内蒙古绒山羊miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在绒毛生长周期中的表达规律研究

为探究miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在内蒙古绒山羊绒毛生长周期中的差异表达对绒毛生长的影响,选取内蒙古优质品种阿尔巴斯白绒山羊绒毛生长的休止期、生长初期、生长旺盛期及退行期的体侧皮肤,提取总RNA,经DL2000紫外光度计和琼脂糖凝胶检测其纯度和浓度后,选取S-18S基因为内参,利用Primer 5设计相应的引物序列,通过实时荧光定量的方法对非编码miR-1298-5p与其潜在靶向基因TGF-βR1在绒毛不同生长时期皮肤的表达进行检测并通过△△Ct值法计算。结果表明:miR-1298-5p及TGF-βR1基因在阿尔巴斯白绒山羊皮肤4个不同发育时期均有表达;miR-1298-5p、TGF-βR1基因由绒毛生长初期到旺盛期表达量均增高,miR-1298-5p由旺盛期到退行期表达量增高,退行期到休止期降低;TGF-βR1基因由旺盛期到退行期表达量降低,退行期到休止期增高,二者表达量呈相反趋势,推测miR-1298-5p可能通过负向调控TGF-βR1基因在皮肤不同发育时期的表达,从而调控内蒙古绒山羊绒毛的生长。

急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中TGF-β1及其受体TGF-βR1的表达水平:与单纯伤口愈合的定量对比研究

为研究TGF-β1及其受体TGF-βR1在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达水平及对溃疡形成、发展、愈合的影响,我们采用雌性Wistar大鼠,以60Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,并以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型,观察病变55天,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平。研究发现,照后14天照射野内开始出现皮肤溃疡,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平均较正常皮肤组织明显增强,与单纯伤口组比较,溃疡床的TGF-β1及TGF-βR1阳性细胞数量明显减少,阳性强度减弱不明显。表明放射性皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的表达水平降低可能与溃疡发生、发展及难愈合的分子机制相关。

论新止骨增生丸通过抑制IL-1β对TGF-β/Smad信号通路下TGF-βR1、Smad2表达影响及作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测方法,观察新止骨增生丸对大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞的作用机制及对细胞凋亡的影响,并讨论新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法SPF级6月龄大鼠24只,随机分为两组,空白对照组6只,模型复制组18只。模型复制组大鼠采用前后交叉韧带离断术复制骨性关节炎大鼠模型,模型复制成功后,将该组大鼠再次随机分为3组:模型对照组(6只)、中药组(6只)及西药对照组(6只)。连续治疗6周后,取整个膝关节,分离软骨组织。膝关节病理切片HE染色法观察各组软骨细胞状态,采用WB法检测各组大鼠膝关节软骨组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、白细胞抑制因子2(Smad2)蛋白表达,采用SPSS 16.0软件包对WB法检测结果进行方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经新止骨增生丸治疗后KOA症状减轻。(2)WB检测结果:模型对照组IL-1β、TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较空白对照组明显上调(均P<0.05);中药组、西药对照组IL-1β蛋白表达水平较模型对照组呈现明显下调(均P<0.05),且中药组变化最为显著;中药组、西药对照组TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较模型对照组呈现明显上调趋势(均P<0.05)。结论新止骨增生丸能够抑制IL-1β表达,激活TGF-β/Smad信号通路以上调TGF-βR1、Smad2蛋白表达,且中药组变化最为显著,达到治疗膝骨性关节炎的效果。

TGF-β1、TGF-βR1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系

目的:探讨TGF-β1、TGF-βR1及Smad4三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系,为乳腺癌发病和治疗机制提供理论和实验依据。方法:提取30例乳腺癌临床标本(经液氮、研磨等处理)和MCF-7、T47D、SKBR-3三种乳腺癌细胞(取指数增长期细胞)总RNA,反转录cDNA第一链,克隆TGF-βR1、Smad4基因片段,测定质粒浓度,制备标准样品,并作出标准曲线,探针法荧光定量PCR(FQ-PCR)检测TGF-βR1和Smad4基因mRNA表达。结果:FQ-PCR检测发现恶性程度高的SKBR-3细胞,其TGF-βR1和Smad4的基因拷贝数明显低于恶性程度低的MCF-7细胞(P均<0.01),T47细胞两种基因拷贝数介于两者之间。结论:随着乳腺癌细胞病理类型恶性程度增加,TGF-βR1和Smad4 mRNA表达逐步下降,表明TGF-β1和Smad4可能具有类似乳腺癌抑癌基因的作用。

