抗PD-L1/TGF-βR融合蛋白(SHR-1701)增强弱淋巴细胞恢复力型肺癌免疫治疗敏感性及其机制研究

背景与目的目前已经研发出第二代程序性死亡受体1/程序性死亡配体1(programmed cell death-protein 1/programmed death-ligand 1,PD-1/PD-L1)抑制剂用于同时阻断PD-1/PD-L1和转化生长因子β/转化生长因子β受体(transforming growth factor-beta/transforming growth factor-beta receptor,TGF-β/TGF-βR),例如bintrafusp alfa(M7824)、SHR-1701和YM 101。因此,我们有必要确定对PD-1/PD-L1抑制剂耐药但对双抗药物敏感的肺癌患者的预测因素。本研究的目的是寻找这种预测因子。方法通过多因素Cox回归模型研究肺癌患者接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗后的临床结局与其淋巴细胞恢复能力之间的相关性。通过慢病毒转染使小鼠CMT167肺癌细胞系稳定表达萤火虫荧光素酶基因,并原位种植在同源小鼠的肺组织。利用生物发光成像、流式细胞术和免疫组织化学技术测定免疫治疗的有效性及肿瘤浸润免疫细胞的功能。结果对于接受抗PD-1/PD-L1抗体治疗的肺癌患者,弱淋巴细胞恢复力与较短的无进展生存期(PFS;P<0.001)、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的累积及外周血中CD8+T细胞的减少有关。化疗后淋巴细胞恢复力较弱的小鼠的肿瘤和外周免疫器官中CD8+T细胞与Treg细胞处于非平衡状态。这类小鼠对抗PD-1抗体无应答,但对抗PD-L1/TGFβR融合蛋白(SHR-1701)敏感。同时,SHR-1701(而非抗PD-1抗体)显著增强了淋巴细胞恢复力受损患者外周血CD8+T细胞中IFN-γ的产生和Ki-67的表达。结论弱淋巴细胞恢复力和既往化疗后持续性淋巴细胞减少的肺癌患者对抗PD-1/PD-L1抗体耐药,但可能对第二代药物(如SHR-1701)敏感。

TGF-βRⅡ受体敲除的CLDN18.2 CAR T细胞对胃食管交界癌抑制作用的实验研究

目的:构建敲除TGF-βRⅡ的靶向CLDN18.2的CAR T细胞,并探索其在胃食管交界癌中的治疗潜力;方法:通过CRISPR/Cas9敲除T细胞中的TGF-βRⅡ,并使用慢病毒感染法构建CLDN18.2 CAR T细胞;流式细胞术检测CAR T细胞的阳性率、食管腺癌细胞系中CLDN18.2的表达情况、CAR T细胞中Smad2/3的磷酸化水平以及PD-1的表达水平;免疫荧光法检测CAR T细胞中TGF-βRⅡ的表达;LDH释放实验检测对靶细胞的细胞毒性;裸鼠移植瘤模型检测肿瘤抑制能力;ELISA实验检测肿瘤组织中细胞因子的释放水平;结果:成功构建敲除TGF-βRⅡ的CLDN18.2 CAR T细胞(18.2BBZ/TGFBRKO)以及二代CLDN18.2 CAR T细胞(CLDN18.2);18.2BBZ及18.2BBZ/TGFBRKO在体外对CLDN18.2+的肿瘤细胞具有剂量依赖型细胞毒性;TGF-β1不能使18.2BBZ/TGFBRKO的Smad2/3发生磷酸化,在TGF-β1存在时,18.2BBZ/TGFBRKO与肿瘤细胞共孵育后PD-1的表达水平显著低于18.2BBZ(P<0.001);18.2BBZ/TGFBRKO较18.2BBZ对裸鼠移植瘤的抑制能力更强(P<0.0001),并且在肿瘤组织中保持更强的细胞因子分泌水平(P<0.01);结论:通过CRISPR/Cas9敲除CLDN18.2 CAR T细胞中的TGF-βRⅡ可以有效降低T细胞耗竭,并在小鼠移植瘤模型中产生更强的抑制肿瘤活性,并增加促炎性细胞因子的分泌。

