巨噬细胞显著减少、M2型巨噬细胞数目显著增多(P<0.05)。结论通心络胶囊可促进VEGF/HIF-1α表达,使巨噬细胞向M1极化,从而促进创面愈合,提高nephrin/podocin表达水平,减轻由糖尿病足导致的肾脏负担。

Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平预测慢性鼻窦炎-鼻息肉术后复发的临床研究

目的探究Cyclin D1、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达含量联合中性粒细胞/淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte Ratio,NLR)和血小板/淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte Ratio,PLR)水平预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps,CRSwNP)复发的临床加价值。方法选取广东省韶关市粤北人民医院耳鼻喉科于2021年1月—2022年6月收治的333例CRSwNP患者为研究对象,均行慢性鼻窦炎-鼻息肉术治疗,根据术后复发情况分为复发组(138例)和未复发组(195例),比较两组患者一般资料、Cyclin D1、VEG、NLR、PLR水平,采用受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平对CRSwNP者术后1年复发的预测效能。结果两组Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平对比,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CRSwNP患者复发的影响因素包括Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平(OR=1.521、1.483、1.365、1.403,P均<0.05)。ROC曲线结果显示Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR四者联合检测的灵敏度、特异度及曲线下面积均高于单独检测(P均<0.05)。结论Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平是诱发CRSwNP患者术后复发的相关因素,也是预测CRSwNP患者术后复发的可靠性指标。

伏虎平咳饮对咳嗽变异性哮喘大鼠血清 IL-4、IL-10、TGF-β1影响的实验研究

目的:探讨伏虎平咳饮对咳嗽变异性哮喘大鼠的作用机制。方法:选取60只幼龄SD大鼠,根据体质量随机分为6组,正常对照组,模型对照组,伏虎平咳饮高、中、低剂量组及阳性对照组(布地奈德),给药2周后,ELISA测定各组大鼠血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清IL-4水平升高,IL-10、TGF-β的含量降低,均有显著性差异(P<0.01);与模型对照组比较,伏虎平咳饮高剂量组大鼠血清IL-4含量明显降低(P<0.01),IL-10含量明显升高(P<0.01),TGF-β含量升高(P<0.05)。结论:伏虎平咳饮能够通过升高咳嗽变异性哮喘大鼠血清IL-10、TGF-β1水平,降低血清IL-4水平,减轻气道炎症反应。

缺血性视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿患者基线血清己糖激酶1抗体滴度与抗VEGF治疗后视力改善的相关性分析

目的分析缺血性视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿(RVO-ME)患者基线血清己糖激酶1抗体滴度与抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗后视力改善的相关性。方法招募2017年6月至2020年2月在首都医科大学宣武医院确诊为缺血性RVO-ME并接受初始抗VEGF治疗的53例患者,其中缺血性视网膜中央静脉阻塞(CRVO)23例(CRVO组),缺血性视网膜分支静脉阻塞(BRVO)30例(BRVO组)。另选取该院同期30例行超声乳化的白内障患者作为对照组。研究对象行基线血清己糖激酶1抗体滴度检测、眼科常规检查和光学相干断层成像(OCT)检查。所有RVO-ME患者按照“3+按需治疗方案(pro re nata,PRN)”向玻璃体内注射抗VEGF药物治疗。随访12个月,采用多元线性回归分析缺血性RVO-ME患者抗VEGF治疗后视力改善的影响因素。结果CRVO组基线logMAR BCVA高于对照组和BRVO组,CRVO组和BRVO组基线CRT、基线血清己糖激酶1抗体滴度高于对照组,且CRVO组基线CRT、基线血清己糖激酶1抗体滴度高于BRVO组,差异有统计学意义(P<0.05)。RVO-ME患者基线血清己糖激酶1抗体滴度与随访6个月(r=0.377,P=0.005)、9个月(r=0.362,P=0.008)和12个月(r=0.465,P<0.001)时BCVA改善呈正相关,与随访12个月时中断EZ横向长度减少值(r=0.401,P=0.001)呈正相关。多元线性回归分析结果显示,基线logMAR BCVA、基线血清己糖激酶1抗体滴度是缺血性RVO-ME患者抗VEGF治疗随访12个月时BCVA改善的影响因素(P<0.05)。结论己糖激酶1抗体作为一种新的血清生物标志物,与缺血性RVO-ME患者抗VEGF治疗后的视力改善相关。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