抗PD-L1/TGF-βR融合蛋白(SHR-1701)增强弱淋巴细胞恢复力型肺癌免疫治疗敏感性及其机制研究

背景与目的目前已经研发出第二代程序性死亡受体1/程序性死亡配体1(programmed cell death-protein 1/programmed death-ligand 1,PD-1/PD-L1)抑制剂用于同时阻断PD-1/PD-L1和转化生长因子β/转化生长因子β受体(transforming growth factor-beta/transforming growth factor-beta receptor,TGF-β/TGF-βR),例如bintrafusp alfa(M7824)、SHR-1701和YM 101。因此,我们有必要确定对PD-1/PD-L1抑制剂耐药但对双抗药物敏感的肺癌患者的预测因素。本研究的目的是寻找这种预测因子。方法通过多因素Cox回归模型研究肺癌患者接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗后的临床结局与其淋巴细胞恢复能力之间的相关性。通过慢病毒转染使小鼠CMT167肺癌细胞系稳定表达萤火虫荧光素酶基因,并原位种植在同源小鼠的肺组织。利用生物发光成像、流式细胞术和免疫组织化学技术测定免疫治疗的有效性及肿瘤浸润免疫细胞的功能。结果对于接受抗PD-1/PD-L1抗体治疗的肺癌患者,弱淋巴细胞恢复力与较短的无进展生存期(PFS;P<0.001)、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的累积及外周血中CD8+T细胞的减少有关。化疗后淋巴细胞恢复力较弱的小鼠的肿瘤和外周免疫器官中CD8+T细胞与Treg细胞处于非平衡状态。这类小鼠对抗PD-1抗体无应答,但对抗PD-L1/TGFβR融合蛋白(SHR-1701)敏感。同时,SHR-1701(而非抗PD-1抗体)显著增强了淋巴细胞恢复力受损患者外周血CD8+T细胞中IFN-γ的产生和Ki-67的表达。结论弱淋巴细胞恢复力和既往化疗后持续性淋巴细胞减少的肺癌患者对抗PD-1/PD-L1抗体耐药,但可能对第二代药物(如SHR-1701)敏感。

辽宁绒山羊皮肤毛囊mir-1298-5p靶基因预测及表达载体构建

探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期mir-1298-5p的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为mir-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过mi RNA的分离、表达、靶基因预测筛选及靶位点3'UTR表达载体构建,采用RT-PCR进行表达检测,在线靶基因预测软件预测mir-1298-5p的靶基因,并对其靶基因TGF-βR1的靶位点进行克隆测序、缺失突变。结果表明:靶基因预测发现TGF-βR1的3'UTR存在mir-1298-5p种子区结合位点,且mir-1298-5p及其靶基因TGF-βR1均在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达。mir-1298-5p对皮肤毛囊周期性发育可能起到一定的调控作用,并成功构建了TGF-βR1 3'UTR表达载体,为后期过表达转染体系的建立和功能基因的验证奠定了基础。

豹皮樟总黄酮调控瘦素、TGF-β1对肝纤维化大鼠的预防作用研究

目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC)调控瘦素(leptin)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对肝纤维化大鼠的预防作用。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,TFLC灌胃给药第12周末,检测ALT、AST及HA、LN、PⅢNP、CⅣ含量;检测Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、瘦素、TGF-β1的含量;检测Hyp及组织病理变化;检测瘦素受体(OB-Rb)、TGFβ1Ⅰ型受体(TGFβR1)、Smad3 mRNA及蛋白表达。结果 TFLC(200、400 g.L-1)能明显降低肝纤维化大鼠肝纤维化指标及血清Ⅰ型胶原、瘦素、TGF-β1水平;降低Ob-Rb、TGFβR1、Smad3的mRNA及蛋白表达。结论 TFLC能有效预防CCl4诱导的大鼠肝纤维化,可能与下调肝内瘦素及其受体,抑制TGF-β1/Smad通路有关。