胃癌组织TGF-βRII、Smad4、Smad7的表达及其与临床病理特征和生存的关系

背景与目的:目前研究认为,TGF-β/Smads信号通路在恶性肿瘤的发生发展过程中起到重要的作用,并可能与胃癌等恶性肿瘤的生物学行为密切相关。本研究通过探讨TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7在胃癌组织的表达及其意义,分析它们与临床病理特征及患者生存之间的关系。方法:应用组织芯片技术和免疫组化SABC法检测200例胃癌组织及56例癌旁组织TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达。结果:胃癌组织中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7的阳性率分别为25.5%、67.0%和47.0%。TGF-βRⅡ表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、分化程度和Lauren分型密切相关(分别χ2=6.214,χ2=11.308,χ2=14.633和χ2=8.216,均P<0.05);Smad4表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=16.162和χ2=13.100,均P<0.05);Smad7表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=4.710和χ2=5.297,均P<0.05);Smad4与TGF-βRⅡ表达呈正相关(r=0.191,P=0.007);Smad4表达与患者生存密切相关(χ2=4.090,P=0.043)。结论:胃癌组织中广泛存在TGFβ-Smad信号通路相关分子TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7表达异常。胃癌中Smad4蛋白阳性患者其预后优于阴性者。

胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达及其临床意义

目的检测TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3及CDC25蛋白在胃癌组织中的表达并探讨它们在胃癌组织中的发生、发展的意义。方法利用免疫组织化学SP法检测110例胃癌、21例高级别上皮内瘤变、17例低级别上皮内瘤变、54例肠上皮化生、28例慢性萎缩性胃炎和57例正常胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达。结果 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25在胃癌组织中的表达均高于正常胃黏膜组织。TGF-β1在胃癌组织中的表达高于上皮内瘤变、肠上皮化生和慢性萎缩性胃炎组织;Smad2/3在胃癌组织中的表达高于慢性萎缩性胃炎组织;CDC25在胃癌组织中的表达高于低级别上皮内瘤变组织,且在胃癌淋巴结转移组中的表达高于未转移组。TGF-β1与TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25呈正相关,Smad2/3与CDC25也呈正相关。结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25的表达是引起胃癌发生、发展的重要因素,可作为胃癌早期诊断的辅助指标。

TGF-βRⅠ及Smad2表达情况对绵羊腔前卵泡发育的影响

为探索适于哺乳动物腔前卵泡的培养方式以及观察颗粒细胞与卵母细胞的信号表达,为阐明早期卵泡生长的复杂机理和揭示卵泡发生发育的内在规律提供参考,通过使用免疫组织化学染色、荧光免疫组织化学染色以及RT-PCR的方法,观察TGF-βRⅠ与Smad2的蛋白和mRNA在绵羊卵巢卵泡的表达情况。结果表明:TGF-βRⅠ在绵羊腔前卵泡及小腔卵泡的颗粒细胞及卵母细胞有表达,随着卵泡的生长发育,到成熟卵泡时期时,信号消失;Smad2蛋白在绵羊卵泡各个发育时期的颗粒细胞中均有表达,在绵羊腔前卵泡的卵母细胞中无表达,随着卵泡的生长发育,信号逐渐出现,到成熟卵泡时期时,Smad2蛋白在卵母细胞表达较强;TGF-βRⅠmRNA只在成熟卵泡和培养前腔前卵泡颗粒细胞中检测到表达,在成熟卵泡和培养前腔前卵泡颗粒细胞中均有Smad2 mRNA表达,但在培养后腔前卵泡颗粒细胞中Smad2 mRNA表达量较低。TGF-βRⅠ与Smad2的蛋白和mRNA表达与绵羊卵泡发育情况密切相关。