TGF-β1/Smad信号通路在妊娠期高血压疾病中的表达及其与病情严重程度和不良妊娠结局的关系研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路在妊娠期高血压疾病(HDP)患者胎盘中的表达及临床意义。方法回顾性选取2021年2月至2023年2月在新疆医科大学第六附属医院妇产科诊断为HDP的单胎孕妇100例,分为轻度组70例,重度组30例。另选正常单胎妊娠孕妇100名作为对照组。采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测胎盘中TGF-β1、Smad2和Smad3的表达水平,并统计妊娠结局。利用多因素Logistic回归模型来分析TGF-β1/Smad信号通路主要蛋白与HDP以及不良妊娠结局的独立相关性;应用受试者工作特征(ROC)曲线分析TGF-β1/Smad信号通路主要蛋白对HDP的诊断价值以及对妊娠结局的预测价值。结果重度组胎盘组织中TGF-β1、Smad2和Smad3的表达水平分别为(18.10±3.59)%、(4.69±1.01)%、(3.01±0.53)%,轻度组分别为(12.17±3.28)%、(3.16±0.74)%、(2.18±0.47)%,均高于对照组[(9.96±2.42)%、(2.47±0.68)%、(1.77±0.45)%],且重度组高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。100例HDP患者中,妊娠结局良好者81例,妊娠结局不良者19例。妊娠结局不良者胎盘组织中TGF-β1、Smad2和Smad3的表达水平分别为(18.18±3.53)%、(4.77±1.02)%、(3.15±0.54)%,均高于妊娠结局良好者[(12.96±3.32)%、(3.35±0.69)%、(2.26±0.47)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TGF-β1、Smad2和Smad3是导致HDP发生的独立危险因素(P<0.05),也是HDP患者不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TGF-β1、Smad2、Smad2及三者联合诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.867、0.803、0.966,以三者联合诊断价值最高(敏感度为93.00%,特异度为88.00%);TGF-β1、Smad2、Smad3及三者联合预测HDP患者不良妊娠结局的AUC分别为0.846、0.934、0.820、0.974,以三者联合预测价值最高(敏感度为95.83%,特异度为90.70%)。结论TGF-β1/Smad信号通路参与了HDP的发生与发展,TGF-β1、Smad2和Smad2对诊断HDP及预测HDP患者不良妊娠结局的价值较高,且随着病情的加重,TGF-β1、Smad2和Smad2逐渐升高。

加味补阳还五汤对术后腹腔粘连TGF-β1/Smad3通路和腹膜间皮细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨加味补阳还五汤对术后腹腔粘连转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad3通路和腹膜间皮细胞的上皮-间充质转化的影响。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组、加味补阳还五汤组。模型组、透明质酸钠组及加味补阳还五汤组进行术后腹腔粘连模型造模,透明质酸钠为阳性对照组,在手术造模后,一次性腹腔喷洒1%的透明质酸钠凝胶,0.5mL/kg。加味补阳还五汤组术后第2天开始灌胃,灌胃剂量为19.5g/(kg·d)。分别于术后7、14、28d分批将动物处死,每次每组处死9只大鼠。在损伤部位取材:应用免疫组织化学法观察粘连部位的纤维化通路相关蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表达情况;以及其下游胶原沉积相关蛋白Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,Col-Ⅲ)的表达情况和上皮-间充质转化(Epithelialmesenchy-maltransition,EMT)相关的蛋白E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smoothmuscleactin,α-SMA)的表达情况。结果①不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,TGF-β1/Smad3纤维化通路相关蛋白表达情况:与正常组比较,模型组TGF-β1蛋白表达增多(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组TGF-β1蛋白表达减少(均为P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad3蛋白表达增多(均为P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad3蛋白表达减少(P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad7蛋白表达减少(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad7蛋白表达增多(均为P<0.05)。②胶原沉积情况:术后7、14、28d3个时间节点,Col-Ⅰ蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组Col-Ⅰ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅰ蛋白表达减少(均P<0.01)。与正常组比较,模型组Col-Ⅲ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅲ蛋白表达减少(均P<0.01)。③EMT相关指标表达情况:不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,E-Cadherin蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组E-Cadherin蛋白表达减少(均P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组E-Cadherin蛋白表达增多(均P<0.05)。与正常组比较,模型组α-SMA蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组α-SMA蛋白表达减少(均P<0.05)。结论加味补阳还五汤防治术后腹腔的机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad3通路相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白、促进Smad7蛋白的表达抑制纤维化;促进E-Cadherin蛋白、减少α-SMA蛋白表达,减轻腹膜间皮细胞的EMT,抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表达减少细胞外基质的沉积,从而减轻腹膜粘连。