TGF-β1/Smad4在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的:探讨TGF-β1/Smad4信号通路与乳腺癌发生发展的关系。方法:采用荧光定量PCR技术、免疫组织化学技术对30例乳腺癌临床标本及恶性程度不同的乳腺癌细胞株中TGF-β1及Smad4的表达情况进行检测。结果:TGF-β1和Smad4mRNA表达及蛋白表达随着乳腺癌细胞恶性程度增加而逐步下降。结论:TGF-β1/Smad4信号通路参与了乳腺癌的发生、发展过程,TGF-β1/Smad4信号通路可能在乳腺癌演变中起抑制作用,与乳腺癌的恶性程度呈负相关。

TGF-β受体1和p38MAPK在绵羊不同部位皮肤中的表达差异

绵羊毛发的生长速度因部位的不同而存在差异,绵羊腹股沟及耳部的毛发生长速度慢,而背部的毛发生长速度快长。研究表明,多种因素会影响动物毛发的生长速度及其他性状,其中MAPK信号通路在皮肤发育及毛发生长过程中有一定的调控作用。应用免疫组织化学技术对TGF-β受体1及p38MAPK在绵羊背部、耳部以及腹股沟部皮肤的表达水平与定位进行研究,以探讨TGF-β受体1及p38MAPK与绵羊毛发生长发育的关系。结果显示,TGF-β受体1及p38MAPK在绵羊的背部、耳部与腹股沟部均有表达,且p38MAPK在背部表达量最多,耳部次之,腹股沟部最少;而TGF-β受体1在耳部毛囊中的表达量最高,腹股沟部次之,在背部毛囊中的表达量最低。研究结果提示,TGF-β受体1及p38MAPK可能与绵羊毛发的生长发育有关。

Apelin-13对2型糖尿病大鼠心肌纤维化防治的作用机制

目的通过建立2型糖尿病大鼠模型诱导心肌纤维化的发生,探究血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白的内源性配体亚型之一Apelin-13对糖尿病大鼠心肌纤维化防治作用的可能机制。方法高脂高糖喂养联合尾静脉注射小剂量链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型。48只Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组、模型组、Apelin-13组、阻断剂组(SB431542组)。各组大鼠给予相应干预措施12周,取材后行Masson染色,光镜下观察心肌细胞形态学改变及间质胶原纤维沉积情况,测算胶原容积分数(CVF),ELISA检测心肌组织内Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维含量,免疫组织化学染色分析心肌内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)和转化生长因子β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)的表达水平,Western blot检测下游信号蛋白smad2、p-smad2、smad3、p-smad3的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量明显升高,伴随信号通路蛋白TGF-β1、TβRⅠ、smad2、p-smad2、smad3、p-smad3表达增强(P<0.01);而与模型组相比,Apelin-13或SB431542干预的糖尿病大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量则明显下降(P<0.01),Apelin-13组各通路蛋白的表达均显著下调(P<0.01),而SB431542组TGF-β1、TβRⅠ的表达与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余信号蛋白的表达亦明显减弱(P<0.01)。结论外源性Apelin-13可抑制糖尿病大鼠心肌纤维化的发生,此作用是通过减弱TGF-β1/TβR/smads信号转导通路的过度激活得以实现的。

辽宁绒山羊皮肤毛囊miR-1298-5p靶基因预测及验证

以辽宁绒山羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,用生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RTPCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因TGF-βR1进行核酸水平表达检测,利用Weston blot对潜在靶基因TGF-βR1进行蛋白水平表达检测。生物信息学预测结果表明TGF-βR1的3′UTR存在miR-1298-5p种子区结合位点;miR-1298-5p在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达;TGF-βR1在皮肤毛囊不同发育时期无论在核酸水平还是蛋白水平均呈现差异性表达;miR-1298-5p与其潜在靶基因之间呈现一种负调控趋势,说明miR-1298-5p可能通过负调控TGF-βR1,从而对毛囊周期性发育起到调节作用。结合靶基因预测结果、miR-1298-5p在核酸水平表达规律及TGFβR1在核酸水平表达规律和蛋白水平表达规律初步确定TGF-βR1为miR-1298-5p的靶基因。本实验旨在探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5p与其靶基因的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为miR-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论研究数据。

转化生长因子βⅠ型受体在BPH组织中的表达及意义

目的 :探讨转化生长因子β 型受体 ( TGF-βR1)在良性前列腺增生症 ( BPH)组织中表达的意义。方法 :采用免疫组织化学方法研究 TGF- βR1在 31例 BPH组织中的表达。结果 :TGF- βR1在 BPH上皮、间质组织中的表达率显著高于正常前列腺组织 ( P<0 .0 5 )。结论 :TGF- βR1在 BPH组织中表达增高 ,尤其在上皮组织中的过度表达可能影响了 TGF-β对前列腺上皮细胞的抑制作用 ,可能参与了 BPH的病理变化过程。

粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义

目的探讨粘着斑激酶(FAK)在增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)中的表达和意义。方法运用细胞免疫组化技术,测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞(NSFB)中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1(TGF-βR1)及α肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α-SMA抗体进行阻断培养,并测定培养前后整合素α1、TGF-βR1、α-SMA及FAK的表达。结果与NSFB相比,HSFB中的FAK、整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达增高,差异具有显著意义(P<0.05)。分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α-SMA抗体进行阻断培养后,HSFB中的FAK表达下降(P<0.01);阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达降低(P<0.01)。结论FAK对整合素α1、TGF-βR1及α-SMA的蛋白合成具有重要的调控作用,与增生性瘢痕的发生、发展关系密切。减少FAK在成纤维细胞中的过度表达,可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径。

转化生长因子β1及其受体在正常及损伤性狭窄胆管壁中的表达

目的 探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)在损伤性胆管狭窄发生中的作用。 方法 通过免疫组化检测TGF - β1及其Ⅰ型受体 (TGF - βR1)在人正常胆管壁中及损伤性狭窄胆管壁中的表达。 结果 正常胆管壁中未检测到TGF - β1及TGF - βR1。在损伤性狭窄胆管壁中 ,大量炎细胞及少量成纤维细胞高表达TGF - β1,大量炎细胞及大量成纤维细胞高表达TGF - βR1。 结论胆管损伤后 ,其中的炎细胞及成纤维细胞产生了TGF - β1;TGF - β1可能由TGF - βR1介导通过自分泌及旁分泌机制 ,使TGF - β1不断产生 ,并使成纤维细胞表型改变、活化、增殖 ,胶原等基质不断合成堆积 ;TGF - β1可能在损伤性胆管狭窄发生中起了重要作用。

内镜超声、表皮生长因子受体、转化生长因子β_1受体检查在大肠癌诊断中的价值

目的研究术前内镜超声检查(EUS)及表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子 β1 受体(TGF βR1)表达在大肠癌术前分期诊断中的价值。方法对35例大肠癌患者进行了EUS ,并对其活检组织用免疫组化法检测了EGFR、TGF βR1 的表达。结果EUS诊断大肠癌有无淋巴结转移准确率为77 % ,术前TNM分期与术后病理Dukes分期对照 ,准确率为74 %。35例中EGFR表达阳性17例 ,有淋巴结转移者阳性率明显高于无淋巴结转移者 ,分别为80 % ,25 %(P<0.01)。TGF βR1 的阳性表达为54 % ,并与大肠癌淋巴结转移存在负相关性(P<0.05) ,与大肠癌Dukes分期存在负相关性(P<0.05)。与术后病理对照 ,EUS及EGFR、TGF βR1 在大肠癌淋巴结转移方面的判断是一致的。结论EGFR、TGF βR1 均是可反映大肠癌生 物学行为的指标。将两种受体的检测与EUS结合起来 。

转化生长因子-β受体Ⅰ及其mRNA在慢性乙型肝炎肝组织中的表达及临床意义

目的：研究转化生长因子-β受体Ⅰ（transforming growth factor-β receptor Ⅰ，TGF-βRⅠ）及其mRNA在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）肝组织中的表达及与肝组织病理改变和临床的关系。 方法：采用免疫组织化学及核酸原位杂交等技术观察了48例CHB患者肝组织中TGF-βRⅠ及其mRNA的表达。 结果：TGF-βRⅠ表达于肝细胞、窦内皮细胞及胆管上皮细胞，以肝细胞为主，呈细颗粒型及胞膜型分布。随肝组织炎症程度及纤维化程度加重，TGF-βRⅠ表达增强，相关系数分别为0.7095（P＜0.05＝和0.6915（P＜0.05＝。连续切片同步观察发现TGF-βRⅠ mRNA与其受体蛋白的表达在阳性细胞数量及分布上基本一致。TGF-βRⅠ的表达与TBil（r＝0.3396，P＜0.05＝、PA（r＝-0.3430，P＜0.05＝及ALB（r＝-0.4173，P＜0.01＝明显相关。 结论：TGF-βRⅠ在CHB肝损伤过程中可能起一定作用。