骨髓TPO与TGF-β1、TGF-βRⅢ的改变及其相关性在儿童ITP发病中的意义

目的 探讨骨髓内环境中的血小板生成素 (TPO)、转化生长因子 β1 (TGF -β1 )及巨核细胞中转化生长因子 β1 的Ⅲ型受体 (TGF -βRⅢ )在儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)发病中的意义。方法 收集 2 8例急性ITP(AITP)患儿、16例慢性ITP(CITP)患儿和 2 0例相对正常儿童的骨髓 ;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞 ;采用双抗体夹心ABC -ELISA法检测TPO、TGF -β1 水平 ;采用原位杂交法检测TGF -βRⅢ的表达情况。结果 ①AITP组与CITP组骨髓TPO的水平均高于对照组 ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,但三组之间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;②AITP组与CITP组骨髓TGF -β1 的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,三组之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;③除CITP组骨髓TPO与TGF -β1 的水平呈正相关关系外 (r =0 .65 3 ,P <0 0 5 ) ,其余两组均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 检测ITP患儿骨髓TPO、TGF -β1的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达情况对于研究ITP的发病机制以及早期分型和判断预后有重要参考价值。

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-βRⅠmRNA及其蛋白的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达转化生长因子βI型受体(transforming growth factorβ,TGF-β-RI)mRNA及其蛋白的影响。方法:采用RT-PCR法检测各组含药血清对Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA的影响;采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠MsC表达TGF-βRⅠ蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA(P<0.01),复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。(2)Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ蛋白,复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷的含药血清均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-βRⅠmRNA及其蛋白。复方组作用较强,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。

Smad_4和TGF-βRⅡ在肝细胞癌中的表达及意义

目的 探讨转化生长因子β(TGF-β)通路中 Smad4 蛋白与转化生长因子β 型受体 (TGF-β R )蛋白的变化及其在肝细胞癌中可能的作用机制。方法 用免疫组化 SABC法检测 4 5例石蜡包埋人肝细胞癌标本及36例癌旁组织中 Smad4 、TGF-β R 蛋白表达情况。结果 4 5例肝癌组织中 ,Sm ad4 、TGF-βR 阳性表达率分别为 5 1.5 %和 4 2 .2 %。肝细胞癌组织中 Smad4 、TGF- β R 阳性表达与癌旁组织比较均明显降低 (P <0 .0 5 ) ,且与包膜是否完整和有无癌栓有关 (P <0 .0 5 ) ,TGF- βR 与肝细胞癌组织分化程度有相关性 (P <0 .0 5 )。结论 肝细胞癌组织中 Smad4 、TGF- β R 阳性表达均降低 ,Smad4 及 TGF- βR 的丢失。

TGF-βRⅡ在直肠癌中的表达及其临床意义

目的：研究ＴＧＦ－βＲⅡ表达与直肠癌生物学行为和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ方法检测７８例直肠癌手术标本中ＴＧＦ－βＲⅡ的表达情况。结果：直肠癌原发灶ＴＧＦ－βＲⅡ表达阳性率为４８．７２％，其中无区域淋巴结转移者阳性率为８２．１４％，有区域性淋巴结转移者阳性率为３０．００％（Ｐ＜０．０１），ＴＧＦ－βＲⅡ表达水平与直肠癌浸润深度和Ｄｕｋｅｓ分期呈负相关（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ－β阳性组术后３年、５年生存率分别为７８．０３％，６９．０２％，而阴性者为３３．８０％、１３．７５％，两组患者术后３年、５年生存率差别均有显著性意义（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。结论：直肠癌由于ＴＧＦ－βＲⅡ减少而逃逸ＴＧＦ－β的生长抑制作用，加速恶性细胞的增殖、浸润和转移。故检测直肠癌组织中ＴＧＦ－βＲⅡ表达状况。