VEGF和TGF-β_1促进非血管化骨移植同期种植骨结合的实验研究

目的:探讨外源性VEGF和TGF-β1对非血管化骨移植同期种植的影响。方法:选用实验犬24只(术前1个月拔除双侧下颌前磨牙),随机分为A、B 2组。选取左侧下颌骨造成2.5 cm全层骨缺损,植入同样大小的全层自体髂骨,钛板固定(髂骨块离体时间控制在20 min以内)。A组(12只)移植髂骨块内植入1枚钛种植体。B组(12只)将钛种植体与rhVEGF165和rhTGF-β1复合后再同法植入移植髂骨内。在所有实验犬的右侧下颌无牙区植入1枚种植体作为对照。术后1、2、4个月取材,行X线、组织学、显微CT观察和种植体骨结合力测试。结果:术后1、2个月B组种植体骨接触率较A组显著增高;对种植体周围骨小梁的显微CT分析表明,B组的成骨的作用较A组明显增强。术后4个月,A、B 2组BIC达到60%以上,种植体骨界面结合力接近220 N,已形成较好的骨结合。结论:VEGF和TGF-β1对NVBG同期种植体骨结合早期(术后1～2个月)有明显的促进作用。NVBG同期种植体在术后4个月可以进行上部义齿修复。

小鼠皮肤创伤愈合过程中VEGF、TGF-β_1、bFGF表达的免疫组织化学研究

目的 了解细胞因子在小鼠皮肤创伤愈合过程中的表达、分布与损伤时间的关系。方法 用免疫组化方法检测不同损伤时间 (生前伤 0h～ 2w)小鼠皮肤切创组织中VEGF、TGF β1、bFGF的表达。结果 VEGF在表皮及皮脂腺呈持续性阳性表达 ,TGF β1、bFGF于伤后 3h在表皮表达增强 ,并分别持续至伤后 12h和 4 8h。三种细胞因子在炎性细胞和修复细胞中的表达变化规律相似 ,伤后 6h主要在部分中性粒细胞表达 ,12h后则主要在巨噬细胞和成纤维细胞。阳性细胞数量随损伤时间的延长而增多 ,于伤后 96h达峰值 ,伤后 1w和 2w仍见少量巨噬细胞和成纤维细胞表达阳性。结论 TGF β1、bFGF在小鼠皮肤表皮的表达强度和损伤时间有关 ,VEGF、TGF β1、bFGF在炎性细胞和修复细胞的表达在量上和细胞分布上均和损伤时间有关。

二期骨折愈合过程中骨痂软骨细胞凋亡与VEGF和TGF-β_1的表达

目的 :探讨二期骨折愈合过程中骨痂软骨细胞凋亡与VEGF和TGF - β1的表达变化。方法 :建立 16只SD大鼠股骨二期骨折愈合模型 ,分别于骨折后 1、2、3、4周取材 ,对骨痂进行HE染色及VEGF、TGF - β1免疫组化染色 ,同时用TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果 :VEGF骨折后第 1周在间充质细胞未见阳性表达 ,但软骨细胞、成骨细胞及新生网织骨小梁表面基质内呈强阳性表达 ;第 2、3周时软骨细胞中有强阳性表达 ;第 4周在软骨细胞中表达强度开始下降。TGF - β1第 1周在间充质细胞内呈弱表达 ;第 2周在软骨细胞中表达最强 ;第 3、4周其在软骨细胞中呈下降趋势。骨折愈合的不同时期都有细胞凋亡的发生 ,第 3周表现最为明显。结论 :在骨折愈合的不同时期 ,VEGF、TGF - β1表达的强弱有一定的差异。TGF - β1在骨折愈合早期可能起着促进间充质细胞向软骨细胞转化的作用 ,到第 2周其表达最强。VEGF在骨折的第 2周表达最强 ,到第 3、4周开始下降。软骨细胞的凋亡主要发生在骨折后的第 3周。

非小细胞肺癌患者血清中TGF-β_1与VEGF的表达及临床意义

目的探讨NSCLC患者血清中转化生长因子β(1TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义。方法用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测58例NSCLC患者术前血清和29例健康体检者血清中TGF-β1和VEGF的水平,比较两组血清TGF-β1和VEGF表达水平的差异以及与临床病理特征的关系。结果 58例NSCLC患者血清中TGF-β1和VEGF水平均显著高于健康者(P<0.01),血清TGF-β1和VEGF的表达水平与病理分化低、临床分期晚及淋巴结转移呈正相关关系(P<0.01),而与性别、年龄、病理类型等差异均无统计学意义(P>0.05);血清TGF-β1表达水平与VEGF水平呈正相关(P<0.01)。结论 TGF-β1和VEGF可能共同参与了NSCLC血管生成的作用,从而促进NSCLC的发生、发展和转移。

小夹板固定对实验性骨折愈合的VEGF及TGF-β_1表达的影响

目的:通过观察小夹板局部外固定骨折愈合过程中骨痂组织内转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨骨折固定的方式与VEGF、TGF-β1及骨折愈合的关系。方法:选用45只健康家兔,在左侧胫骨中下三分之一处,复制3mm标准横形骨折模型,随机分成A组、B组、C组。A组与B组用石膏固定5d后改成小夹板外固定,将压力传感器置于夹板内侧骨折断端,但A组与B组夹板包扎松紧不一致,A组扎带上下移动3mm,B组移动7mm,此时读出A组压力传感器读数是18kPa,B组压力传感器读数是12kPa;C组钢板内固定;术后14d,24d,34d分批取死兔子,取胫骨标本作骨切片,采用免疫组织化学的方法(SP法)检验三组模型中VEGF和TGF-β1的表达情况。结果:A组骨痂组织中TGF-β1和VEGF表达量多,颜色深,VEGF、TGF-β1表达基本呈同步关系,即TGF-β1表达强时,VEGF亦表达强。结论:A组缩短骨折愈合所需的时间,提高骨折愈合质量。B组和C组骨折愈合较慢。

胃癌螺旋CT征象与病理、MVD及VEGF、TGF-β_1表达间关系的研究

目的 探讨胃癌螺旋CT (SCT)征象与MVD及VEGF、TGF β1蛋白表达间的关系。方法 对 4 0例进展期胃癌病人行SCT平扫及三期动态增强扫描。 4 0例均于检查后一周内施行全胃或部分胃切除手术、剖腹探查术。术后标本行常规石蜡包埋及 5 μm切片。然后行VEGF、MVD、TGF β1免疫组化染色。结果 ①在淋巴结转移阳、阴性组 ,VEGF的阳性表达率分别为 85 .71% (12 / 14 )和 15 .38% (4 / 2 6 ) ;在肝转移阳、阴性组 ,VEGF阳性表达率分别为 83.33% (5 / 6 )和 32 .35 % (11/ 34)。②在浆膜侵犯有、无组 ,TGF β1阳性表达率分别为 4 4 .4 4 % (12 / 2 7)和 7.6 9% (1/ 13) ;在腹腔转移阳、阴性组 ,TGF β1阳性表达率分别为 80 .0 0 % (4 / 5 )和 2 2 .86 % (8/ 35 )。③MVD值变化范围为 4 .8～ 4 9,平均值 2 6 .0 4(标准差 11.96 )。在VEGF阳、阴性组 ,MVD值分别为 30 .91± 12 .2 2和 2 2 .78± 10 .83;在TGF β1阳、阴性组 ,MVD值分别为 2 9.80± 12 .4 3和 2 4 .4 2± 11.6 0。④在 4 0例胃癌中 ,共有 9例胃癌出现VEGF与TGF β1阳性表达 (P =0 .0 0 2 ,r =0 .4 6 8)。结论 VEGF的表达与胃癌SCT征象上的淋巴结转移及肝转移有关 ;TGF β1的表达与胃癌SCT征象上的浆膜侵犯及腹腔转移有关 ;TGF β1可能通过上调VEGF?