在支气管上皮细胞恶性转化过程中Smad7表达变化对TGF-βR、SMADs及STRAP蛋白的影响

目的研究永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化过程中,作为Sm ad蛋白家族的抑制分子,Sm ad7对TGF-βR、R Sm ads及STRAP蛋白的表达影响。方法培养BEP2D、BERP35T2细胞及稳定表达Sm ad7蛋白的细胞BS7(来源于BEP2D)、RS7(来源于BERP35T2),提取细胞蛋白,用W estern b lot方法比较稳定转染Sm ad7基因前后的BEP2D和BERP35T2细胞中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Sm ad2/3、Sm ad4及STRAP蛋白表达差异。结果稳定转染Sm ad7基因后细胞中TGF-βRⅡ表达降低,Sm ad2和STRAP蛋白表达增高,Sm ad3、Sm ad4蛋白表达无变化。结论Sm ad7高表达导致TGF-β信号通路发生改变,其中TGF-βRⅡ表达降低,STRAP表达增高可能是诱使细胞发生恶性转化的机制之一。

伴有MSI的结直肠癌TGF-βRⅡ基因突变的研究

目的 许多研究表明在伴有微卫星不稳定性(MicroSatellite Instability,MSI)的遗传性结直肠癌中,β-转化生长因子Ⅱ型受体(Transfonning Growth Factor-βTypeⅡReceptor,TGF-βRⅡ)基因突变频繁,极可能是其发生的重要机制;并且TGF-RⅡ基因的(A)_(10)重复序列是MSI的靶点。但在散发性结直肠癌中报道较少,本研究通过对散发性结直肠癌的MSI及TGF-RⅡ基因突变的枪测,以期了解它们在散发性结直肠癌发生中的作用 方法 选取单态性很强的BAT-26微卫星位点,应用PCR等分子生物学手段检测MSI;应用PCR-SSCP-银染法-测序检测RⅡ基因突变 结果 有13例(26％)为MSI,近端(42.11％)明显高于远端者(16.13％)(P<0.05),RⅡ基因的突变率为10％(5/50),表现为RⅡ基因的(A)_(10)重复序列出现一个A的缺失导致框架移位突变(Frame Shift Mutation),伴有MSI的肿瘤中RⅡ突变率为38.46％,所有RⅡ突变者均伴有MSI,而无MSI的肿瘤中均无RⅡ突变(P<0.01) 结论 不仅在HNPCC中,而且在散发性结直肠癌中,TGF-RⅡ基因的(A)_(10)重复序列是MSI的靶点。

TGF-βRⅡ基因在乳腺癌中的表达及临床意义

目的检测TGF-βRⅡ基因在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达水平,并探讨其在乳腺癌中的临床意义。方法选取初治乳腺癌患者病理标本65例,分别运用RT-PCR和Western blot检测TGF-βRⅡ的mRNA及蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的表达,统计分析乳腺癌组织中TGF-βRⅡ的表达与患者临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中TGF-βRⅡ的mRNA表达水平低于癌旁正常乳腺组织(0.4352±0.1623 vs 0.5218±0.1236,P<0.05),同时其编码的TGF-βRⅡ蛋白表达水平也低于癌旁正常乳腺组织(0.2165 vs 0.3725,P<0.05)。TGF-βRⅡ蛋白表达情况与原发肿瘤大小、临床分期有关,肿瘤越小、临床分期越早的患者中TGF-βRⅡ蛋白高表达的比例越高(均P<0.05),而与患者年龄、淋巴结转移、组织学类型及分级等无关(均P>0.05)。结论 TGF-βRⅡ基因在乳腺癌组织中呈低表达,且与肿瘤大小、临床分期有关,检测TGF-βRⅡ的表达对评估乳腺癌生物学行为及预后具有较重要的临床意义。