库肯勃瘤组织VEGF,TGF-β_1,MMP-2,MMP-9表达的意义

目的:研究VEGF,TGF-β1,MMP-2,MMP-9在卵巢原发上皮性肿瘤、库肯勃瘤中的表达及其相关性, 以探讨其在库肯勃瘤发生、发展中的作用. 方法:应用免疫组化S-P法检测VEGF,TGF-β1, MMP-2,MMP-9在45例卵巢原发上皮性肿瘤、38 例库肯勃瘤中的表达情况. 结果:VEGF、TGF-β1在卵巢原发上皮性肿瘤和库肯勃瘤组织中的表达显著高于正常卵巢组织(VEGF: x2=5.318,P=0.021;x2=22.985,P=0.001. TGFβ1:x2=9.778,P=0.002;x2=12.584,P=0.001). MMP-2,MMP-9在正常卵巢组织中表达缺如; VEGF,MMP-2,MMP-9在库肯勃中阳性表达率明显高于卵巢原发上皮性肿瘤(VEGF:x2=13.149,P=0.001; MMP-2:x2=33.668,P=0.001;MMP-9:x2=38.839, P=0.001);TGF-β1阳性表达率在卵巢原发上皮性肿瘤和库肯勃瘤之间无显著差异.VEGF,TGF-β1, MMP-2,MMP-9在卵巢原发上皮性肿瘤、库肯勃瘤中,任意两指标阳性表达均有正相关性(P<0.05或P<0.01). 结论:VEGF,TGF-β1,MMP-2,MMP-9参与卵巢癌、库肯勃瘤的发生、发展及演进过程,并可为卵巢上皮性肿瘤及库肯勃瘤的鉴别诊断提供一定依据.

骨肉瘤VEGF、bFGF,TGF-β_1和TAF表达及其与血管生成的关系

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其受体和肿瘤源性粘附因子（ＴＡＦ）在骨肉瘤中的表达特点，以及它们与肿瘤内微血管密度和病人预后的关系。方法：应用免疫组化和形态计量检测８０例骨肉瘤微血管密度（ＭＶＤ），ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＴＧＦ－β１及其受体和ＴＡＦ的表达，并应用ＣＯＸ比例风险模型检测上述因素和预后的关系。结果：８０例骨肉瘤中，ＶＥＧＦ／ＫＤＲ强阳性４２例（５２．５％），ｂＦＧＦ／ｂＦＧＦｒ阳性４６例（５７．５），ＴＧＦβ１／ＴＧＦβ（ＲＩ）阳性３１例（３８．８％），ＴＡＦ阳性３６例（４５％）。血管生成因子与其受体表达具有一致性，并与ＭＶＤ值显著相关。ＣＯＸ比例风险模型分析结果显示ＭＶＤ和ＶＥＧＦ是影响骨肉瘤的重要因素（Ｐ＜０．０５）。结论：ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦ－β１和ＴＡＦ是骨肉瘤血管生成的重要因子，并通过促进血管生成影响病人的预后。其中ＭＶＤ和ＶＥＧＦ是评估骨肉瘤病人预后的重要指标。