内蒙古绒山羊miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在绒毛生长周期中的表达规律研究

为探究miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在内蒙古绒山羊绒毛生长周期中的差异表达对绒毛生长的影响,选取内蒙古优质品种阿尔巴斯白绒山羊绒毛生长的休止期、生长初期、生长旺盛期及退行期的体侧皮肤,提取总RNA,经DL2000紫外光度计和琼脂糖凝胶检测其纯度和浓度后,选取S-18S基因为内参,利用Primer 5设计相应的引物序列,通过实时荧光定量的方法对非编码miR-1298-5p与其潜在靶向基因TGF-βR1在绒毛不同生长时期皮肤的表达进行检测并通过△△Ct值法计算。结果表明:miR-1298-5p及TGF-βR1基因在阿尔巴斯白绒山羊皮肤4个不同发育时期均有表达;miR-1298-5p、TGF-βR1基因由绒毛生长初期到旺盛期表达量均增高,miR-1298-5p由旺盛期到退行期表达量增高,退行期到休止期降低;TGF-βR1基因由旺盛期到退行期表达量降低,退行期到休止期增高,二者表达量呈相反趋势,推测miR-1298-5p可能通过负向调控TGF-βR1基因在皮肤不同发育时期的表达,从而调控内蒙古绒山羊绒毛的生长。

急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中TGF-β1及其受体TGF-βR1的表达水平:与单纯伤口愈合的定量对比研究

为研究TGF-β1及其受体TGF-βR1在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达水平及对溃疡形成、发展、愈合的影响,我们采用雌性Wistar大鼠,以60Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,并以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型,观察病变55天,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平。研究发现,照后14天照射野内开始出现皮肤溃疡,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平均较正常皮肤组织明显增强,与单纯伤口组比较,溃疡床的TGF-β1及TGF-βR1阳性细胞数量明显减少,阳性强度减弱不明显。表明放射性皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的表达水平降低可能与溃疡发生、发展及难愈合的分子机制相关。

TGF-βRⅡ在肺癌中的表达及意义

探讨转化生长因子βⅡ型受体(transforming growth factor-beta receptor II,TGF-βRⅡ)在肺癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学检测58例肺癌组织标本和30 例良性肺疾病肺组织标本中TGF-βRⅡ 的表达情况,并分析其不同临床病理特征中表达的差异。结果:TGF-βRⅡ在肺癌组织中的表达下调,明显低于正常肺组织,差异有统计学意义( P <0.05) ;TGF-β RⅡ表达与肺癌患者的病理组织学类型,TNM 分期,淋巴结转移密切相关( P<0.05) ,与年龄、性别均无关( P>0.05)。结论:TGF-β RⅡ在肺癌的发生和发展中发挥重要作用。

肠癌患者组织中MIC-1及TGF-βRⅡ的表达及其与食欲减退的相关性研究*

目的探讨肠癌患者组织中MIC-1、TGF-βRⅡ的表达及其与患者食欲减退的相关性。方法采用免疫组化法测定3个月前后34例晚期肠癌患者组织中MIC-1、TGF-βRⅡ的表达,并进行食欲评分、体重指数计算以及相关性分析。结果研究前34例患者MIC-1及TGF-βRⅡ的表达分别为6.00±1.09和7.44±0.95,3个月后有6例患者死亡,MIC-1表达升高为8.66±1.25,而TGF-βRⅡ表达下降至5.04±0.78,前后比较差异均有显著意义(P【0.01)。MIC-1与食欲评分及体重指数呈负相关;TGF-βRⅡ与食欲评分及体重指数呈正相关(P【0.01)。结论随着肠癌病情的进展,组织内MIC-1表达升高,而TGF-βRⅡ表达下降,两者与食欲减退和体重下降密切相关,是导致晚期肠癌患者食欲减退和体重下降的原因之一。

TGF-βRⅡ和NF-κB在口腔鳞状细胞癌的表达及临床意义

目的 :检测核因子κappa-B(Nuclear Factorκappa-B,NF-κB)和转化生长因子βⅡ型受体(transforming growth factorβreceptorⅡ,TGF-βRⅡ)在口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨两者与口腔鳞癌之间的关系及意义。方法 :收集2010年7月—2011年7月在治疗的60例OSCC患者信息,应用免疫组织化学方法 ,检测60例口腔鳞癌组织、20例癌旁组织、29例转移淋巴结组织和10例炎性淋巴结组织中NF-κB和TGF-βRⅡ的表达。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:NF-κB在口腔鳞癌原发灶和转移淋巴结中的表达显著高于癌旁正常组织和炎性淋巴结组织(P<0.05)。TGF-βRⅡ在口腔鳞癌原发灶和转移淋巴结中表达显著低于癌旁正常组织和炎性淋巴结组织(P<0.05)。NF-κB和TGF-βRⅡ呈负相关关系(P<0.05)。分化程度低、病理分级高和有淋巴结转移的口腔鳞癌患者,NF-κB显著高于分化程度高、病理分级低和无淋巴结转移者(P<0.05)。NF-κB与口腔鳞癌患者的预后相关(P<0.05)。结论:NF-κB和TGF-βRⅡ呈负相关关系,与口腔鳞癌的发生、发展和转移有关;NF-κB与患者预后相关;NF-κB可能通过下调TGF-βRⅡ的表达,促进血管生成而促进肿瘤的生长和转移。

论新止骨增生丸通过抑制IL-1β对TGF-β/Smad信号通路下TGF-βR1、Smad2表达影响及作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测方法,观察新止骨增生丸对大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞的作用机制及对细胞凋亡的影响,并讨论新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法SPF级6月龄大鼠24只,随机分为两组,空白对照组6只,模型复制组18只。模型复制组大鼠采用前后交叉韧带离断术复制骨性关节炎大鼠模型,模型复制成功后,将该组大鼠再次随机分为3组:模型对照组(6只)、中药组(6只)及西药对照组(6只)。连续治疗6周后,取整个膝关节,分离软骨组织。膝关节病理切片HE染色法观察各组软骨细胞状态,采用WB法检测各组大鼠膝关节软骨组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、白细胞抑制因子2(Smad2)蛋白表达,采用SPSS 16.0软件包对WB法检测结果进行方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经新止骨增生丸治疗后KOA症状减轻。(2)WB检测结果:模型对照组IL-1β、TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较空白对照组明显上调(均P<0.05);中药组、西药对照组IL-1β蛋白表达水平较模型对照组呈现明显下调(均P<0.05),且中药组变化最为显著;中药组、西药对照组TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较模型对照组呈现明显上调趋势(均P<0.05)。结论新止骨增生丸能够抑制IL-1β表达,激活TGF-β/Smad信号通路以上调TGF-βR1、Smad2蛋白表达,且中药组变化最为显著,达到治疗膝骨性关节炎的效果。

巢式实时荧光定量PCR检测RA患者外周血单个核细胞TGF-βRⅡmRNA

目的建立检测人外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)mRNA实时荧光定量PCR方法,并探讨其在RA中的临床意义。方法跨内含子设计外引物,并根据扩增片段,设计一对内引物,采用巢式实时荧光定量PCR(nested-real-time-PCR)方法。首次扩增采用减少引物、酶浓度、及循环次数的方法保持扩增片段的高度特异性,再进行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,同时以β-actin作内参,二者比值作为TGF-βRⅡ表达水平指标。结果Ct值和模板起始浓度对数值之间具有良好的线性关系(r2=0.999);检测最低浓度可达101拷贝。RA患者组和健康对照组的TGF-βRⅡ与β-actin的比值分别为0.45±0.11和0.37±0.10,两者有显著差异(P<0.01);RA治疗前、后两者比值分别为0.46±0.11和0.40±0.11,治疗后下降13.0%。结论巢式实时灾光定量PCR检测PBMC中TGF-βRⅡmRNA的方法简便,特异,重复性好,可信度高,其表达水平对RA具有一定的诊断价值,并可作为评价该病治疗效果的一种方法。